芦丁与血清白蛋白结合作用的热力学研究(Ⅰ)
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文献 标 识 码 ：Ａ 文章 编 号 ： ０ ００ ９ （０ ８ ０ —８ ６０ １ ０ —５ ３ ２ ０ ）４０ ５ —４
中 图分 类号 ： １ ． Ｏ６４ ３
Ｏ Ｈ
引 言
ＨＯ
０Ｈ
黄酮类化合 物广 泛存 在于中药 和植 物中 ， 是具有 广泛药 理活性的天然 化合物ｌ 。芦 丁（ ｕｉ）３ ， ’５ ７四羟基 黄 １ ｊ Ｒｔ ｎ ’４ ， ，－
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基 金 项 目 ： 肃 省 自然 科 学 基 金 项 目（ ７０ Ｊ Ａ１ ８ 和甘 肃 省 高 分 子 材 料 重 点 实 验 室 项 目资 助 甘 ０ １ＲＺ ０）
一
作者简介 ： 栾尼娜 ， ，１ ７ 女 ９ ４年生 ， 西北师范大学化学 化工学 院讲师
＊通讯联 系人
ｅｍａｌ ｅｅｘＦ ２ ．ｏ － ｉ ｔｒｊｌ ６ ｃｒ ：ｐ ＠１ ｎ
芦 丁 与 血 清 白 蛋 白结 合 作 用 的 热 力 学 研 究 （ Ｉ）
栾尼娜 吴锦绣 。 宋玉 民ｈ， ， ， 吴 琼
１ ．西 北 师 范 大 学 化 学 化 工 学 院 ，甘 肃 兰 州 ７０ ７ ３０ ０
２ ．内蒙古科技大学稀土学院，内蒙古 包头
０ ４ １ １０ ０
摘
要
透 压起 重要 作 用 ，而 且 能 与 进 入 血 液 中 的 大 部 分 内源 性 和 外
１ 实验部分
１ １ 仪 器 和试 剂 ．
Ｌ －５荧光分光光度计（ 国 Ｐ ｒｉ ｌ ｒ 司） ＨＳ Ｓ５ 美 ｅｋｎＥｍｅ 公 ，ｐ －
２ 型 酸度 计 （ 海 第 二 分 析 仪 器 厂 ） Ｂ ８ ５ 上 ，Ｔ －５型 恒 温 器 （ 日本
７ ３ ｉ ＨＣ 缓冲溶液定容 ，在 一２ ０ｎｎ ／ 一３ ８ｎｎ ． ８Ｔｒ — １ ｓ ８ ｒ，＇ ｔ ｅ ｎ ｒ ４ ｒ 处扫描 Ｂ Ａ（ Ａ 荧光 光谱及 Ｂ Ａ（ Ａ） ｓ ＨＳ ） Ｓ ＨＳ 在芦丁存 在下的
收稿 日期 ：２０ —２０ 。 ０ ７０ —６ 修订 日期 ： ０ ７０—９ ２ ０ —５０
方 程求得 了结合反应 的热力学参数 。两者结合 的主要 作用力类 型是氢键 和 Ⅵｔ ｄ ｒ ａｓ 。 ｎ ｅ ｌ力 芦丁 在体 内能 ｗａ
够 被血清 白蛋 白存储 和转运 ，且结合 时对蛋 白质构 象无影 响。 关键词 芦丁 ； 牛血清 白蛋 白； 人血清 白蛋 白； 荧光光谱 ； 热力学参数
酮 一一 香 糖 苷 ， 名 芸香 苷 、紫 槲 皮 苷 ，是 槲 皮 素 的 ３（ 芸 ３芸 又 一） Ｉ
香糖苷（ 结构式见 图 １ ，天然植 物槐 米等 中药 的有 效成份 ， ） 属于黄酮类化合物 ，具有 维生素 Ｐ样 的作用 。据 医书记 载 ， 槐花有多种医药保健 功能 ，如《日华 子木草 》 中说槐 花“ 治五
在 生理 ｐ 值条件下 ， Ｈ 研究 了芦丁与牛血清 白蛋 白和人血清 白蛋 白之间的结合作用 。 通过荧光法确
定了芦丁与 血清白蛋 白的荧光猝灭机制 ， 根据 热力学方 程讨论 了两者 间的主要 作用力类 型 。芦丁对血 清 白 蛋 白的荧光猝灭 机制 为静态猝灭 。确定了不同温度下该 结合反 应 的结 合常数 和结合位 点数 ，并根据热 力学
岛津公 司） ，牛 血清 白蛋 白（ Ｓ 为 国药集 团化学试 剂有 限 Ｂ Ａ）
源性物质如药物 等进行可 逆的结合从而起到在体 内转运 的作 用。药物与 白蛋 白的亲 和力 大小 也影 响到 药物 在体 内的分
布、清理 以及通过改变血液或组织中游 离药物浓度来影 响药 效。因此 ， 研究药物 与血清 白蛋 白的结合作用 对理解药 物 的 作用机制具有重 要意义 ｌ ］ ４ 。关 于研 究芦 丁与血 清 白蛋 白作 用的紫 外一 可见 光谱和 荧光 光谱 法 已有 报道 ，本 文在 此基 ］
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第２ 卷 ， ４ ８ 第 期
２００８年 ４月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃ ｒ ｌ ｐｏ ． ８ Ｎｏ ４ ｐ ８ ６ ８ ９ １ ２ ， ． ，ｐ ５ — ５ Ａｐ ｉ，２ ０ ｒ ｌ ０８
础 上 ， 一 步 用 热 力 学 法 研 究 芦 丁 与 血 清 白蛋 白 的 作 用 机 进
公司产 品，人血清 白蛋 白（ Ａ） Ｈｓ 为华兰生物工程股份有限公
司产 品，芦 丁 （ ｕｉ） ｓ ｍａ公 司产 品，用 无水 甲醇配 成 Ｒｔ 为 ｉ ｎ ｇ １０ ０ 。 ｌ Ｌ ． ×１ － ｍｏ ・ 储备 液 ，配制 １ ０ｍｍｏ Ｌ Ｔｒ － １ Ｌ・ ｉ ＨＣ ｓ 缓 冲溶液 ，ｐ ． ８（ Ｈ ７ ３ 内含 ０ １ Ｌ・Ｌ Ｎａ ｌ 持离子 ． ５ｍｏ ～ Ｃ ，维 强度 ） 实验用水 为去离 子二次 蒸馏 水 ，其余 试剂 均为 分析 ，
ＯＨ
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Ｆｉ ．１ Ｓ ｒ ｔ ｒ ｆｒ ｉ ｇ ｔｕｃｕ ｅ ｏ ｕｔｎ
痔、 心疼 、眼疾 ” Ｊ 芦 丁是临床上广泛使 用的具有 高效 抗 一 。 ３
炎作用的药物，具有维持 血管抵抗 力 ，降低 其通 透性 ，减少 脆性等作用，其在临床上 主要用 于防治脑溢 血 ，高血压 ，视 网膜出血和治疗慢性气 管炎等疾病 。 血清白蛋 白是血浆 中最为 丰富的蛋 白质 ，不仅对 维持渗
纯。
１ ２ 荧 光 光 谱测 定 ．
制 ， 出了芦丁与血清 白蛋 白的结合 常数 、 得 结合 位点数 和结 合过程的基本热力学 参数 ，为芦 丁在体 内的储 存 、运输 、作
用机理及临床试验提供有用 的信息 。
在一 系 列 １ ０ｍＬ 的 比色 管 中 ，加 入 一 定 体 积 的 Ｂ Ａ Ｓ （ Ａ） 液 ，然后 依 次加 入 不 同体 积 的芦 丁 溶 液，以 ｐ Ｈｓ 溶 Ｈ
中 图分 类号 ： １ ． Ｏ６４ ３
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引 言
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黄酮类化合 物广 泛存 在于中药 和植 物中 ， 是具有 广泛药 理活性的天然 化合物ｌ 。芦 丁（ ｕｉ）３ ， ’５ ７四羟基 黄 １ ｊ Ｒｔ ｎ ’４ ， ，－
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基 金 项 目 ： 肃 省 自然 科 学 基 金 项 目（ ７０ Ｊ Ａ１ ８ 和甘 肃 省 高 分 子 材 料 重 点 实 验 室 项 目资 助 甘 ０ １ＲＺ ０）
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作者简介 ： 栾尼娜 ， ，１ ７ 女 ９ ４年生 ， 西北师范大学化学 化工学 院讲师
＊通讯联 系人
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芦 丁 与 血 清 白 蛋 白结 合 作 用 的 热 力 学 研 究 （ Ｉ）
栾尼娜 吴锦绣 。 宋玉 民ｈ， ， ， 吴 琼
１ ．西 北 师 范 大 学 化 学 化 工 学 院 ，甘 肃 兰 州 ７０ ７ ３０ ０
２ ．内蒙古科技大学稀土学院，内蒙古 包头
０ ４ １ １０ ０
摘
要
透 压起 重要 作 用 ，而 且 能 与 进 入 血 液 中 的 大 部 分 内源 性 和 外
１ 实验部分
１ １ 仪 器 和试 剂 ．
Ｌ －５荧光分光光度计（ 国 Ｐ ｒｉ ｌ ｒ 司） ＨＳ Ｓ５ 美 ｅｋｎＥｍｅ 公 ，ｐ －
２ 型 酸度 计 （ 海 第 二 分 析 仪 器 厂 ） Ｂ ８ ５ 上 ，Ｔ －５型 恒 温 器 （ 日本
７ ３ ｉ ＨＣ 缓冲溶液定容 ，在 一２ ０ｎｎ ／ 一３ ８ｎｎ ． ８Ｔｒ — １ ｓ ８ ｒ，＇ ｔ ｅ ｎ ｒ ４ ｒ 处扫描 Ｂ Ａ（ Ａ 荧光 光谱及 Ｂ Ａ（ Ａ） ｓ ＨＳ ） Ｓ ＨＳ 在芦丁存 在下的
收稿 日期 ：２０ —２０ 。 ０ ７０ —６ 修订 日期 ： ０ ７０—９ ２ ０ —５０
方 程求得 了结合反应 的热力学参数 。两者结合 的主要 作用力类 型是氢键 和 Ⅵｔ ｄ ｒ ａｓ 。 ｎ ｅ ｌ力 芦丁 在体 内能 ｗａ
够 被血清 白蛋 白存储 和转运 ，且结合 时对蛋 白质构 象无影 响。 关键词 芦丁 ； 牛血清 白蛋 白； 人血清 白蛋 白； 荧光光谱 ； 热力学参数
酮 一一 香 糖 苷 ， 名 芸香 苷 、紫 槲 皮 苷 ，是 槲 皮 素 的 ３（ 芸 ３芸 又 一） Ｉ
香糖苷（ 结构式见 图 １ ，天然植 物槐 米等 中药 的有 效成份 ， ） 属于黄酮类化合物 ，具有 维生素 Ｐ样 的作用 。据 医书记 载 ， 槐花有多种医药保健 功能 ，如《日华 子木草 》 中说槐 花“ 治五
在 生理 ｐ 值条件下 ， Ｈ 研究 了芦丁与牛血清 白蛋 白和人血清 白蛋 白之间的结合作用 。 通过荧光法确
定了芦丁与 血清白蛋 白的荧光猝灭机制 ， 根据 热力学方 程讨论 了两者 间的主要 作用力类 型 。芦丁对血 清 白 蛋 白的荧光猝灭 机制 为静态猝灭 。确定了不同温度下该 结合反 应 的结 合常数 和结合位 点数 ，并根据热 力学
岛津公 司） ，牛 血清 白蛋 白（ Ｓ 为 国药集 团化学试 剂有 限 Ｂ Ａ）
源性物质如药物 等进行可 逆的结合从而起到在体 内转运 的作 用。药物与 白蛋 白的亲 和力 大小 也影 响到 药物 在体 内的分
布、清理 以及通过改变血液或组织中游 离药物浓度来影 响药 效。因此 ， 研究药物 与血清 白蛋 白的结合作用 对理解药 物 的 作用机制具有重 要意义 ｌ ］ ４ 。关 于研 究芦 丁与血 清 白蛋 白作 用的紫 外一 可见 光谱和 荧光 光谱 法 已有 报道 ，本 文在 此基 ］
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第２ 卷 ， ４ ８ 第 期
２００８年 ４月
光
谱
学
与
光
谱
分
析
Ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃ ｒ ｌ ｐｏ ． ８ Ｎｏ ４ ｐ ８ ６ ８ ９ １ ２ ， ． ，ｐ ５ — ５ Ａｐ ｉ，２ ０ ｒ ｌ ０８
础 上 ， 一 步 用 热 力 学 法 研 究 芦 丁 与 血 清 白蛋 白 的 作 用 机 进
公司产 品，人血清 白蛋 白（ Ａ） Ｈｓ 为华兰生物工程股份有限公
司产 品，芦 丁 （ ｕｉ） ｓ ｍａ公 司产 品，用 无水 甲醇配 成 Ｒｔ 为 ｉ ｎ ｇ １０ ０ 。 ｌ Ｌ ． ×１ － ｍｏ ・ 储备 液 ，配制 １ ０ｍｍｏ Ｌ Ｔｒ － １ Ｌ・ ｉ ＨＣ ｓ 缓 冲溶液 ，ｐ ． ８（ Ｈ ７ ３ 内含 ０ １ Ｌ・Ｌ Ｎａ ｌ 持离子 ． ５ｍｏ ～ Ｃ ，维 强度 ） 实验用水 为去离 子二次 蒸馏 水 ，其余 试剂 均为 分析 ，
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Ｆｉ ．１ Ｓ ｒ ｔ ｒ ｆｒ ｉ ｇ ｔｕｃｕ ｅ ｏ ｕｔｎ
痔、 心疼 、眼疾 ” Ｊ 芦 丁是临床上广泛使 用的具有 高效 抗 一 。 ３
炎作用的药物，具有维持 血管抵抗 力 ，降低 其通 透性 ，减少 脆性等作用，其在临床上 主要用 于防治脑溢 血 ，高血压 ，视 网膜出血和治疗慢性气 管炎等疾病 。 血清白蛋 白是血浆 中最为 丰富的蛋 白质 ，不仅对 维持渗
纯。
１ ２ 荧 光 光 谱测 定 ．
制 ， 出了芦丁与血清 白蛋 白的结合 常数 、 得 结合 位点数 和结 合过程的基本热力学 参数 ，为芦 丁在体 内的储 存 、运输 、作
用机理及临床试验提供有用 的信息 。
在一 系 列 １ ０ｍＬ 的 比色 管 中 ，加 入 一 定 体 积 的 Ｂ Ａ Ｓ （ Ａ） 液 ，然后 依 次加 入 不 同体 积 的芦 丁 溶 液，以 ｐ Ｈｓ 溶 Ｈ