淋巴细胞分离液配制的改进_刘标荣
淋巴转化实验报告
一、实验目的1. 了解淋巴细胞转化的基本原理和实验方法。
2. 掌握淋巴细胞转化的检测方法，如MTT法和同位素法。
3. 通过实验了解淋巴细胞转化率与机体免疫水平的关系。
二、实验原理淋巴细胞转化是指淋巴细胞在体外受到有丝分裂原（如PHA、ConA）等刺激后，发生细胞体积增大、代谢旺盛、蛋白和核酸合成增加等现象，最终转化为淋巴母细胞的过程。
淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水平。
三、实验材料1. 实验试剂：淋巴细胞分离液、PHA、ConA、MTT、盐酸异丙醇、3H-TdR、肝素钠等。
2. 实验仪器：离心机、酶标测定仪、显微镜、细胞培养箱、移液器等。
3. 实验对象：人外周血淋巴细胞。
四、实验方法1. 淋巴细胞分离（1）采集抗凝血：每个10ml注射器吸入100ul肝素钠抗凝剂（20mg/ml），每个样品无菌采血5-8ml。
（2）分离淋巴细胞：将采集到的抗凝血加入等体积的淋巴细胞分离液，混匀后置于离心机中以2000rpm离心10分钟，弃去上清，即获得淋巴细胞。
2. 淋巴细胞转化实验（1）MTT法：将分离得到的淋巴细胞悬液接种于96孔板，每孔加入PHA或ConA，使细胞浓度为1×10^6/ml。
在细胞培养箱中培养48小时后，加入MTT，继续培养4小时。
然后加入盐酸异丙醇溶解甲臜，用酶标测定仪测定OD值，波长为570nm。
（2）同位素法：将分离得到的淋巴细胞悬液接种于培养瓶，每瓶加入PHA或ConA，使细胞浓度为1×10^6/ml。
在细胞培养箱中培养48小时后，加入3H-TdR，继续培养24小时。
然后收集细胞，用液体闪烁计数仪测定放射性强度。
3. 结果分析根据MTT法和同位素法测定结果，计算淋巴细胞转化率。
淋巴细胞转化率=（实验组OD值或放射性强度-对照组OD值或放射性强度）/对照组OD值或放射性强度×100%。
五、实验结果1. MTT法实验结果：实验组OD值明显高于对照组，说明淋巴细胞在PHA或ConA 的刺激下发生了转化。
淋巴细胞分离记数及活性实验方案
▪ 密度梯度离心法 ▪ 流式细胞仪检测技术（FCM）
密度梯度离心法
原理：
根据各类血细胞的比重不同，采用分层液提取淋巴细 胞，PBMC与血液中的其他成分存在密度差异，利用密度在 1.077±0.001g/L之间而且近于等渗的淋巴细胞分层液做 密度梯度离心时，各种血液成分按密度梯度重新分布聚集， 血浆和血小板由于密度较低，故悬浮于分层液的上部，红 细胞和粒细胞由于密度较大,故沉于分层液的底部,PBMC密 度稍低于分层液，故位于分层液层面上，这样就可以获得 PBMC。本实验用比重为1.077聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分 离液分离出淋巴细胞。
▪ 经过密度梯度离心实验，仍需进一步分离淋巴 细胞和单核细胞，最终要舍弃单核细胞。
▪ 淋巴细胞有多个亚群，不同亚群的细胞有各自 的特征性表面标记，可利用这一点将不同亚群 细胞进行分离与提纯。
问题
密度梯度离心只是初步提纯，如何将单个核 的细胞进一步提纯，只获得淋巴细胞？
流式细胞仪检测技术
原理： 在一组混合的细胞群中，加入特异的针对特定靶细胞
实验步骤
5.此时可见液体分为4层，最下层是红细胞和粒细胞， 分离液在它的上层，最上层是血浆层，淋巴细胞在血浆 层和分离液之间。用滴管直接插入淋巴细胞层吸取淋巴 细胞。 6.将淋巴细胞放入Hanks细胞液5毫升试管中，充分混匀 1000转/min离心10min，弃去上清液及获得纯淋巴细胞。 7.取2滴细胞悬液，加入一滴2%台盼蓝静置5分钟，活性 95%左右。 8.淋巴细胞记数:PBMC数=（4大方格细胞数／4） ×10^4×稀释倍数 （1个大方格体积=长×宽×高 =1nm×1nm×0.1mm×0.1mm=10^(-4)ml）
一种淋巴细胞分离液及其制备方法[发明专利]
![一种淋巴细胞分离液及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1786baa0dbef5ef7ba0d4a7302768e9951e76ef8.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011467201.4(22)申请日 2020.12.14(71)申请人 广州博仁安康医疗科技有限公司地址 510000 广东省广州市黄埔区瑞和路39号G1-G2栋厂房(部位:G1座308至310房)(72)发明人 赖演媚 刘灵辉 赖柔贝 (74)专利代理机构 广州三环专利商标代理有限公司 44202代理人 颜希文(51)Int.Cl.C12N 5/0781(2010.01)C12N 5/0783(2010.01)(54)发明名称一种淋巴细胞分离液及其制备方法(57)摘要本发明提供一种淋巴细胞分离液，所述分离液包括以下组分：甘油、乙醇、氯化钠、茶皂素和水。
本发明提供的淋巴细胞培养液，具有以下优势：1)低毒性。
2)终成产品经过滤得到低内毒素产品3)甘油的使用，对于样本的回收率提高了4)性价比合适。
5)尤其适用于干细胞分离。
权利要求书1页 说明书5页 附图1页CN 112481208 A 2021.03.12C N 112481208A1.一种淋巴细胞分离液，其特征在于，所述分离液包括以下组分：甘油、乙醇、氯化钠、茶皂素和水。
2.如权利要求1所述的淋巴细胞分离液，其特征在于，包括以下质量百分比的组分：甘油5～15％、乙醇1～10％、氯化钠1～5％、茶皂素0.1～0.5％，去离子水余量，总量为100％。
3.如权利要求2所述的淋巴细胞分离液，其特征在于，所述淋巴细胞分离液包括以下质量百分比的组分：甘油6～10％、乙醇2～5％、氯化钠3～5％、茶皂素0.16～0.3％，余量为去离子水，总量为100％。
4.如权利要求3所述的淋巴细胞分离液，其特征在于，所述淋巴细胞分离液包括以下质量百分比的组分：甘油8.3％、乙醇3％、氯化钠4.5％、茶皂素0.16％，余量为去离子水，总量为100％。
5.一种淋巴分离液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1将配方量的乙醇、氯化钠、茶皂素和双蒸水混合，搅拌溶解，得到澄清溶液；S2在18℃‑22℃下，将甘油加至所述步骤S1生物澄清溶液中，搅拌均匀，即得本发明所述的淋巴分离液。
淋巴细胞分离液及分离脾脏淋巴细胞的方法[发明专利]
![淋巴细胞分离液及分离脾脏淋巴细胞的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/54d70cb7b8d528ea81c758f5f61fb7360b4c2b81.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101012449A [43]公开日2007年8月8日[21]申请号200610063555.6[22]申请日2006.11.09[21]申请号200610063555.6[71]申请人深圳市达科为生物技术有限公司地址518067广东省深圳市南山区蛇口工业六路科健大厦四楼西[72]发明人朱义鑫 [74]专利代理机构深圳创友专利商标代理有限公司代理人罗瑶[51]Int.CI.C12N 5/06 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 8 页[54]发明名称淋巴细胞分离液及分离脾脏淋巴细胞的方法[57]摘要本发明公开了一种淋巴细胞分离液，所述分离液中包含重量体积百分浓度为14.0～17.5％的碘克沙醇(Iodixanol)。
本发明还公开了采用上述分离液分离脾脏淋巴细胞的方法，该方法包括：将脾脏直接在分离液中研磨，制备成单细胞悬液，并将悬有脾脏细胞的分离液进行离心操作。
本发明的分离液及方法无毒、便于操作且易于分离得到的状态好、活力高的淋巴细胞。
200610063555.6权 利 要 求 书第1/1页 1、一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述分离液中包含重量体积百分浓度为14.0～17.5％的碘克沙醇(Iodixanol)。
2、根据权利要求1所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液的渗透压为230～310mOsm，内毒素含量小于1EU/mL，pH 值为7.0～7.2。
3、根据权利要求2所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液还包含体积百分浓度为70.8～76.7％的RPMI1640培养基以及体积百分浓度为9.3～11.7％的超纯水。
4、根据权利要求2或3所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液的密度为1.077～1.095g/mL。
5、根据权利要求4所述的一种淋巴细胞分离液，其特征在于：所述淋巴细胞分离液用于分离小鼠或大鼠的脾脏淋巴细胞。
一种淋巴细胞无血清培养基及其制备方法和应用[发明专利]
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(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510449608.7(22)申请日 2015.07.27C12N 5/0781(2010.01)C12N 5/0783(2010.01)(71)申请人广州市达晖生物技术有限公司地址510070 广东省广州市先烈中路80号汇华商贸大夏2808室(72)发明人李晓辉 胡可存 李万红 莫房德徐素茹 刘强(74)专利代理机构广州市越秀区海心联合专利代理事务所(普通合伙)44295代理人王洪娟(54)发明名称一种淋巴细胞无血清培养基及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供了一种淋巴细胞无血清培养基，组成如下：基础培养基、10mg/L 转铁蛋白、0.01mg/L 亚硒酸钠、110mg/L 丙酮酸、1.5mg/L 乙醇胺、10mg/L 胰岛素、10mg/L-30mg/L 谷氨酰胺替代物、300mg/L 脂质型牛血清蛋白、0.001mg/L 硫酸铜、0.0005mg/L 偏钒酸铵、0.00005mg/L 二氯化锰、0.8mg/L 硫酸锌、2mg/L 维生素E、100mg/LPHA和10-25mMHEPES/NaHCO 3缓冲系统。
本发明还提供了该培养基的制备方法和在淋巴细胞培养中的应用。
该培养基能提高淋巴细胞培养的重复性，避免血清对细胞毒性和污染，利于淋巴细胞的分化，获得多分裂相。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书7页(10)申请公布号CN 104946587 A (43)申请公布日2015.09.30C N 104946587A1.一种淋巴细胞无血清培养基，其特征在于，由以下成分组成：基础培养基、转铁蛋白、亚硒酸钠、丙酮酸、乙醇胺、胰岛素、谷氨酰胺替代物、脂质型牛血清蛋白、硫酸铜、偏钒酸铵、二氯化锰、硫酸锌、维生素E、植物血球凝集素（PHA）和4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）缓冲系统；/NaHCO3所述各成分的浓度分别为：所述转铁蛋白10mg/L；所述亚硒酸钠0.01mg/L；所述丙酮酸110mg/L；所述乙醇胺1.5mg/L；所述胰岛素10mg/L；所述谷氨酰胺替代物10mg/L-30mg/ L；所述脂质型牛血清蛋白300mg/L；所述硫酸铜0.001mg/L；所述偏钒酸铵0.0005mg/L；所述二氯化锰0.00005mg/；L所述硫酸锌0.8mg/L；所述维生素E 2mg/L；所述植物血球凝集缓冲系统10-25mM，所述基础素（PHA）100mg/L；所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）/NaHCO3培养基为1640培养基。
研究三叶青提取物提高人共刺激T细胞增殖的方法[发明专利]
![研究三叶青提取物提高人共刺激T细胞增殖的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/c325e78325c52cc58ad6be47.png)
专利名称：研究三叶青提取物提高人共刺激T细胞增殖的方法专利类型：发明专利
发明人：刘军权,陈壮洪,倪建芬,何秋福
申请号：CN201610971268.9
申请日：20170115
公开号：CN106520901A
公开日：
20170322
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种研究三叶青提取物提高人共刺激T细胞增殖的方法，属于医药生物技术领域。
该研究方法步骤如下：步骤一，三叶青提取物体外诱导培养人共刺激T细胞：取适量健康献血者外周抗凝血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用含有不同细胞生长因子和刺激分子的共刺激T细胞培养基调整细胞密度为3.5×10/mL，接种于细胞培养板中，培养箱培养，定期换液，并调整细胞密度为5×10/mL，收集培养7天的共刺激T细胞，加入单抗进行细胞表面标志检测；步骤二，检测不同三叶青提取物对人共刺激T细胞生长的影响。
本申请可为三叶青提取物在制备人共刺激T细胞增殖剂中的新的医药用途提供参考，可为肿瘤免疫治疗药物研发提供实验参考。
申请人：浙江博纳生物科技有限公司
地址：浙江省绍兴市上虞区小越镇金澜路5号
国籍：CN
代理机构：长沙星耀专利事务所
代理人：许伯严
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淋巴细胞分离过程中去除红细胞和血小板的方法
为获得高纯度淋巴细胞，必须进一步清除PBMC悬液中其他血细胞。
（一）去除红细胞：一般采用无菌蒸馏水低渗裂解法或0.83%氯化铵处理法。
低渗裂解法是加1ml蒸馏水于沉淀的PBMC中，不超过1min，红细胞即快速裂解，立即加入等量的 1.8%氯化钠溶液恢复为等渗状态，经洗涤即可去除红细胞。
氯化铵处理法是在沉淀的PBMC中加入1ml 0.83%氯化铵溶液，轻轻振摇2min，即可裂解红细胞，经洗涤即可去除红细胞。
红细胞裂解液的制备：碳酸氢钾（KHCO3）1.0g；氯化氨（NH4Cl）8.3g；EDTA-Na2 0.037g，加双蒸水至1000ml，即工作液。
（二）去除血小板：通过离心洗涤，即可去除PBMC中绝大部分混杂的血小板。
若外周血中血小板数量异常增多，可采用胎牛血清（FCS）梯度离心法去除PBMC 中混杂的血小板。
[将PBMC悬液洗涤2~3次后，常可去除绝大部分混杂的血小板。
某些疾病状态下，外周血中血小板数量增多，常需通过胎牛血清（FCS）梯度离心才能去除过多的血小板，因FCS可让单个核细胞通过而阻止血小板通过。
] Place 3 ml FCS in a 15-ml centrifuge tube and carefully overlay with PBMC. Centrifuge 15 min in a GH-3.7 rotor at 800 rpm (200 g), 18℃to 20℃. Discard supernatant, which contains platelets. Resuspend pellet in HBSS/FCS at 2-5×107 cells per 1 to 2 ml. [Fetal calf serum (FCS; heat-inactivated 1 hr, 56℃)]（三）去除单核细胞和粒细胞：单核细胞的去除：①粘附去除法：单核细胞能粘附在塑料或玻璃的表面，而淋巴细胞则不能，由此可将单核细胞从PBMC悬液中分离出来。
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液使用方法
大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法如下：
1. 悬浮细胞：将需要进行分离的细胞悬浮在分离液中。
2. 离心：将悬浮液在2000rpm的转速下离心5分钟，收集沉淀的细胞。
3. 清洗：使用清洗液清洗离心后的细胞沉淀，以去除杂质和多余的分离液。
4. 再次离心：将清洗后的细胞在相同条件下再次离心，以进一步纯化细胞。
5. 培养：将纯化后的细胞接种到培养基中进行培养，以进行后续的实验或研究。
需要注意的是，大鼠骨髓淋巴细胞分离液需要在无菌条件下操作，且启封后应置常温保存。
如果需要在4℃保存，应避免出现白色结晶，以免影响分离效果。
此外，该试剂盒易感染细菌，因此在使用过程中需要特别注意无菌操作。
以上是大鼠骨髓淋巴细胞分离液的使用方法，仅供参考，如需获取更多详细信息，建议查阅相关网站。
t淋巴细胞转化实验报告
t淋巴细胞转化实验报告猪淋巴细胞转化实验猪淋巴细胞转化实验1.采集抗凝血每个10ml注射器吸入100ul肝素钠抗凝剂（20mg/ml），每个样品无菌采血5-8ml。
（保存在4°环境，从猪场回来最好放在冰盒中）2、淋巴细胞分离，采集的肝素抗凝外周血液（肝素用量20U/mL），可采用以下方法进行分离。
（1）Ficoll-Comray（聚蔗糖——泛影钠）分离淋巴细胞法：用10毫升的试管，加入4毫升淋巴细胞分离液（比重介于1.0-1.090之间），在这种分层液的界面上，轻轻加入4毫升左右肝素化的血液，千万不要打乱两液间的液面。
然后用1500rpm，离心15分钟。
此时即可见到液体分为四层。
最下层是红细胞和粒细胞，分层液在它的上层，最上层是血浆层。
淋巴细胞在血浆层和分层液之间，淋巴细胞多时，可呈现一层乳白层。
用移液器直接插入淋巴细胞分层液吸取淋巴细胞 1.5mlEP管中，充分混匀，2000rpm离心10分钟，弃去上清，即获得纯淋巴细胞，可加入适量HanK’S液进行计数，应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
（2）红细胞裂解法用10毫升的试管加入8ml的Tris-MH4C1红细胞裂解液，然后加入2-4ml抗凝血，室温放置20min（每各5min上下缓慢摇匀一次），后1500rpm离心10min，弃掉上清，用HanK’S液混悬细胞进行计数（如果红细胞很多，可以再用5ml裂解液裂解一次）。
应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
3.流式细胞仪检测CD3/CD4/CD8步骤待血液样品和灌注液样品都计数完毕后，吸取一定体积含有106的细胞悬液，1500rmp离心3min，弃掉上清液，加入用PBS混匀的含有CD3/CD4/CD8混合抗体的反应液80ul，混匀后4℃反应30min。
待反应过后，1500rmp离心3min，用100ul移液器吸弃上清，然后加入0.5ml含有1-2%胎牛血清的PBS液，混合均匀，1500rmp离心3min，后用100ul移液器吸弃上清。
【CN109679903A】T淋巴细胞的分离纯化方法【专利】
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CN 109679903 A
说 明 书
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对应2μl CD3reagent的比例加入所需CD3Reagent，混合均匀，在4℃环境下静置15min；取出 混匀，在300g、20℃下离心10min，弃上清液，加入磁珠分离液重悬，采用层析柱分离即可。 [0031] 实施例三 [0032] 一种T淋巴细胞的分离纯化方法，包括如下步骤： [0033] 1)血浆分离：取全血加入一离心管，加入抗凝剂，在800g、4℃下离心15min后，吸取 血浆至另一离心管中，于56℃灭火30min，相同条件下离心30min，去除沉淀，收集上清液； [0034] 2)淋巴细胞的分离：于一洁净试管中用0 .9％NaCl注射液稀释全血，混合均匀；将 5ml上清液吸取至 另一洁净离心管中 ，加入分离液 ，将稀释过的 全血平铺至分离液液面上 方，在500g、20℃下离心30min，出现白膜层； [0035] 3)淋巴细胞的洗涤：吸取白膜层至一离心管中，加入0 .9％NaCl注射液稀释，混合 均匀后在500g、20℃下离心10min，弃上清液，重复操作一次； [0036] 4)T淋巴细胞的纯化：细胞转移至离心管，加入磁珠分离液重悬，根据每107个细胞 对应2μl CD3reagent的比例加入所需CD3Reagent，混合均匀，在4℃环境下静置15min；取出 混匀，在300g、20℃下离心10min，弃上清液，加入磁珠分离液重悬，采用层析柱分离即可。 [0037] 实施例四 [0038] 一种T淋巴细胞的分离纯化方法，包括如下步骤： [0039] 1)血浆分离：取全血加入一离心管，加入抗凝剂，在800g、4℃下离心15min后，吸取 血浆至另一离心管中，于56℃灭火30min，相同条件下离心30min，去除沉淀，收集上清液； [0040] 2)淋巴细胞的分离：于一洁净试管中用0 .9％NaCl注射液稀释全血，混合均匀；将 5ml上清液吸取至 另一洁净离心管中 ，加入分离液 ，将稀释过的 全血平铺至分离液液面上 方，在400g、20℃下离心30min，出现白膜层； [0041] 3)淋巴细胞的洗涤：吸取白膜层至一离心管中，加入0 .9％NaCl注射液稀释，混合 均匀后在450g、20℃下离心10min，弃上清液，重复操作一次； [0042] 4)T淋巴细胞的纯化：细胞转移至离心管，加入磁珠分离液重悬，根据每107个细胞 对应5μl CD3reagent的比例加入所需CD3Reagent，混合均匀，在4℃环境下静置15min；取出 混匀，在300g、20℃下离心10min，弃上清液，加入磁珠分离液重悬，采用层析柱分离即可。 [0043] 实施例五 [0044] 一种T淋巴细胞的分离纯化方法，包括如下步骤： [0045] 1)血浆分离：取全血加入一离心管，加入抗凝剂，在800g、4℃下离心15min后，吸取 血浆至另一离心管中，于56℃灭火30min，相同条件下离心30min，去除沉淀，收集上清液； [0046] 2)淋巴细胞的分离：于一洁净试管中用0 .9％NaCl注射液稀释全血，混合均匀；将 5ml上清液吸取至 另一洁净离心管中 ，加入分离液 ，将稀释过的 全血平铺至分离液液面上 方，在400g、20℃下离心30min，出现白膜层； [0047] 3)淋巴细胞的洗涤：吸取白膜层至一离心管中，加入0 .9％NaCl注射液稀释，混合 均匀后在450g、20℃下离心10min，弃上清液，重复操作一次； [0048] 4)T淋巴细胞的纯化：细胞转移至离心管，加入磁珠分离液重悬，根据每107个细胞 对应10μl CD3reagent的比例加入所需CD3Reagent，混合均匀，在4℃环境下静置15min；取 出混匀，在300g、20℃下离心10min，弃上清液，加入磁珠分离液重悬，采用层析柱分离即可。 [0049] 实施例六
两种不同淋巴细胞分离液对脐带血单_省略_取及后期诱导培养CIK细胞的影响_张校通
两种不同淋巴细胞分离液对脐带⾎单_省略_取及后期诱导培养CIK细胞的影响_张校通⽣命科学仪器 2011 第9卷/10⽉刊研究简报49摘要⽬的：研究两种不同的淋巴细胞分离液对脐带⾎单核细胞的分离效果及后期对CIK 细胞的诱导培养的影响。
⽅法：分别使⽤国产TBD 以及进⼝GE healthcare 牌淋巴细胞分离液分离提取脐带⾎单核细胞，⽤悬浮细胞培养法诱导培养脐带⾎单核细胞形成CIK 细胞，再⽤⾎球计数板及台盼兰染⾊法检测细胞密度及活率。
结果：国产的TBD 牌所分离的单核细胞分层较清楚，并且⽅便提取，⽽使⽤进⼝GE healthcare 的淋巴细胞分离液提取的单核细胞数量较多，但经过后期诱导培养CIK 细胞发现两种分离液提取的细胞培养到后期数量逐渐接近。
结论：国产TBD 牌淋巴细胞分离液在⽤于脐带⾎淋巴细胞分离提取时较进⼝GE healthcare 牌经济，并且细胞提取⽅便，后期培养效果⽆明显差别。
关键词淋巴细胞分离液；脐带⾎；单核细胞；CIK 细胞两种不同淋巴细胞分离液对脐带⾎单核细胞的提取及后期诱导培养CIK 细胞的影响张校通*，赵令卉，王⼩燕，王翔，申重阳，郑榆坤（成都清科⽣物科技有限公司，成都，610000）作者简介第⼀作者简介：张校通（1984-），男，主要研究⽅向为细胞免疫治疗。
Tel：152********，E-mail：zhangxtwl@/doc/b99395412.html脐带⾎单核细胞是较为常见的⼀类细胞，⽤途较为⼴泛，内含丰富的造⾎⼲细胞、间充质⼲细胞等，且分离的脐带⾎单核细胞经过诱导成为在肿瘤的防治中具有重要作⽤的CIK（Cytokine-Induced Killer, CIK）细胞。
如何保证提取脐⾎单核细胞的质量，减少对后期细胞培养的影响，成为单核细胞提取过程中共同关注的话题。
淋巴细胞分离液的选择不仅决定着单核细胞分离的效果，⽽且对后期CIK诱导培养也有着重要的影响。
为了在达到理想的分离提取效果以及尽可能节约实验成本，我们通过使⽤两种不同品牌的淋巴细胞分离液，观察使⽤两种不同分离液对脐带⾎单核细胞分离效果及对后期培养的影响，为进⼀步研究脐⾎来源CIK的⽣物学特性奠定实验基础。
应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的实验研究
应用淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的实验研究
罗芸;薛毅珑;李崇辉
【期刊名称】《解放军医学院学报》
【年(卷),期】2004(025)004
【摘要】目的:建立一种简便、易行和高效的胰岛分离纯化方法,以减少对胰岛细胞的损伤,获得高质量的胰岛组织.方法:选用SD大鼠经胆总管原位灌注胶原酶液,分离消化胰腺组织,用淋巴细胞分离液(histopaque-1077)纯化胰岛细胞.结果:可收获大量的高纯度胰岛,纯度达95%以上,体外葡萄糖刺激实验表明胰岛对刺激反应良好,将胰岛移植于糖尿病小鼠体内可短期纠正其高血糖状态.结论:应用单一密度淋巴细胞分离液纯化大鼠胰岛的方法是一种操作简单、价格低廉、重复性好的大鼠胰岛纯化方法.
【总页数】2页(P299-300)
【作者】罗芸;薛毅珑;李崇辉
【作者单位】解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室;解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室;解放军总医院肝胆外科研究所,北京,100853
【正文语种】中文
【中图分类】R329.2+6
【相关文献】
1.采用淋巴细胞分离液进行成年猪胰岛细胞纯化的研究 [J], 蔡娟娟;程晨;周贤用;傅红兴;汪大望
2.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 章洁;李华;朱伟锋;许宝华;万福生
3.淋巴细胞分层液在人绒毛膜滋养层细胞分离纯化中的应用 [J], 刘杰;章汉旺
4.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 吴东军;赵振林;王慧珍;张栋;张勇;张巧芬
5.大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究 [J], 庞新路;薛武军;冯新顺;田晓辉;滕琰;郭奇;何晓利
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临床检验中影响外周血淋巴细胞培养的因素分析
临床检验中影响外周血淋巴细胞培养的因素分析
廖汉雄;张晓元
【期刊名称】《中国医药导刊》
【年(卷),期】2012(14)11
【摘要】目的：观察与分析影响外周血染色体标本制备的细胞培养环节的主要因素.方法：以规模化生产的淋巴细胞培养液为材料,观察秋水仙素浓度与处理时间、外周血用量、培养时间等对淋巴细胞培养及染色体标本制备的影响.结果：秋水仙素浓度与处理时间、外周血用量等对全血淋巴细胞的培养和染色体形态观察的效果有显著的影响.结论：5ml培养液中,加入0.2~0.4ml外周血培养68~69h、以0.064μg/ml秋水仙素处理3h,可获得高分裂相与高分辨率染色体的淋巴细胞.【总页数】2页(P1968-1969)
【作者】廖汉雄;张晓元
【作者单位】广州诺金制药有限公司研发部,广州511356;华南理工大学工业技术研究总院技术中心,广州510641
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
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赵士启;刘春梅
4.人脐血间充质干细胞培养及对异体外周血T淋巴细胞增殖的影响 [J], 白海;王茜;吴涛;杨小亮;司志刚;薛志文
5.新生儿外周血淋巴细胞培养中几种影响因素的分析 [J], 叶兹礼;李文典
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