知识四十四钙、磷、镁的检验.

知识四十四钙、磷、镁的检验
教学目的：
掌握血钙、血磷、血镁的测定方法、基本原理、方法学评价及临床意义。

重点：OCPC法测定血钙、比色法测定血镁的基本原理、方法学评价及临床意义。

难点：OCPC法测定血钙、比色法测定血镁的基本原理、方法学评价。

教学方法和手段：课堂讲授为主，多媒体教学为辅，课堂提问与讨论相结合。

授课时数：1学时
教学内容及组织：
一、钙的测定
化学法①滴定法（氧化还原滴定，络合滴定）；
②比色法（邻甲酚酞络合法，甲基麝香草酚蓝法）。

血钙测定
物理法①火焰光度法；②ISE法；③原子吸收分光光度法；
④同位素稀释质谱法。

1.EDTA-Na2络合滴定法在碱性溶液中，血清钙与钙红指示剂结合成可溶性的复合物，使溶液呈淡红色，EDTA-Na2对钙有很大的亲和力，能与复合物中的钙络合，使钙红指示剂重新游离，溶液变蓝色，根据EDTA-Na2滴定用量可计算出血清钙含量。

钙＋钙红————→钙-钙红复合物淡红色
钙-钙红复合物＋EDTA-Na2————→EDTACa ＋钙红蓝色
钙指示剂除钙红外，还有依地铬黑T（红→蓝），钙黄绿素（黄→绿），紫红酸铵（红→紫）。

钙红指示剂终点明显，不受血清镁干扰，血清镁在强碱性条件下生成Mg（OH）2↓，指示剂在强碱性条件下不稳定，加指示剂后应立即滴定。

操作简便，无需特殊仪器设备，适合于基层医院，但终点判断人为误差较大，溶血、黄疸影响终点判断。

2.邻甲酚酞络合酮法（O-CPC）邻甲酚酞络合酮是一种金属络合染料，也是一种酸碱指示剂，在碱性溶液中能与钙和镁螯合，生成紫红色螯合物（吸收峰575nm），作钙测定时，加入8-羟基喹啉消除镁的干扰。

Mg2+＋8-羟基喹啉————→可溶性络合物
Ca2+＋邻甲酚酞络合酮————→紫红色螯合物
灵敏度很高，试管、器皿如有微量的钙污染亦会引起误差，最好使用一次性试管，所有试剂置塑料瓶中保存。

3.甲基麝香草酚蓝法（MTB）血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝（MTB）结合，生成一种蓝色络合物，加入8-羟基喹啉消除镁干扰。

显色稳定，线性范围大，溶血、黄疸无干扰。

4.离子选择电极法（ISE）此法迅速、简便、灵敏度高、重复性好，并可同时测定总钙和离子钙，离子钙测定最好用血清，不用抗凝剂，在急需检测结果时可用肝素抗凝。

【正常参考值】成人总钙2.25～2.75mmol/L
离子钙 1.15～1.42mmol/L
【临床意义】血清钙增高常见于甲状旁腺功能亢进症、维生素D过多症、多发性骨髓瘤、结节病引起肠道过量吸收钙而使血钙增高。

血清钙降低可引起神经肌肉应激性增强而使手足搐搦，主要见于：①甲状旁腺功能减退：如甲状腺手术摘除时伤及甲状旁腺而引起机能减退，血清钙可下降至1.25～1.50mmol/L；②慢性肾炎尿毒症时，肾小管中维生素D31-羟化酶不足，活性维生素D3生成减少，使血清总钙下降，由于此类病人多伴有代谢性酸中毒而使离子钙增高，尽管总钙减少，但离子钙不低，所以不易发生手足搐搦；③佝偻病与软骨病：体内缺乏维生素D，钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低；④吸收不良性低血钙：在严重乳糜泻时，饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出；⑤大量输入柠檬酸盐抗凝后，可引起低血钙。

二、无机磷测定
目前还不能直接测定人体内的磷元素，各种方法都是直接地分析两种磷酸盐阴离子（HPO42－、H2PO4－），常用的方法有磷钼酸法，染料法，酶法。

1.磷钼酸法以三氯醋酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成钼蓝。

（NH4）6Mo7O24＋3H2SO4＋4H2O——→7H2MoO4＋3（NH4）2SO4
12H2MoO4＋H3PO4——→12MoO3·H3PO4＋12H2O
12MoO 3·H 3PO 4 ＋ 还原剂——→ 钼蓝
还原剂有很多种，1-氨基-2-萘酚-4-磺酸，应用历史较久，试剂不太稳定，显
色时间长，灵敏度不高。

氯化亚锡，灵敏度较高，颜色强度随显色时间时间而改变，偏离Beer 定律。

硫酸亚铁，显色较稳定。

2.孔雀绿直接显色法 血清经浓尿素溶液稀释后，用孔雀绿-钼酸试剂显色，
加入吐温-20使标准液与血清标本显色反应速度接近。

灵敏度较高，但影响因素多，重复性差，显色不稳定。

3.酶法
磷酸葡萄
葡萄糖磷酸变位酶糖原磷酸化酶-−−→−+----−−−−−→−----+
−−−−→−++-6NADP P 6G P 6G P 1G P 1G G PO H G PD 6G 1n 43n
紫红色乙酰乙胺甲基苯基）（乙基尿酸次黄嘌呤次黄嘌呤次黄苷黄嘌呤氧化酶嘌呤核苷磷酸化酶−−→−------++−−−−→−++--+−−−−−→−+POD 2
222224
3N 3N N O H O H O O H P 1R PO H
发色底物 555nm
【临床意义】 血清磷增高见于：①甲状旁腺功能减退症，由于激素分泌减
少，肾小管对磷的重吸收增强使血磷增高；②慢性肾炎晚期磷酸盐排泄障碍而使血磷滞留；③维生素D 过多，促进肠道的钙、磷吸收，使血清钙、磷含量增高；④多发性骨髓瘤及骨折愈合期。

血磷减低见于：①甲状旁腺功能亢进症时，肾小管重吸收磷受抑制，尿磷排
泄增多，血磷降低；②佝偻病或软骨病伴有继发性甲状旁腺增生，使尿磷排泄增多而血磷减低；③连续静脉注入葡萄糖并同时注入胰岛素或胰腺瘤伴有胰岛素过多症，糖的利用均增加，这两种情况需要大量无机磷酸盐参加磷酸化作用，而使血磷下降；④肾小管病变时，肾小管重吸收磷功能发生障碍，血磷降低，如范可尼(Fanconi)综合征。

三、镁的测定
化学法 钙镁试剂比色法，达旦黄比色法，甲基麝香草酚蓝比
色法。

传统方法 测定方法 物理法 原子吸收分光光度法，（参考方法）同位素稀释中子
活化法（决定性方法）
酶法 新进展，将成为新的自动方法。

1.钙镁试剂（Calmagite ）比色法 血清镁在碱性条件下与钙镁试剂生成紫红
色络合物，颜色深浅与镁浓度成正比。

加入EGTA 乙二醇双（β-氨基乙醚）-N ，N ，N ˊ，N ˊ-四乙酸，可消除钙的干扰。

吸收峰520nm 。

显色稳定，操作简便，快速，可手工操作，也可用于自动化分析。

2.原子吸收分光光度法 血清经酸性氯化镧溶液作50倍稀释，直接用原子吸
收分光光度计检测285.2nm 的吸光度。

操作简便，准确，精密度好，可同时进行钙的测定422.7nm 。

3.酶法
NA
6NADP 6ADP
Mg 6ATP Mg PD 6G HK +---−−→−+---⋅+---−→−⋅+-+磷酸葡萄糖右旋磷酸葡萄糖右旋磷酸葡萄糖右旋葡萄糖右旋 【正常参考值】0.67～1.23mmol/L
【临床意义】 血清镁增高见于：①肾脏疾病，如急性或慢性肾衰竭；②内
分泌疾病，如甲状腺功能减退症、阿狄森病和糖尿病昏迷；③多发性骨髓瘤、严重脱水症等血清镁也增高。

血清镁降低见于：①镁由消化道丢失，如长期禁食、吸收不良或长期丢失胃
肠液者，慢性腹泻、吸收不良综合征、长期吸引胃液者等；②镁由尿路丢失，如慢性肾炎多尿期，或长期用利尿药治疗者；③内分泌疾病，如甲状腺功能亢进症、甲状旁腺功能亢进症、糖尿病酸中毒、醛固酮增多症等，以及长期使用皮质醇激素治疗。

课堂提问：
1、OCPC 法测定血钙的基本原理、方法学评价？
2、比色法测定血镁的基本原理、方法学评价？
3、简述血钙测定的临床意义？
4、简述血磷测定的临床意义？。