细菌生化试验
实验五 细菌的生化试验
酵管中，置37℃培养48h后，取出培养液加入甲基 红试剂2-3滴，观察结果。
[结果判定] ：培养液变红色，反应阳性，用+表示；
培养液不变色，反应阴性，用-表示。
4.乙酰甲基甲醇试验（V-P试验）
[基本原理]：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进 一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧 化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。
标记气室示意图
二 实验内容
（一）病毒的鸡胚分离培养
1.鸡胚：9-10日龄健胚
2.病毒：NDⅣ-Lasota株，100×稀释，加双抗各 5000单位/ml，室温下30min或4℃过夜
3.接种部位：尿囊腔接种
4.接种量：0.1-0.2ml/胚
5.接种步骤：照蛋→标记→打孔→接毒→封孔→37 ℃孵化箱中继续孵化，及时照蛋，24h内死胚丢 弃，以后死亡者随时取出，冷藏，120h不死者， 冻死。
[结果判定]：
溴甲酚紫是一种酸碱指示剂，在中性时为紫色，碱 性时为深红色，而在酸性时呈现黄色。
紫色无气泡，既不产酸也不产气，用-表示； 黄色无气泡，产酸不产气，用+表示； 黄色有气泡，产酸产气，用⊕表示。
2.吲哚（靛基质）试验
[基本原理]：有些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨 中的色氨酸形成吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯 甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验主要 用于肠道杆菌的鉴定。
[试验方法]：将待检菌液接种到葡萄糖蛋白胨水微 量发酵管中，置于37℃培养48h，取出后加入VP 试剂甲液3滴，乙液各1滴，充分摇动，静置1530分钟后，观察实验结果。
[结果判定]：管内变红色为阳性，用+表示； 管内不变色为阴性，用-表示。
细菌的生化试验
细菌的生化试验目的要求了解细菌生化试验的原理、方法及在细菌鉴定中的意义。
仪器及材料温箱、接种环、酒精灯、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、醋酸铅蛋白胨水培养基、柠檬酸盐琼脂斜面培养基、MR试剂、VP试剂、靛基质试剂、大肠杆菌、产气杆菌、沙门氏菌的24h纯培养物等。
方法与步骤细菌的生化试验，就是通过用生物化学的方法分析细菌的代谢产物来鉴别细菌的试验。
下面是几种常用的生化试验。
只有纯培养的细菌才能用来做生化试验。
1．糖发酵试验将细菌无菌操作接种于糖发酵培养基中，于37℃培养24～48h，结果：只产酸(＋)，产酸产气(⊕)，不发酵(-)。
2．甲基红(MR)试验与维－培(VP)试验取菌接种于2支含0.5%葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37℃温箱培养4d，分别作甲基红和维－培试验。
（1）甲基红试验取上述培养基一支，加入甲基红试剂(甲基红0.1g溶于95%酒精300ml中)5～6滴，液体呈红色者为阳性，黄色者为阴性，橙色者为可疑。
（2）维－培试验取上述培养基一支，先加维－培甲液(6%α－甲萘酚酒精溶液)3ml，再加入维－培乙液(40%氢氧化钾水溶液)1ml，混和后静置于试管架内观察2～4h，凡液体呈红色者为阳性，不变色者为阴性。
3．靛基质试验有些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质(吲哚)，遇相应试剂而呈红色。
试验时，取菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养2～3d；于培养基中加入戊二醇或二甲苯2～3ml，摇均，静置片刻后，沿试管壁加入靛基质试剂(配法：对二甲基氨基苯甲醛1.0g，95%酒精95ml溶解后，再加浓盐酸50ml)2ml，若能形成玫瑰靛基质而呈红色，则为阳性反应，不变色为阴性反应。
4．HS试验某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸如半胱氨酸等产生硫化氢，硫化2氢遇醋酸铅或硫酸亚铁则形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。
用接种针取菌穿刺于含有醋酸铅或硫酸亚铁的琼脂培养基中，37℃培养4d，凡沿穿刺线或穿刺线周围呈黑色者为阳性，不变色者为阴性。
细菌的生化实验报告
细菌的生化实验报告细菌的生化实验报告细菌是一类微小而广泛存在于自然界中的生物体，它们在地球上的生物圈中起着重要的作用。
通过对细菌的生化实验，我们可以更深入地了解它们的生物特性和功能。
本文将介绍一系列细菌的生化实验，包括细菌的酶活性、代谢产物以及对环境的影响等方面。
实验一：酶活性研究酶是细菌体内的重要生物催化剂，它们参与了多种代谢过程。
我们可以通过测定细菌体内特定酶的活性来了解其代谢能力。
以大肠杆菌为例，我们可以使用酶活性检测试剂盒来测定其β-半乳糖苷酶活性。
实验结果显示，大肠杆菌中β-半乳糖苷酶活性较高，这表明其在代谢乳糖方面具有较强的能力。
实验二：代谢产物分析细菌的代谢过程会产生各种化合物，这些化合物可以作为细菌代谢的指标。
我们可以通过气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）来分析细菌培养液中的代谢产物。
以枯草杆菌为例，通过GC-MS分析，我们发现其培养液中存在着丰富的有机酸和氨基酸，这些代谢产物反映了枯草杆菌的代谢途径和能力。
实验三：抗生素敏感性测试细菌对抗生素的敏感性是临床治疗中的重要指标。
我们可以通过纸片扩散法来测试不同细菌株对不同抗生素的敏感性。
实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素敏感，而对庆大霉素耐药。
这些结果对于合理使用抗生素和治疗细菌感染具有重要的指导意义。
实验四：细菌对环境的影响细菌在自然界中广泛存在，它们对环境有着重要的影响。
我们可以通过测定细菌在不同环境条件下的生长情况来研究其对环境的适应性。
以耐盐菌为例，我们可以将其分别培养在不同盐浓度的培养基中，观察其生长情况。
实验结果显示，耐盐菌在高盐浓度环境中生长较好，这表明其对高盐环境具有较强的适应能力。
细菌的生化实验为我们深入了解细菌的生物特性和功能提供了重要的手段。
通过研究细菌的酶活性、代谢产物以及对环境的影响，我们可以更好地理解细菌的代谢途径、生态角色以及与人类健康的关系。
这些实验结果对于开发新的抗菌药物、改良环境治理策略以及预防细菌感染具有重要的指导意义。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告细菌鉴定是微生物学中的一个重要分支，它是通过对细菌的形态、生理生化反应、生长特性等方面进行分析，来确定细菌种类的过程。
在细菌鉴定中，生理生化反应实验是一种常用的方法，它可以通过观察细菌在不同条件下的生长情况，来确定细菌的种类。
本文将介绍几种常用的生理生化反应实验。
1. 氧气需求实验氧气需求实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧气需求量。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧气浓度的培养基中，然后观察细菌的生长情况。
如果细菌只能在氧气充足的条件下生长，那么它就是一种需氧菌；如果细菌只能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种厌氧菌；如果细菌既能在氧气充足的条件下生长，也能在氧气缺乏的条件下生长，那么它就是一种兼性厌氧菌。
2. 糖类发酵实验糖类发酵实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌对不同糖类的发酵能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同糖类的培养基中，然后观察培养基的酸碱度变化。
如果培养基的酸碱度发生了变化，那么说明细菌对这种糖类进行了发酵。
通过这个实验，我们可以确定细菌对哪些糖类具有发酵能力，从而进一步确定细菌的种类。
3. 氧化还原实验氧化还原实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的氧化还原能力。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同氧化还原剂的培养基中，然后观察培养基的颜色变化。
如果培养基的颜色发生了变化，那么说明细菌对这种氧化还原剂具有反应能力。
通过这个实验，我们可以确定细菌的氧化还原能力，从而进一步确定细菌的种类。
4. 酶活性实验酶活性实验是一种常用的生理生化反应实验，它可以用来确定细菌的酶活性。
在这个实验中，我们需要将细菌接种到含有不同底物的培养基中，然后观察底物的变化情况。
如果底物发生了变化，那么说明细菌对这种底物具有酶活性。
通过这个实验，我们可以确定细菌的酶活性，从而进一步确定细菌的种类。
细菌的生化试验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。
方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。
”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
培养基：蛋白胨水蛋白胨1%氯化钠0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇95ml浓盐酸20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖0.5%磷酸氢二钾0.5%蛋白胨0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。
细菌的生化试验名词解释
细菌的生化试验名词解释细菌是一类微生物，广泛存在于自然界中。
它们是单细胞生物，无真正的细胞核，但却能够执行一系列生化反应。
研究细菌的生化试验是了解细菌的基本生物学特性和进行抗菌药物研发的重要手段。
以下是一些常见的细菌生化试验名词的解释。
1. 嗜热菌试验嗜热菌试验用于检测细菌是否具有耐热能力。
这个试验基于嗜热菌能够在高温环境下生长的特性。
通过将细菌接种在含有特定营养物质的培养基中，并在高温下孵育，观察细菌的生长情况，可以判断其是否为嗜热菌。
2. 酸酶试验酸酶试验用于检测细菌是否能够产生特定的酸酶。
这些酸酶可以将特定的底物分解为酸性产物，从而改变培养基的酸碱度。
通过观察培养基颜色的变化或使用酸碱指示剂，可以判断细菌的酸酶活性。
3. 氧化还原试验氧化还原试验用于检测细菌是否能够对底物进行氧化或还原反应。
这些反应可以生成或消耗氧分子，并产生可见的颜色变化。
通过添加特定的底物和指示剂，可以观察培养基的颜色变化，从而判断细菌的氧化还原能力。
4. 胶原酶试验胶原酶试验用于检测细菌是否能够分解胶原蛋白，一种存在于动物组织中的重要蛋白质。
这个试验基于胶原酶可以将胶原蛋白分解为小分子肽或氨基酸的特性。
通过观察培养基的透明圈或使用特定染料的变化，可以判断细菌是否具有胶原酶活性。
5. 大理石气试验大理石气试验是检测细菌是否具有尿素酶活性的方法。
尿素酶可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
这个试验基于细菌产生的氨可与酚红指示剂反应，使培养基呈现鲜艳的红色。
通过观察培养基的颜色变化，可以判断细菌是否具有尿素酶活性。
这些生化试验名词只是细菌研究中的一小部分，不同的试验可以提供不同的信息，从而深入了解细菌的特性。
在细菌学的研究中，这些试验通常与其他分析方法结合使用，以全面了解细菌的生化特性、代谢途径和致病机制，为抗菌药物研发和靶向治疗提供有力的依据。
通过深入研究细菌的生化特性，我们可以更好地理解它们的生存机制，并为人类健康和环境保护提供支持。
细菌的生化实验
细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1%1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1%分装10*100mm小试管，每管3-4ml，内置一密闭端向上的发酵管，10磅10分灭菌。
方法：用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果：产酸则培养基由兰紫变黄，用“+”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“☉”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理：指示剂溴甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
二、靛基质实验培养基：蛋白胨水蛋白胨 1%氯化钠 0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml，10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇 95ml浓盐酸 20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。
结果：乙醚层现红色为阳性，以“+”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖 0.5%磷酸氢二钾 0.5%蛋白胨 0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4滴。
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。
这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。
以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。
结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。
2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。
营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。
3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。
5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。
淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。
蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。
6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。
7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。
8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。
细菌 的生化反应
6.V-P试验
• 结果：数分钟内出现红色为阴性，如无红 色且35℃4h后仍不变为阴性 。
• 应用：常与甲基红试验一起使用，因为前 者为阴性，后者通常为阴性。
2、氧化-发酵试验（O/F试验）
• 结果：均无变化为产碱型或不分解糖型， 均产酸为发酵型，仅不加石蜡的培养基产 酸为氧化型。
• 应用：主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌 的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为 氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微 球菌的鉴别。
3、β-半乳糖苷酶（ONPG试验）
• 结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般 在20-30分钟内显色。
• 应用：主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细 菌的鉴定。变形杆菌属，肺炎克雷伯菌属， 摩根菌属，普罗威登斯菌属，幽门螺杆菌 和结肠耶尔森菌阳性，而斯氏和产碱普罗 威登菌阴性。
苯丙氨酸脱氨酶试验
• 结果：出现绿色为阳性。应立即观察结果， 反应时间过长会褪色。
• 应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变 形杆菌属，普罗威登斯菌属和摩根菌属为 阳性，肠杆菌科中其他细菌均为阴性。
细菌的生化反应
1、糖（醇，苷）类发酵试验
• 结果：若能分解糖（醇，苷）类产酸时， 培养基的指示剂呈酸性反应。若产气可使 液体培养基中倒管内或半固体培养基内出 现气泡，固体培养基内有裂隙等现象。若 不分解，培养基中除有细菌生长外，无任 何其他生长变化。
• 应用：鉴定细菌最主要和最基本的试验， 特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
1、明胶液化试验
• 结果：培养基呈液化状态为阳性。 • 应用：肠杆菌科细菌的鉴别，如普通变形
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验
![[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验](https://img.taocdn.com/s3/m/1967ad89f01dc281e43af093.png)
[实验六细菌的生化试验]细菌的生化实验实验六细菌的生化试验目的要求1．通过本试验加深对细菌生化反应原理和意义的理解；2．掌握常规细菌生化试验操作方法。
操作步骤一、糖类发酵（分解）试验原理：细菌含有分解不同蔗糖（醇、苷）类的酶，因而分解各种糖（醇、苷）类的能力也不必一样。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由兰变黄（指示剂溴指示剂麝香草酚兰由兰遇酸福兰县的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为兰色。
（一）适用于需氧菌的方法培养基用邓亨氏（Dunham）蛋白胨水溶液（蛋白胨1g，氯化钠0.5g，水100ml，pH7.6按0.5～1％的比例分别加入各种辣椒），每100ml加入1.2ml的0.2％溴麝香草酚蓝（或用1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml）作指示剂。
分装于试管（每一个试管事先都加有一枚倒立的小发酵管），10磅高压灭菌10分钟。
如在培养基中加入琼脂达0.5～0.7％，则成半固体，可省去倒立的小失水管。
0.2％溴麝香草酚蓝溶液配法：溴麝香草酚蓝 0.2g0.1N NaOH 5ml蒸馏水 95ml方法：从琼脂斜面的纯培养物上，用接种环取少量被检细菌接种于糖发酵管培养基中（如为半固体，应穿刺），在37℃培养，一般观察2～3天，观察时用上述符号标记之。
（二）适用于厌氧菌的方法培养基：蛋白胨 20g氯化钠 5g琼脂 1g1.6％硫甲酚紫酒精溶液 1ml糖 10g硫乙醇酸钠 1g蒸馏水 1000ml将胨、盐、硫乙醇酸钠、琼脂和水放于水槽内，加热使融化，再加入所需的糖，调整pH到7.0，加入指示剂，分装试管，在10磅高压灭菌15分钟后，做成高层。
方法将厌氧菌的培养物用穿刺接种法接种于上述培养基的深部，于37℃培养。
结果观察同需氧菌。
二、V－P试验（二乙酰试验）原理：某些细菌能从葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇（Acetymethyl carbinol）→2，3-丁烯二醇（2，3-bytaylene cylycol），在有碱阿提斯鲁夫尔谷存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用，会带来粉红色的化合物。
常用细菌生化反应试验
不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
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检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验
细菌生化反应实验报告
细菌生化反应实验报告细菌生化反应实验报告引言：细菌是微生物界中最常见的生物之一，它们在自然界中广泛存在。
通过深入研究细菌的生化反应，我们可以更好地了解它们的生存机制和对环境的影响。
本实验旨在探究细菌的生化反应过程，并分析其对环境的影响。
实验材料与方法：1. 细菌培养基：含有适当营养成分的培养基，提供细菌生长所需的营养物质。
2. 培养皿：用于培养细菌的容器。
3. 细菌菌株：选择常见的大肠杆菌作为实验菌株。
4. 实验仪器：包括离心机、显微镜等。
5. 实验步骤：包括细菌培养、取样、离心、显微镜观察等。
实验结果与讨论：1. 细菌生长曲线：在培养基中培养细菌，我们观察到细菌的生长呈现出典型的生长曲线，即潜伏期、指数增长期、平台期和死亡期。
这表明细菌的生长过程受到多种因素的调控，包括营养物质的可利用性、环境条件等。
2. 细菌代谢产物：通过分析培养基中的代谢产物，我们发现细菌在生长过程中会产生一系列的代谢产物，如有机酸、氨气等。
这些代谢产物不仅反映了细菌的生化反应过程，还对环境产生一定的影响。
例如，有机酸的产生可能导致培养基的酸碱度变化，从而影响到其他微生物的生长。
3. 细菌形态和结构：通过显微镜观察，我们可以看到细菌的形态和结构。
大肠杆菌呈现出长条状的形态，表面覆盖着细菌鞭毛和菌毛。
这些结构对细菌的运动和附着起着重要作用，使其能够更好地适应不同的环境。
实验结论：通过本次实验，我们深入了解了细菌的生化反应过程。
细菌的生长曲线、代谢产物以及形态结构都反映了细菌的生存机制和对环境的影响。
进一步研究细菌的生化反应有助于我们更好地理解微生物界的生态系统，并为环境保护与微生物应用领域提供理论依据。
未来展望：在今后的研究中，我们可以进一步探究细菌的生化反应机制，包括细菌的代谢途径、酶的作用机制等。
此外，我们还可以研究不同菌株在不同环境条件下的生化反应差异，以及细菌与其他微生物之间的相互作用。
这些研究将有助于揭示微生物界的奥秘，为生物技术和环境保护提供更多的可能性。
生化试验
（三）生化试验的方法
1. 在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、
培养后,观察培养基的PH值变化。
2. 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢
产物所生成的颜色反应。
3. 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。
4. 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察 细菌的生长情况。
（四）生化试验的注意事项
1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为 24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌 落分别进行试验。
（1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈
淡红色为弱阳性，记MR +；
（2）呈橘黄色或黄色为阴性， 记
MR -，迄至发现阴性并培养至第5 天仍为阴性，即可判定结果。
MR +
MR -
（五） 七叶苷水解试验
１、原理：七叶苷被细菌分解后，生 成葡萄糖和七叶素，七叶素与Fe2+ 结合，生成黑色化合物，使培养基
呈黑色，以此鉴别细菌。
3、结果观察和记录
记录： • 产酸不产气，阳性，以“+”表示 • 产酸产气，阳性，以“⊕”表示
• 不产酸产气，阴性，以“-”表示
气 泡 导 管
气 泡
阳性
阳性
阴性
（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验
1、原理：
细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。
氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，
（2）贝立脱法：
将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水 培养基，于36±1℃培养2天，每2ml培养液 先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1ml，再加40% 氢氧化钾水溶液0.4ml，摇动2~5min，阳性 菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于 室温或36±1 ℃培养 4h ，如显现红色为阳性，
细菌的生化反应
添加标题
葡萄糖
添加标题
丙酮酸
添加标题
乙酰甲基甲醇
添加标题
二乙酰
添加标题
P试剂
添加标题
培养基变红
添加标题
P试验
添加标题
与蛋白胨培养基精氨酸中的胍基 反应生成红色化合物
01
[方法]
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03
[结果]
单击此处添加小标题
02
取出试管培养物，加入等量的李氏试剂，摇匀后不加塞，静置30分钟观察结果。
P试验
蛋白质和氨基酸代谢试验
硫化氢试验
吲哚试验
甲基红试验
Байду номын сангаас
[原理]
大肠杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸后进行混合酸发酵，产生乳酸、甲酸、乙酸、琥珀酸等多种有机酸，使培养液pH小于4.5，甲基红指示剂呈红色，为甲基红试验阳性。
产气杆菌分解葡萄糖产生丙酮酸，经脱羧后生成中性乙酰甲基甲醇，培养液的pH大于5.4，甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性。
葡萄糖
甲基红试剂
培养基橘黄色
丙酮酸
大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
甲基红试验
乙酰甲基甲醇（中性）
pH＞5.4
滴加甲基红指示剂数滴，立即观察结果
贰
[方法]
壹
红色为阳性，+ 不出现红色为阴性，-
肆
[结果]
叁
V－P试验
[原理]
产气杆菌利用葡萄糖时产生中性物质之一就是乙酰甲基甲醇，它在碱性溶液中被空气中的分子氧氧化生成二乙酰，二乙酰与培养基中的含胍基的化合物反应，生成红色化合物，是VP试验阳性；而大肠杆菌不能产生乙酰甲基甲醇，为阴性。
细菌的生化反应
1. 葡萄糖酸盐试验1)原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成α-酮基葡萄糖酸。
α-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质，可与班氏试剂起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏试剂1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷却，观察结果。
(3)结果：出现黄到砖红色沉淀为阳性。
不变或仍为蓝色为阴性。
(4)应用：主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。
帮助属间鉴别、种间鉴别和沙雷菌属菌种的鉴定。
取待检菌大量接种培养基，35 ℃培养24-48h ，加斑氏试剂1ml，充分混匀，隔水加热煮沸10min ，观察结果。
产生黄-橙色沉淀为阳性，蓝色沉淀为阴性（5）质量控制肺炎克雷伯菌A TCC 27236阳性；大肠埃希菌A TCC 25922 阴性2 粘液酸利用试验培养基用于无动力不产气不发酵乳糖的大肠埃希菌与志贺菌属的鉴别。
前者多数为阳性，后者均为阴性取试验菌株18-24h 肉汤培养物1 环接种培养基。
35 ℃孵育1-2 周，每天观察结果。
培养基呈黄色为阳性表明细菌能利用粘液酸盐；若培养基不变色则为阴性[质量控制]大肠埃希菌A TCC 25922 阳性；痢疾志贺I 型A TCC 13313阴性3. 醋酸钠利用试验(1)原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源，同时，利用醋酸盐作为唯一碳源时，可在醋酸盐培养上生长，分解醋酸盐生成碳酸钠，使培养基变为碱性。
（2)方法：将被检菌接种于醋酸盐培养基中，置35℃孵育2~7d，逐日观察结果。
(3)结果：培养基上有细菌生长，并变为蓝色为阳性。
（4）应用：主要用于大肠埃希菌和志贺菌属的鉴别，前者为阳性，而后者为阴性。
4. 葡葡糖铵培养基（1）成分：氯化钠5g硫酸镁（MgSO4•7H2O）0.2g磷酸二氢铵1g 磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000ml0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml pH6.8（2）制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
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1糖类发酵试验
（1）培养基
需氧菌适用的培养基配方：蛋白胨1g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，糖物质0.5-1g ，0.2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2ml
配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.4-7.6，加入指示剂混匀，分装试管。
管内事先装有倒置的小玻璃管。
经高压灭菌20min。
厌氧菌糖发酵培养基
配方：蛋白胨20g，氯化钠5g，糖物质10g，硫乙醇酸钠1g，琼脂1g，蒸馏水1000ml， 1.6%溴甲酚紫酒精溶液水溶液1ml
配制：除指示剂外，溶解各成分，调ph值为7.2-7.4，加入指示剂，高压灭菌。
血清半固体糖发酵培养基
配方：0.3%肉膏100ml，琼脂0.3g，糖物质0.5-1g，0.5%酸性复红2ml，兔血清或小牛血清10ml。
配制：争取0.3%肉膏100ml，加入琼脂，煮沸融化后，加入糖类物质及指示剂，高压灭菌，待培养基冷至50℃左右，缴入经56℃灭活30min的兔血清10ml，分装于无菌试管，无菌检查后备用。
(2)恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸以及接种针等。
实验步骤：
（1）按照上述的培养基配方，根据需要选择配制培养基，高压灭菌并作无菌检查后备用。
（2）取培养18-24h的试验菌，接种于培养基中，置于37℃培养数小时至2周后观察结果。
（3）结果记录：指示剂由紫色变为黄色，表示糖类发酵产酸，以“+”表示；
若指示剂由紫色变为黄色且试管内倒置的小管内有气泡出现，则表示产酸产气，以“o+”表示；若指示剂颜色未改变，则表示对糖类不发酵，以“-”表示。
2甲基红（MR）试验
器材准备
（1）培养基：葡萄糖蛋白胨水
配方：蛋白胨0.7g，磷酸氢二钾0.5g，葡萄糖0.5g，蒸馏水0.5g。
配制：将上述各成分混于蒸馏水中，加热溶解，调pH值为7.2-7.4，滤纸滤过，分装于小试管内，每管3-5ml，加塞包好，高压灭菌。
（2）试剂：甲基红0.02g 、95%酒精60ml，蒸馏水40ml.
（3）恒温培养箱、高压锅、电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环。
实验步骤
（1）将待检菌接种于培养基中，置于37℃培养48h。
（2）取少量培养液于另一个试管中，加入几滴指示剂，观察颜色变化，若无颜色变化可继续培养4-5d再进行试验。
（3）结果判定：培养液呈现红色，为甲基红试验阳性，呈现黄色者为阴性。
3维培二氏试验（VP试验）
器材准备
（1）培养基：同MR试验。
（2）试剂
奥梅拉氏试剂：0.3g肌酸或肌酐溶于100ml40%氢氧化钾即成。
贝立脱氏试剂：甲液为6% a-萘酚酒精溶液，乙液为16%氢氧化钠溶液。
硫酸铜试剂：1g硫酸铜溶于40ml氨水中，再加10%氢氧化钠至1000ml。
（3）恒温培养箱，高压锅，电炉、搪瓷缸、玻棒以及接种环等。
试验步骤
（1）将被检细菌接种到葡萄糖蛋白胨水中，置于37℃培养48h。
（2）在培养物中加入等量的奥梅拉氏试剂，混合，或1ml培养物加入0.5ml贝立脱氏试剂甲液和乙液振荡混合，观察结果。
（3）结果判定：在0.5min内呈现粉红色反应为阳性；长时间无反应，置于37℃培养4h或室温过夜，颜色仍不变者为阴性。
4，硫化氢试验
器材准备
（1）培养基
醋酸铅琼脂培养基（一）配方：肉汤琼脂100ml。
硫代硫酸钠0.25g，10%的醋酸铅水溶液3ml。
配制：加热融化肉汤琼脂，冷至60℃，加入硫代硫酸钠，使其溶解。
调节pH值至7.2，高压灭菌，取出冷至60℃时加入预防灭菌的10%的醋酸铅水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。
醋酸铅琼脂培养基（二）配方：蛋白胨20g，磷酸氢二钠2g，葡萄糖1g，琼脂2g，10%的醋酸铅水溶液2ml,蒸馏水1000ml。
配制：将除醋酸铅以外的各成分混合于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.0-7.4，然后加入醋酸铅水溶液，混合均匀，分装试管内，高压灭菌，取出摇匀，直立凝固呈柱状。
三氯化铁明胶培养基配方：硫胨25g，氯化钠5g，牛肉膏7.5g，明胶120g，10%三氯化铁水溶液5ml。
配制：将除三氯化铁水溶液以外的成分混合，加热融化并高压灭菌，趁热加入预先灭菌的10%三氯化铁水溶液，混匀，无菌分装小试管，直立凝固。
（2）恒温培养箱，高压锅，电炉，搪瓷缸等
（3）小试管。
玻棒、接种环以及pH试纸等。
实验步骤：
1醋酸铅琼脂法
（1）用接种针取待检细菌，沿培养基的试管壁作穿刺接种，37℃培养1-2d，必要时可延长5-7d。
（2）结果判定：延穿刺线的培养基变为黑色为阳性，否则为阴性。
2三氯化铁明胶培养基法
（1）用接种针取待检菌沿管壁作穿刺接种，37℃培养观察2-7d。
（2）结果判定：明胶变黑色为阳性，否则为阴性。
本文档原文来自于胡佳学主编的《兽医微生物学实验教程》，由本人整理获得。