HPLC法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量
石榴皮提取物中逆没食子酸含量测定方法(H)
编号FZD0130 石榴皮提取物中鞣花酸(Ellagic Acid)含量测定方法
一、色谱条件
色谱柱：Supelco LC-18-DB 15cm×4.6mm 5μm
流动相：50%甲醇∶磷酸（100∶0.1，V/V）
流速：1mL/min
检测波长：255nm
柱温：室温
进样量：5μL
二、溶液制备
1．对照品溶液制备精密称取鞣花酸对照品约5mg于50mL容量瓶中，加入甲醇超声40min后冷却至室温定容即得。
2．样品溶液制备精密称取石榴皮提取物样品15mg（样品含量约为40%）于50mL容量瓶中，加入甲醇超声振荡40min后冷却至室温定容，用0.45μm微孔滤膜过滤,即得样品溶液。
三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定后进样测定，逆没食子酸保留时间约7min，用外标法计算含量。
石榴皮鞣花酸类色素的提取和性能测定
ｈ ｔ， ｃ ｄ ，ａｋ ， ｘｄｚ ｅ ｄ ｒｄ ｃ ｒ， ｏ ｄ ｉ ｖ ｓｗｅｅ ｓ ｄｅ ． ｔｔｒ ｓ ｏ ｔｔ ａ ｉ ｉｍｅ ｔ ｓａ ｉ ｃ ，ｈ ｒ ｓｔ ｅ ｏ ａｉ ｌ ｏ ｉ ｉｉｒａ ｕ ｅ ｆ ｄ ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｔ ｉｄ Ｉ ｎ ｕ ｔｔ ｓｐ ｇ ｎ ｃｄ ｎ ｅ ｏ ｉ ｕ ｕ ｈ ｈ ｉ ｉ ｔｅｅｉ ｈ
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第 ｌ ６卷 第 ３期
２０ ０ ６年 ９月
信 阳农业 高 等专科 学校 学报
Ｊ ｕ ａ ｆＸｉｙ ｎ ｒ ｕｔｒ ｌ ｌ ｇ ｏ ｒ ｌｏ ｎ ａ ｇ Ａｇｉ ｌ ａ ｌ ｅ ｎ ｃ ｕ Ｃｏ ｅ
Ｖｏ． ６ Ｎｏ ３ Ｉ１ ． Ｓｐ２０ ｅ ．０ ６
色随着碱性的增大而加深 ， 对热、 氧化剂 、 还原剂 、 食品添加剂 以及 Ｎ 、 ａ Ｋ 稳定性好 。
关 键词 ： 鞣花酸； 色素； 取 ｔ ｇ
中图分 类号 ：Ｓ０． Ｔ２２３
文献标识 码 ： Ａ
文章编 号 ：０ ８４ １ （０６ ０ －１３０ １０ －９６ ２ｏ ）３０ ３ －３
Ｋｅ ｗｏ ｄｓ：ｌ ｃａ ｉ ；ｐｇ ｅ ｔ ｘｒｃ ｏ ｙ ｒ ｃｒ ｃｄ ｉ ｎ ；ｅｔａｔ ｎ ￣ｉ ｍ ｉ
食用色素是食品添加剂的重要组成部分， 它不仅 广泛用于食品工业以改善食品的色泽 ， 增进人们的感 官享受， 而且广泛用于医疗和化妆品方面。食用色素 包括天然色素和合成色素两大类 。合成色素由于具
一
在 自然界 ， 木莓 、 红 草莓 、 石榴 以及蕨 麻等 植物 中 酸类色素并用于食品工业更具有现实意义。
含 有少量 鞣 花酸 （ ％ ） 鞣花 酸 （ ， ，，－ｔ ｈｄｏｙ １ ， ２ ３７ ８ｔｒ ｙｒｘ ｅａ
RP-HPLC法同时测定石榴皮和石榴汁中鞣花酸的含量
RP-HPLC法同时测定石榴皮和石榴汁中鞣花酸的含量范高福;付恩桃;汤洁;刘修树;王玮【摘要】目的:建立同时检测石榴皮、汁中鞣花酸的含量测定方法.方法:采用反相高效液相色谱法,Hyperil C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.3％TFA(20∶80)为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长254nm.结果:鞣花酸0.1048 ～ 20.96 μg/mL之间线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.55％(RSD=1.44％,n=9).结论:此方法灵敏快速、准确易行,可用于石榴皮、汁中鞣花酸含量的同时检测.【期刊名称】《安徽科技学院学报》【年(卷),期】2016(030)005【总页数】4页(P67-70)【关键词】鞣花酸;石榴皮;石榴汁;反相高效液相色谱法;含量测定【作者】范高福;付恩桃;汤洁;刘修树;王玮【作者单位】合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥职业技术学院生物应用技术系,安徽合肥238000;合肥市食品药品监督检验所,安徽合肥238000【正文语种】中文【中图分类】S132石榴(Punica granatum L.)，别名安石榴，为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木，具有药食同源价值，可以离体种植培养[1]，主要分布于安徽怀远、山东枣庄、陕西临潼、四川会理、云南蒙自、新疆叶城等地区。
石榴皮和石榴汁分别为石榴的干燥果皮和新鲜果汁，均含有丰富的多酚类、类黄酮、花色素等生物活性物质[2]，其中多酚类鞣花酸(ellagic acid, EA)成分研究较多，呈多酚二内酯结构特征，是没食子酸的二聚衍生物，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎及抗菌等多种药理作用[3]。
据文献报道以石榴皮提取物测定鞣花酸含量方法较多，而以石榴汁为原料测定少见，未见对安徽地区石榴皮、汁中鞣花酸含量同时测定方法具体报道，本实验采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，建立石榴皮、汁提取物中鞣花酸含量同时测定方法，为安徽本地石榴提取物的深加工研究与开发提供参考。
石榴皮在炒炭过程中没食子酸和鞣花酸含量变化规律的研究
石榴皮在炒炭过程中没食子酸和鞣花酸含量变化规律的研究针对目前石榴皮炭饮片炮制程度的判断仍然是靠外观性状，缺乏内在质量控制指标的现状，该文通过研究建立了HPLC同时测定石榴皮和石榴皮炭饮片中没食子酸和鞣花酸的含量，并采用该方法对石榴皮和不同炮制程度石榴皮炭中二者的含量情况进行了测定，研究发现，没食子酸和鞣花酸的含量在石榴皮炒炭过程中呈现先升高后降低的变化规律，在炮制程度适中时含量最高。
该结果提示，没食子酸和鞣花酸含量可以作为内在质量指标控制石榴皮的炒炭程度。
标签：石榴皮；炒炭；没食子酸；鞣花酸石榴皮为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，在我国药用历史悠久，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效[1]。
在具体实践中，石榴皮须经过依法炮制，制成不同规格的饮片方能应用，目前应用最普遍的包括生品和石榴皮炭2种[2-4]。
石榴皮生品长于驱虫、涩精、止带，多用于虫积腹痛、滑精、白带、脱肛、疥癣。
石榴皮炭较生品收涩力增强，多用于久泻、久痢、崩漏[4]。
在目前对石榴皮炭饮片炮制程度的判断仍然是靠外观性状，缺乏内在质量控制指标。
石榴皮富含鞣质类成分，主要有没食子酸、鞣花酸、安石榴苷等成分[5]，且鞣质成分是影响石榴皮质量的主要因素[6-7]，曾有研究表明，加热炮制对石榴皮中没食子酸、鞣花酸和鞣质含量有显著影响[8]。
为更好地控制饮片质量和石榴皮炭炮制程度，本实验通过研究建立了HPLC同时测定饮片中没食子酸和鞣花酸的含量，与传统的总鞣质含量测定方法相比，更加简便快捷。
采用建立的含量测定方法对石榴皮生品和不同炮制程度的石榴皮炭进行了含量测定和比较，分析了没食子酸和鞣花酸的含量在炒炭过程中的变化规律。
本研究可为控制石榴皮炭炮制程度提供有价值的内在质量控制指标。
1材料安捷伦Agilent 1200型液相色谱仪，G1315B检测器，1/10万电子天平（Sartorius R200D，德国）。
LC-350A超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）。
石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究
石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究作者：李海霞王彩芳张红岭方晓燕董保国来源：《中国医药导报》2008年第24期[摘要] 目的：考察石榴皮中鞣花酸的提取工艺。
方法：选用4因素3水平正交表L9(34)，以薄层扫描法测定鞣花酸含量，考察4个因素（溶剂类型，提取时间，提取次数，溶剂用量）、3个水平对鞣花酸提取率的影响。
结果：鞣花酸的最佳提取工艺为用1 mol/L的盐酸水溶液、8倍量、回流提取60 min、提取2次；结论：溶剂类型对鞣花酸的提取率影响最大，本研究确定的鞣花酸提取工艺合理、可行。
[关键词] 石榴皮；鞣花酸；提取工艺；正交试验[中图分类号] R927[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-050-02Study on extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatumLI Hai-xia1,WANG Cai-fang1, ZHANG Hong-ling1, FANG Xiao-yan2,DONG Bao-guo3(1. College of Pharmacy, Zhengzhou University, Zhengzhou450051，China;2. Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou450003，China;3.Technology Limited Company of Zhengzhou Times Flagship, Zhengzhou450008，China)[Abstract] Objective:To investigate the extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatum. Methods:The thin layer scanning method was used to determine the content of ellagic acid. The orthogonal design with three levels of four factors (the solvent, the extracting time, the extracting times and the amount of solvent) was adopted, using ellagic acid as index to evaluate the results. Results: The best extracting condition for ellagic acid was to add 8 times amounts of the water solution of 1 mol/L hydrochloric acid, and to reflux for 60 min and extract twice. Conclusion: The solvent has the maximal influence to the dissolutions of ellagic acid. The extract technology of ellagic acid was feasible and reasonable.[Key words] Peels of Punica granatum.;Ellagic acid;Extract technology;Orthogonal test石榴皮为石榴科植物石榴（Punica granatum.L）的干燥果皮，在传统中药及临床上较为常用。
HPLC法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量
基金项目：新疆维吾尔自治区科技计划项目（２０１２３３１３５）作者简介：丁 楠（１９８８－），女，硕士，研究方向：新疆地产资源新药开发研究。
通信作者：高晓黎，女，教授，博士生导师，研究方向：药物传递系统研究与新药开发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｌｉ＿ｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
ＨＰＬＣ法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量丁 楠，高晓黎（新疆医科大学药学院药剂／物化教研室，乌鲁木齐 ８３００１１）摘要：目的 建立石榴皮提取物中鞣花酸含量的ＨＰＬＣ测定方法。
方法 色谱条件：色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙酸乙酯∶磷酸（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶磷酸二氢钾（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶甲醇（０．０５∶２０∶２０∶６０）；流速１ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２５４ｎｍ；柱温２５℃。
结果 鞣花酸在５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为９７．８２％，ＲＳＤ为１．４１％（ｎ＝９）。
结论 ＨＰＬＣ法简便，准确，重复性好，可用于石榴皮提取物中鞣花酸的含量测定。
关键词：石榴皮；鞣花酸；ＨＰＬＣ中图分类号：Ｒ９１４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０６－０７７０－０３Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ Ｐｅｅｌ ｂｙ ＨＰＬＣＤＩＮＧ Ｎａｎ，ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ｌｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎａｎ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ，０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－Ｈ３ＰＯ４，ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．０５∶２０∶２０∶６０）ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ａｔ ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄｗａｓ ５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．８２％ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．４１％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅ－ｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ；ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ；ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ） 石榴皮为石榴科植物石榴（Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍＬ．）的果皮，性温，味酸、涩，归大肠经，具有涩肠止泻、杀虫、收敛止血的功效。
新疆不同产地石榴花中总鞣质、没食子酸和鞣花酸的含量测定
h t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n e t 新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定李建梅１,李㊀颖２,希尔艾力 吐尔逊１∗(１．新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所维吾尔医方剂学重点实验室,乌鲁木齐㊀８３００４９;２．中国科学院大学,北京㊀１０００３９)摘要:目的㊀测定新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量.方法㊀采用紫外Ｇ可见分光光度法测定总鞣质的含量,H P L C 法测定没食子酸和鞣花酸的含量.结果㊀不同产地石榴花中总鞣质(３８．４４~１１３．９８m g g －１)㊁没食子酸(２．３９~３ ８１m g g －１)和鞣花酸(２．３７~５．３４m gg －１)含量差别均较大,和田皮山县石榴花中３种成分含量相对较高.结论㊀该方法准确㊁专属性强,可用于石榴花药材的质量控制.关键词:石榴花;总鞣质;没食子酸;鞣花酸D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０３．００４中图分类号:R ２８２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０３Ｇ０２９８Ｇ０４D e t e r m i n a t i o no f t o t a l t a n n i n s ,g a l l i ca c i da n de l l a g i ca c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o m X i n j i a n g di f f e r e n t a r e a s L I J i a n m e i １,L IY i n g ２,X i r a l iT U R S U N １∗(１．K e y L a b o r a t o r y o fT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n eP r e s c r i p t i o no f I n s t i t u t eo fX i n j i a n gT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n e o fX i n j i a n g U y g u rA u t o n o m o u sR e g i o n ,U r u m q i ８３００４９,C h i n a ;２．U n i v e r s i t y o f C h i n e s eA c a d e m y of S c i e n c e s ,B e i j i ng １０００３９,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o c o m p a r e t h e c o n t e n t s o f t o t a l t a n n i n ,g a l l i c a c i d a n d e l l a g i c a c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o mX i n j i a n g di f f e r Ｇe n t a r e a s ．M e t h o d s U l t r a v i o l e t a n dv i s i b l e s p e c t r o p h o t o m e t r y m e t h o dw a su s e df o rd e t e r m i n i n g th ec o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s ,a n d H P L C m e t h o dw a su s e d f o r d e t e r m i n i n g t h e c o n t e n t o f g a l l i c a c i da n de l l a gi c a c i d ．R e s u l t s T h e c o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s (３８．４４Ｇ１１３．９８m g g －１),g a l l i c a c i d (２．３９Ｇ３．８１m g g －１)a n de l l a g i c a c i d (２．３７Ｇ５．３４m g g －１)i n p o m e gr a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a sw e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ,a n d t h e c o n t e n t s o f t h e ３c o m p o n e n t s i n s a m p l e s f r o mP i s h a n i nH e t i a nw e r e t h e h i gh e s t ．C o n c l u Ｇs i o n T h em e t h o d i s a c c u r a t e a n d r e l i a b l e ．I t c a nb eu s e da s t h e q u a l i t y c o n t r o lm e t h o do f p o m e gr a n a t e f l o w e r s ．K e y wo r d s :p o m e g r a n a t e f l o w e r s ;t o t a l t a n n i n s ;g a l l i c a c i d ;e l l a g i c a c i d 基金项目:新疆维吾尔自治区中医民族医药科技人才培养项目(编号:２０１６Ｇ０３Ｇ０５);新疆地产中药民族药新药研发培育项目(编号:Q ２０１５Ｇ０２Ｇ０４)作者简介:李建梅,女,副研究员∗通信作者:希尔艾力 吐尔逊,男,主任药师㊀㊀石榴花为石榴科植物石榴P i n i c a g r a n a t u m L ．的干燥花瓣,含有多酚类㊁黄酮类和三萜类等多种成分[１],在«中华人民共和国卫生部药品标准»(维吾尔药分册)中有记载[２],具有止泻收敛和止血止汗等功效,主治腹泻日久,外用治疗出血不止㊁口舌生疮㊁脱肛痔疮㊁口臭牙痛和皮肤瘙痒等,还可用于治疗中耳炎和糖尿病等[３].我国新疆和田㊁喀什和阿图什等地石榴品质较好,是新疆特产[４].石榴花资源丰富,含有丰富的活性物质,具有很高的保健及药用价值.文献报道,石榴整株植物活性物质的研究和开发多集中于石榴籽㊁叶和果皮,相对而言石榴花的研究内容较少,主要集中在黄酮类或多酚类物质的研究[５Ｇ１０],其资源开发也受到局限.本文采用紫外Ｇ可见分光光度法和H P L C法,首次测定了９个新疆不同产地的石榴花药材中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,对其质量控制提供了数据支持,以期为开发利用石榴花资源提供科学依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀W a t e r s e ２６９５高效液相色谱仪,W a t e r s２４８９紫外检测器(美国沃特斯公司);C i n t r a ２０紫外Ｇ可见分光光度计(澳大利亚G B C 科学仪器公司);S E C U R A １２４Ｇ１C N 电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);R U P T Ｇ１０ＧW 超纯水机(滕州新瑞分析仪器有限公司);D F T Ｇ２００手提式高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司);P T HW 调温电热套(巩义市予华仪器有限责任公司);S K ８２１０H P 超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司).１．２㊀试药㊀没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院提供,供含量测定用,批号１１０８３１Ｇ２００３０２);鞣花酸对照品(北京世纪奥科生物技术有限公司提供,供含量测定用,批号４７６Ｇ６６Ｇ４);甲醇㊁乙腈均为色谱纯[西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司];水为超纯水;磷酸㊁乙酸均为分析纯[赛默飞世尔科技(中国)有限公司];磷钼钨酸㊁碳酸钠和干酪素,均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂);药材分别来自新疆和田皮山县㊁和田县㊁和田于田县㊁喀什叶城县㊁喀什疏附县和阿图什市等９个产地当年产的石榴花,并经希尔艾力 吐尔逊主任药师鉴定为石榴科植物石榴P i n i c a gr a n a t u m L ．的干燥花瓣.２㊀方法与结果２．１㊀总鞣质的测定２．１．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸对照品１２．６m g,置于２５m L 棕色量瓶中,加水定容至刻度,使完全溶解,精密量取５．０m L,置于５０m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为０ ０５０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液.２．１．２㊀供试品溶液的制备㊀精密称取石榴花药材粉末(过６０目筛)０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２０m L,置于１００m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得[１１Ｇ１５].２．１．３㊀检测波长的确定㊀取２．１．１项下制备的对照品溶液和２．１．２项下制备的供试品溶液各２．０m L,分别置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水１０m L,以质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同法制备空白对照溶液,全波长扫描４００~９００n m.结果对照品溶液和供试品溶液均在７６０n m波长处有最大吸收,因此选择样品的检测波长为７６０n m.２．１．４㊀样品的测定㊀总酚的检测:精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,摇匀,再加水１０m L,摇匀,用质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,测定各溶液吸光度值并计算含量.未被吸附多酚的检测:称取０．６g干酪素,置于１００m L具塞锥形瓶中,精密加入２．１．２项下制备的供试品溶液２５m L,密塞,３０ħ水浴中保温１h,期间时时振摇,取出放冷至室温,摇匀,滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２．０m L,按照总酚检测方法中自 加入磷钼钨酸试液１．０m L 起,制备样品,依法测定吸光度值,计算总鞣质含量,公式:总鞣质含量＝总酚含量－未被吸附的多酚含量.２．１．５㊀方法学考察２．１．５．１㊀线性关系考察㊀精密量取２．１．１项下制备的对照品溶液０．５,１．０,２．０,３．０,４．０和５．０m L,分别置于６个２５m L棕色量瓶中,先分别加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水定容至１３m L,以质量浓度为２９０g L－１体积分数为２９％的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,依法测定吸光度值A.以对照品质量浓度为横坐标(x)㊁吸光度值A为纵坐标(y),绘制标准曲线,计算回归方程为y１＝０．１００２x１－０．００３３,r１＝０．９９９６(n ＝６).说明没食子酸质量浓度在１．０００８~１０．０８００μg m L－１范围内与吸光度值的线性关系良好.２．１．５．２㊀精密度实验㊀精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,按照２．１．４项下方法测定供试品溶液的吸光度值,连续测定６次.结果６次吸光度R S D值为０．７７％(n＝６),表明该仪器精密度良好.２．１．５．３㊀重复性实验㊀精密称取同一批石榴花药材粉末６份,按照２．１．２项下方法制备供试品溶液,按照２．１．４项下方法检测总酚与未被吸附的多酚,计算样品中总鞣质的含量.结果６份样品的平均总鞣质含量为４９．６７m g g－１,R S D值为２．４３％(n＝６),说明该检测方法重复性良好.２．１．５．４㊀稳定性实验㊀取２．１．２项下制备的供试品溶液,在显色后的０,１５,３０,４０,５０和６０m i n测定吸光度值A.结果溶液在１h内吸光度R S D值为２．８６％(n ＝６),表明供试品溶液在配制后１h内稳定性良好.２．１．５．５㊀加样回收实验㊀精密称取石榴花药材粉末０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h后,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液５．０m L,６份,分别置于５０m L棕色量瓶中,精密加入２．１．１项下制备的没食子酸对照品溶液８．０m L,用水稀释至刻度,摇匀.按照２．１．４项下样品检测方法测定吸光度值,计算总鞣质含量及回收率.结果６份样品的平均回收率为９９．１０％,R S D值为２．００％.２．２㊀没食子酸和鞣花酸的含量测定２．２．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸与鞣花酸对照品适量,分别置于２５m L棕色量瓶中,加甲醇溶解并制成质量浓度分别为０．４５２和０．２４２m g m L－１的没食子酸对照品储备液和鞣花酸对照品储备液.精密吸取上述没食子酸对照品储备液２ ０和５．０m L,加甲醇分别定容至２５m L量瓶中,制成质量浓度为０ ０３６１６和０．０９０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液;精密吸取鞣花酸对照品储备液１．０m L,置于１０m L量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成质量浓度为０ ０２４２m g m L－１的鞣花酸对照品溶液.２．２．２㊀供试品溶液的制备㊀没食子酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．３g,加水４０m L,回流提取４５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５μm微孔滤膜过滤,即得[１６Ｇ１７].鞣花酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．１g,加甲醇４０m L,回流提取１５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５u m微孔滤膜过滤,即得[１８Ｇ１９].２．３㊀色谱条件㊀色谱柱:W a t e r sX B r i d g eC１８(２５０m mˑ４．６m m,５μm);没食子酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(１ʒ９９);鞣花酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(２４ʒ７６);检测波长:２５４n m;流速:１．０m L m i n－１;进样量:１０μL;柱温:３０ħ[１５Ｇ２０].色谱图见图１.h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e th t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n et 图１㊀H P L C 图A．没食子酸对照品;B ．没食子酸样品;C ．鞣花酸对照品;D．鞣花酸样品;１．没食子酸;２．鞣花酸.F i g ．１H P L Cc h r o m a t o g r a m s A．r e f e r e n c e s u b s t a n c eo f g a l l i ca c i d ;B ．s a m pl eo f g a l l i ca c i d ;C ．r e f e r e n c e s u b s t a n c e o f e l l a g i c a c i d ;D．s a m p l e o f e l l a gi c a c i d ;１．g a l l i c a c i d ;２．e l l a gi c a c i d ．２．４㊀标准曲线的绘制与线性关系考察㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸对照品溶液２．０,５．０,８ ０,１１．０和１４．０μL ,鞣花酸对照品溶液１．０,３．０,５．０,７．０和９．０μL ,分别按照２．３项下色谱条件进样分析,以对照品峰面积为纵坐标(y )㊁进样量为横坐标(x )进行线性回归,得没食子酸和鞣花酸的回归方程分别为:y２＝３８８６３１１．６３x ２－２５１６．４４(r ２＝０ ９９９９)和y ３＝１０５４５５７０．２５x ３－４６２２４．００,(r ３＝０ ９９９９).结果表明,没食子酸与鞣花酸含量分别在０．０７２３２~０．５０６２０和０．０２４２０~０．２１７８０μg 范围内,进样量与峰面积线性关系良好.`２．５㊀精密度实验㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸和鞣花酸对照品溶液,按照２．３项下色谱条件注入液相色谱仪,重复进样６次,记录各自峰面积,没食子酸峰面积的R S D 值为０．５８％,鞣花酸峰面积的R S D 值为０．５３％.２．６㊀重复性实验㊀精密称取石榴花药材粉末(和田皮山县),按照２．２．２项下方法平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件分别测定没食子酸和鞣花酸的含量,结果６份样品中没食子酸和鞣花酸的平均含量分别为２．５１和３．３７m gg －１,R S D 值分别为２．０６％和１．７９％(n ＝６).２．７㊀稳定性实验㊀精密称取石榴花药材细粉(和田皮山县),按照２．２．２项下方法制备供试品溶液,分别在相应色谱条件下于０,２,４,６,８,１２和２４h 进样１０μL ,测定没食子酸和鞣花酸峰面积R S D 值分别为１ ０２％和１ ８７％(n ＝６).２．８㊀回收率测定㊀结果见表１.２．８．１㊀没食子酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．２５g ,加入２．２．１项下制备的质量浓度为０．０９０４m gm L －１的没食子酸对照品溶液３．５m L ,置于圆底烧瓶中,加１５m L 水回流提取４５m i n ,放冷至室温,定容至２５m L 量瓶中,平行制备６份供试品溶液,按照２ ３项下色谱条件进样测定,结果没食子酸的平均回收率为１００．９２％,R S D 值为１ ８５％.２．８．２㊀鞣花酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．０６g ,加入质量浓度为０ ２４２m gm L －１的鞣花酸对照品储备液０．８m L ,置于圆底烧瓶中,加入４０m L 甲醇回流提取１５m i n ,放冷至室温,定容至５０m L ,平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件进样测定,鞣花酸的平均回收率为１０１．３０％,R S D 值为１．７８％.表１㊀回收率测定结果T a b ．１R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t (n ＝６)成分样品量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/％平均回收率/％R S D/％没食子酸６４１．５６３１６．４０９７０．６７１０１．９８１００．９２１．８５６３８．０４３１６．４０９８０．８２１０４．１３６２８．００３１６．４０９３８．１８９９．０１６３４．７８３１６．４０９５３．２１１００．３２６４７．８３３１６．４０９６１．８２９９．６３６５０．５９３１６．４０９６９．７３１００．４２鞣花酸１７６．９３１９３．６０３６８．９７９９．１２１０１．３０１．７８１７３．２２１９３．６０３６９．２８１０１．４２１８６．３６１９３．６０３８６．４７１０３．４９１７３．８９１９３．６０３７３．３１１０３．３５１９１．７５１９３．６０３８６．３７１００．５３１８２．３２１９３．６０３７５．７１９９．８９２．９㊀样品的含量测定㊀按照２．２．２项下方法分别制备没食子酸和鞣花酸含量测定用供试品溶液,分别测定总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,结果见表２.表２㊀不同产地石榴花含量测定结果T a b．２D e t e r m i n a t i o no f t h ec o n t e n t so f p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a s产地总鞣质含量/m g g－１没食子酸含量/m g g－１鞣花酸含量/m g g－１库车县６２．７９２．３９５．３４和田于田县８５．６２２．６３３．０９喀什叶城县５８．３７３．８１２．３７和田洛浦县４５．４５２．６３３．２９和田皮山县１１３．９８３．１８５．２２和田墨玉县４２．６２２．５５４．４５和田县３８．４４２．５１３．２３喀什疏附县６０．４３３．４１３．０４阿图什市６０．９８３．６３４．３２３㊀讨论石榴花药材收载于«中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)»１９９９年版中,原标准仅有药材的显微鉴别项,未对其含量进行说明.本研究通过收集新疆不同产地的石榴花,检测其总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,为新疆石榴花的质量控制提供理论依据.本研究采用梯度洗脱同时测定没食子酸与鞣花酸的含量,但由于石榴花中没食子酸与鞣花酸含量差异较大,同时检测峰面积差异较大,为了尽可能减小２种成分相互间含量的误差,且２种成分的样品制备条件亦不同,故选择以不同色谱条件㊁分别制备样品进行检测.所得各峰的分离度与拖尾因子均符合«中国药典»２０１５年版要求,峰形更好㊁干扰较小.该方法灵敏度高㊁分离度好㊁测定迅速㊁结果准确,为石榴花的质量控制提供了实验依据.本研究对新疆维吾尔自治区内不同产地石榴花进行检测发现,石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量各有差异,和田皮山县石榴花的３种成分含量均显著高于其他产区石榴花,这一研究结果可能与新疆皮山县的 皮亚曼石榴 的久负盛名有关.同时对于开发利用石榴花提供了一定的参考依据.若利用这部分资源开发新制剂,可增加石榴的附加值,提高经济效益.参考文献:[１]㊀吴立军．天然药物化学[M]．５版．北京:人民卫生出版社,１９８８:３Ｇ１６．[２]㊀中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准:维吾尔药分册[M]．乌鲁木齐:新疆人民卫生出版社,２０１４:１６．[３]㊀H u a n g T H W,P e n g G,K o t aB P,e ta l．P o m e g r a n a t ef l o w e r i m p r o v e s c a r d i a c l i p i dm e t a b o l i s m i n a d i a b e t i c r a tm o d e l:r o l e o f l o w e r i n g c i r c u l a t i n g l i p i d s[J]．B r i t J P h a r m,２００５,１４５:７６７Ｇ７７４．[４]㊀陈孝娟,顾正一,徐芳,等．不同产地的石榴皮总多酚的含量测定[J]．时珍国医国药,２０１１,２２(３):５４１Ｇ５４３．[５]㊀陈志伟,程鹏,王如刚,等．石榴花挥发油化学成分的G CＧM S分析及体外抗氧化活性测定[J]．中国医院药学杂志,２０１３,３３(４):２８０Ｇ２８２．[６]㊀钱世兵,开伟华,金家宏,等．不同产地石榴皮总黄酮含量及抗氧化活性比较研究[J]．首都医药,２０１４,(１２):８７Ｇ８８．[７]㊀张立华,张元湖,孙蕾,等．鞣花酸和三萜类物质在石榴不同器官中的分布[J]．食品科学,２０１５,３６(６):１３６Ｇ１３９．[８]㊀崔园园,陈志敏,张美,等．石榴皮炮制前后总鞣质及鞣花酸㊁安石榴苷含量变化研究[J]．亚太传统医药,２０１５,１１(２１):３８Ｇ４０．[９]㊀楚红英,罗晓,李瑜．石榴花中黄酮类成分的提取与含量测定[J]．中国酿造,２０１６,３５(２):１２７Ｇ１３０．[１０]杨彦霞,闫福林,王翔．石榴花化学成分研究[J]．中药材,２０１４,３７(５):８０４Ｇ８０７．[１１]张媛媛,刘福雪,乾康,等．正交试验优选诃子中总鞣质提取工艺研究[J]．江西中医药,２０１６,４７(４):６７Ｇ７０．[１２]周本宏,易慧兰,王耀华,等．地榆中总鞣质超声提取工艺研究[J]．中国民族民间医药,２０１５,(１):２７Ｇ２９．[１３]娄华勇,刘亚洲,张文芳,等．拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定[J]．广西植物,２０１６,３６(６):７５２Ｇ７５７．[１４]朱林燕,孔子铭,谢建峰,等．藏药二十一味寒水石丸中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定[J]．西南民族大学学报:自然科学版,２０１４,４０(３):３８８Ｇ３９３．[１５]黄耀广,陈小雪,陈秀英．诃子㊁西青果和毛诃子的含量比较研究[J]．西北药学杂志,２０１７,３２(２):１５４Ｇ１５７．[１６]周小雅,梁光毅,刘雪梅．高效液相色谱法测定草龙中没食子酸的含量[J]．西北药学杂志,２０１４,２９(３):２３５Ｇ２３７．[１７]王奉悦,李汝卓,汪敏,等．西青果总鞣质中没食子酸和没食子酸乙酯含量测定及抗菌作用研究[J]．吉林医药学院学报,２０１７,３８(４):２４３Ｇ２４６．[１８]盛达成,陈凌,王文茂,等．高效液相色谱法同时分析五倍子提取物中的没食子酸和鞣花酸[J]．中国农学通报,２０１３,２９(４):１４８Ｇ１５４．[１９]杨小玲,刘地发,刘伟,等．山香圆叶药材中鞣花酸的提取分离与含量测定[J]．中国实验方剂学杂志,２０１４,２０(１０):５４Ｇ５７．[２０]李建梅,吐鲁洪 卡地尔,希尔艾力 吐尔逊．高效液相色谱法测定伊提日非力３种剂型中没食子酸和鞣花酸的含量[J]．医药导报,２０１８,３７(１):９１Ｇ９４．(收稿日期:２０１８Ｇ０６Ｇ３０)h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t。
石榴皮、石榴瓤及石榴籽的化学成分比较研究
石榴皮、石榴瓤及石榴籽的化学成分比较研究为比较石榴皮、石榴内瓤和石榴籽化学成分的差异，研究建立了石榴皮饮片的HPLC指纹图谱，对三者的化学成分进行了比较，并对没食子酸和鞣花酸含量进行测定。
结果表明，HPLC图谱可见石榴皮与石榴瓤之间化学成分无明显差别，仅成分含量有所不同，而石榴籽与其他二者化学成分存在较大的差异。
石榴皮中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.33%，0.59%，石榴瓤中没食子酸和鞣花酸的质量分数分别为0.52%，0.38%。
石榴籽中仅检测到鞣花酸，质量分数为0.01%。
由此可见，在石榴皮饮片净制过程中应去净石榴籽，以免影响饮片质量和临床疗效。
内瓤在保证充分干燥的前提下，可以保留。
标签：石榴皮；石榴瓤；石榴籽；HPLC指纹图谱；没食子酸；鞣花酸石榴皮始载于《雷公炮炙论》，为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效，是临床常用的传统中药之一。
石榴皮约占到石榴质量的20%～30%[1]，石榴皮饮片的制备方法，2010年版《中国药典》描述如下“除去杂质，洗净，切块，干燥”[2]。
《全国中药炮制规范》中要求“除去杂质，去净残留的内瓤及种子，洗净，切块，干燥，或洗净，干燥后捣碎”[3]。
然而在对市场销售的石榴皮饮片调研中发现，市售石榴皮饮片中往往都含有大量石榴瓤和石榴籽，有一些样品中瓤和籽的量甚至超过了15%。
掺杂了大量内瓤和种子的石榴皮饮片是否会对其质量产生影响，石榴瓤和种子中化学成分与石榴皮又有何差异呢？针对上述问题，本研究建立了石榴皮饮片HPLC指纹图谱，采用该色谱条件对三者化学成分进行了比较，同时测定了石榴皮主要成分没食子酸和鞣花酸在三者中的含量情况，初步探讨了石榴皮、内瓤和籽化学成分的异同，本研究可为石榴皮饮片的净制提供一定的试验依据。
1 材料Waters 2695高效液相色谱仪；Waters 2996 DAD检测器；R200D 1/10万电子天平（德国Sartorius）；LC-350A超声波中药处理机（济宁市中区鲁超仪器厂）。
HPLC测定石榴皮提取物颗粒剂中不同时期鞣花酸含量的变化
３ ０・
中国兽药 杂志
２ １ ，６ ２ ： ３／ 杰 ， ０ ２ ４ （ ）３ ０～ ２ 任 等
ＨＬ Ｐ Ｃ测 定石 榴 皮 提 取 物 颗粒 剂 中 不 同 时期 鞣 花 酸含 量 的变 化
任 杰， 姚敬 明， 武果桃 ， 樊振华 ， 娟 ， 忻 ， 赵 吴 刘文俊 ， 孟冬霞
（ 山西省农科院畜牧兽医研究所 ， 太原 ０ ０ ３ ） ３０ ２
４ ６ ｍｍ，５ ／ ． ｘ ｍ） ａ ５ ｍ ｎ ０ ℃ ． Ｔ ｅ ｍｏ ｉ ｈ ｓ ｏ ｓｓｅ ｆ ａ ｍｉｔｒ ｆａ ｅｏ ｉ ｉ 一１ ２ ｔ２ ４ ｔ ａ ｄ ３ ｉ ｈ ｂｌ ｐ ａｅ ｃ ｎ ｉｔｄ ｏ ｘｕ ｅ ｏ ｃ ｔｎｔ ｌ ｅ ｒｅ ． ％
ＲＥ ｉ Ｎ Ｊｅ，ＹＡ ｉｇ—ｍｉｇ Ｏ Ｊｎ ｎ ，Ｗ Ｕ Ｇｕ ｏ—ｔｏ，Ｆ Ｎ Ｚ ｅ ａ Ａ ｈ ｎ—ｈ ａ ＨＡ ｕ ｎ， ｕ ，Ｚ Ｏ Ｊａ
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ห้องสมุดไป่ตู้
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｓ ｒ ｃ ：Ｔｈ ｌａ ｉ ｃｄ ｉ ｈ ｒ ｎ ｌ ｓ ｏ ｘ ｒ ｃｓ ｏ ｎｉａ ｇｒ ｎ ｔ ｍ ｅ ｅｌｇｃ ａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｇ ａ ｕ ｅ ｆ ｅ ｔａ ｔ ｆＰｕ ｃ ａ ａ ｕ Ｌ． ｐ ｒｃ ｒ ｉ ｉ ｅ ｅ ｔｐｅ ｏ ｓ ｗａ ｅ ｉａ ｐ ｎ ｄ ｆ ｒ ｎ ｒ ｄ ｓ ｆ ｉ
RP-HPLC法测定石榴汁中鞣花酸的含量
测石榴汁中鞣花酸(Ellagic acid)的方法，为石榴汁 的研究与开发提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 新鲜石榴：四川西昌；甲醇：Sigma公司，色 谱纯；鞣花酸对照品：纯度≥98%，山东中药化 学标准品工程技术研究中心；Milli-Q超纯水。 1.2 仪器与设备 LC-20AB HPLC系统：配有SPD-M20A紫外 检测器，日本岛津公司；Mnli-Q Biocel超纯水系 统；超声波清洗器；万分之一电子天平。 1.3 方法 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Arcus EP-C 18 (250 m m × 4 . 6 m m ， 5 μ m ) ； 流 动 相 ： 甲 醇 ( A ) ， TFA(0.1%)(B)；梯度洗脱条件 ：0~10 min，B 95%~85%；10~16 min，B 85%；16~16.5 min， B 85%~60%；16.5~36.5 min ，B 60%；36.5~37 min，B 60%~95%；37~45 min，B 95%；柱温35 ℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL；检测波长 254 nm。在此色谱条件下，鞣花酸特征峰峰型良 好，其色谱图如图1所示。
丰富的抗氧化成分，如鞣花酸、石榴素、芹菜配 基、芹菜配基-7-O-B-D-吡喃葡萄糖苷、芦丁、 3,3’,4’,5,7-五羟基黄烷酮、3,3’,4’,5,7-五羟 基黄烷酮-6-D-吡喃葡萄糖苷等[3]。因此对其保健 价值的开发也具有十分重要的意义。已有多篇文 献报道了检测石榴汁中总多酚的含量测定方法， 尚未见到检测石榴汁中特定鞣质成分的报道。本 文采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)，建立检
食品科技
2012年 第 37卷 第 4期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
高效液相色谱法测定含石榴成分化妆品中鞣花酸的含量
高效液相色谱法测定含石榴成分化妆品中鞣花酸的含量李笑;茅丽尔;汪晗;卜振军;马宁【摘要】To establish the determination method of the content of ellagic acid in cosmetics, using Hypersil ODS2(250 mm × 4.6 mm × 5 μm) chromatographic column with mobile phase of acetonitrile-0.2% phosphoric acid (volume ratio 25/75) at the flow rate of 1.0 mL/min, the detection wavelength was 254 nm and the column temperature was maintained at 30 ℃, the samples were analyzed by HPLC. The results showed that the linear range of ellagic acid amount with peak area were in the range of 0.0009-0.072 μg (r = 0.999 7). RSDs of precision, stability, and reproducibility tests were all lower than 2%. Average recovery rate was 100.19%(RSD = 2.41%, n = 9). The method is accurate, reliable and reproducible, which can be used for quality control of ellagic acid in pomegranate cosmetics.%为建立以高效液相色谱法测定化妆品中鞣花酸的方法,采用Hypersil ODS2(250 mm × 4.6 mm × 5 μm)色谱柱,在流动相为乙腈-0.2%(质量分数)磷酸(体积比25:75)、流速1.0 mL/min、检测波长254 nm、柱温30 ℃的条件下,进行高效液相色谱法测定.结果发现,鞣花酸的进样量在0.0009 ~ 0.072 μg范围内与峰面积呈现良好线性关系(r =0.9997).方法的精密度、稳定性、重复性试验的相对标准偏差(RSD)<2.0%,平均加样回收率为100.19%,RSD为2.41%(n = 9).该方法准确、稳定、重复性好,可用于含石榴成分化妆品中鞣花酸的含量测定.【期刊名称】《香料香精化妆品》【年(卷),期】2018(000)001【总页数】4页(P42-44,47)【关键词】石榴;化妆品;鞣花酸;含量测定;高效液相色谱法【作者】李笑;茅丽尔;汪晗;卜振军;马宁【作者单位】长沙医学院药学院,湖南长沙 410219;长沙医学院药学院,湖南长沙410219;长沙医学院药学院,湖南长沙 410219;长沙医学院药学院,湖南长沙410219;长沙医学院药学院,湖南长沙 410219【正文语种】中文石榴（Punica granatum L.）又名安石榴、甘石榴、丹若、若榴、天浆等[1]，被称为果品中的圣果，具有独特的美容功效。
HPLC法同时测定石榴皮中4种多酚类成分的含量
HPLC法同时测定石榴皮中4种多酚类成分的含量邓佩欣;周文财;高雅媛;陈炼明;何洋【摘要】建立同时测定石榴皮中没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量的高效液相色谱法.方法:色谱柱为Thermo ODS-2 Hypersil柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为272 nm,柱温为室温.结果表明:没食子酸在2.448~19.58μg·mL-1(r=0.9998)的浓度范围内、石榴皮鞣素在20.80~166.4μg·mL-1(r=0.9998)的浓度范围内、安石榴苷在80.00~640.0μg·mL-1(r=0.9997)的浓度范围内,鞣花酸在40.10~320.8μg·mL-1(r=0.9995)的浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.8%、100.1%、99.5%、和99.9%,RSD分别为0.87%、1.2%、1.2%和1.3%.本文所建立方法快速准确,专属性强,重复性好,可为全面控制石榴皮质量提供依据.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2017(045)002【总页数】3页(P107-109)【关键词】石榴皮;没食子酸;石榴皮鞣素;安石榴苷;鞣花酸;HPLC【作者】邓佩欣;周文财;高雅媛;陈炼明;何洋【作者单位】广东药科大学医药化工学院, 广东中山 528458;广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山 528458;广东药科大学医药化工学院, 广东中山 528458;广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山 528458;广东药科大学医药化工学院, 广东中山 528458;广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山 528458;广东药科大学中药学院, 广东广州 510006;广东药科大学医药化工学院, 广东中山 528458;广东省化妆品工程技术研究中心,广东中山 528458【正文语种】中文【中图分类】O657石榴皮为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮。
石榴皮中鞣花酸的测定
可用来治疗细菌性痢疾、 阿米 巴痢疾和多种感染性
疾病 。石榴皮含多种化学成分 ， 如没食子酸 、 石榴皮 亭Ａ 石榴皮亭Ｂ 鞣云实精 、 、 、 鞣花酸 、 安石榴苷等。 鞣 花酸 （ｌａｉ ａｉ，Ａ 为石榴皮 中的有效成 份之 ｅ ｌｇ ｃ Ｅ ） ｃ ｄ 具有抵抗肺癌 、 食管癌 、 抗氧化等作用闭 目 ， 。 前
２２ 对 照 品溶 液的 制备 ．
精 密 称 取 鞣 花 酸 对 照 品适 量 ，用 甲醇 制 成 每 ｌＬ ０２ ｇ ｍ 含 ．ｍ 的溶液 ， 滤 ， 过 即得 。
２３ 供试 品溶液 的制 备 ．
精 密称 取 石 榴 皮 粉 末 ０ ｇ ． ，加 ８ｍ 水 浸 泡 ２ ０Ｌ
３ｍ ｎ 然后 超 声处 理 ６ｍ ｎ 过 滤 ， 液用 ０ ｍ ｌ ０ ｉ， ０ ｉ， 滤 ． ｏ ２ ／ Ｌ ａＯ Ｈ ， Ｎ Ｈ 调ｐ 至８ 转移至１０ Ｌ ％的。Ｎ Ｎ ０￣液 ０ｍ ／ ５ ａＣ ３ 中， 放置２ ｈ过滤 ， ４， 滤液 ， 滤液定容至２０ Ｌ 即得 。 ５ｍ ，
２ 方 法与 结果 ２１ 色谱 条 件 ．
２８ 回收 率 实验 ．
精密称取已知含量为５ ｍ ，的样品５ ，分别 ． ｇ ２ ｇ 份
加人相应 的鞣花酸对照品， 按供试 品溶液制备方法 制备并测定 ， 计算 回收率 ， 结果鞣花酸平均 回收率 为９ ．％， Ｓ 为 １ ％。见 表 １ ８４ Ｒ Ｄ ． ２ 。
新疆 中医药
２０ 年 ０８
第２ ６卷
第 ６期（ 总第 １８期 ） １
４ ３
石 榴 皮 中 鞣 花 酸 的 测 定
HPLC法测定新疆不同产地石榴皮中鞣花酸含量
HPLC法测定新疆不同产地石榴皮中鞣花酸含量马亮英;马桂芝;滕亮;高晓黎【摘要】目的建立测定新疆不同产地石榴皮中鞣花酸含量的方法.方法采用高效液相色谱法检测石榴皮中鞣花酸的含量:ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇∶乙酸乙酯∶磷酸二氢钾/磷酸(0.05 mol/L)(32∶2∶66)为流动相;流速为0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃.结果石榴皮中鞣花酸的线性范围为1.018 8~1 273.44 μg/ mL(r =0.999 9),平均回收率(n=9)为101.0%,RSD 为1.15%.经测定喀什市酸石榴皮中鞣花酸含量最高.结论 HPLC法简便、准确、重复性好,可用于石榴皮中鞣花酸含量的测定,为药材基原选择与石榴皮的质量控制提供了一定的依据.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2012(035)011【总页数】4页(P1483-1485,1489)【关键词】高效液相色谱法;石榴皮;鞣花酸【作者】马亮英;马桂芝;滕亮;高晓黎【作者单位】新疆医科大学第二附属医院药剂科,乌鲁木齐,830063;新疆医科大学药学院,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R93石榴皮是石榴科石榴属落叶灌木或小乔木[1-2]石榴(Punica granatum L.)的干燥果皮。
全世界共有1属[石榴属(Punica L.)]，2种，产于地中海及亚洲西部地区，现在主要分布在亚热带及温带地区，在我国南北各地区均有种植，新疆是我国最西部的石榴产区，石榴皮是《中国药典》中收录的一味重要的药材，具有涩肠、止血、驱虫及治久泻、久痢等功效，主要用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾和多种感染性疾病；具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤及免疫调节作用[3-4]。
鞣花酸为石榴皮中的有效成分之一，具有抗肺癌、食管癌及抗氧化等作用，同时天然鞣花酸可作为医药、保健品、化妆品及科研的原料[5-6]。
HPLC测定石榴皮提取物颗粒剂中不同时期鞣花酸含量的变化
中国兽药杂志2012，46（2）：30 32/任杰，等HPLC 测定石榴皮提取物颗粒剂中不同时期鞣花酸含量的变化任杰，姚敬明，武果桃，樊振华，赵娟，吴忻，刘文俊，孟冬霞（山西省农科院畜牧兽医研究所，太原030032）［收稿日期］2011－09－20［文献标识码］A ［文章编号］1002－1280（2012）02－0030－03［中图分类号］R284［摘要］采用高效液相色谱法测定了石榴皮提取物颗粒剂在不同时期的有效成分鞣花酸含量的变化。
色谱柱PT －230A Colume heater Apollo C 18柱（150mm ˑ4．6mm ，5μm ），柱温30ħ；流动相为乙腈－1．2%磷酸溶液（20ʒ80）；检测波长254nm ；流速1．0mL /min 。
结果显示，鞣花酸含量测定的线性范围0．52 5．20μg （R 2=0．99786），平均加样回收率为97．8%，RSD 为1．6%。
样品于2008年3月25日测定的颗粒剂鞣花酸含量为0．495mg /g ，2011年3月25日测定的含量为0．439mg /g 。
表明该石榴皮提取物颗粒剂稳定性良好，有效期可达到三年以上。
该方法简便、准确，可用于中药石榴皮的质量控制。
［关键词］HPLC ；石榴皮提取物颗粒剂；鞣花酸；含量变化；稳定性作者简介：任杰，硕士，助理研究员，从事中兽医研究。
E －mail ：xmsrenjie@163．comDetection of Ellagic Acid in the Granules of Extracts ofPunica granatum L．Pericarp in Different Periods by HPLCREN Jie ，YAO Jing －ming ，WU Guo －tao ，FAN Zhen －hua ，ZHAO Juan ，WU Xin ，LIU Wen －jun ，MENG Dong －xia（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science ，Shanxi Academy of Agricultural Science ，Taiyuan 030032，China ）Abstract ：The ellagic acid in the granules of extracts of Punica granatum L．pericarp in different periods was detected by HPLC．Chromatography was performed on a PT －230A Colume heater Apollo C 18column （150mm ˑ4．6mm ，5μm ）at 254nm and 30ħ．The mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile －1．2%phosphoric acid （20ʒ80）at a flow rate of 1．0mL /min．The linear range of ellagic acid was 0．52 5．20μg with （R 2=0．99786）．The average recovery was 97．8%and RSD was 1．6%．The samples of March 25，2008and March 25，2011were 0．495mg /g ，0．439mg /g．The results showed that the granules of extracts of Punica granatum L．pericarp was stable within three years．The method is simple and accurate and reproducibe for quality control of Punica granatum L．pericarp．Key words ：HPLC ；pomegranate rind extract ；granules ellagic acid ；content changes ；stability 石榴皮为石榴科植物石榴的干燥果皮，气微，味苦涩。
石榴皮中活性成分鞣花酸的平衡溶解度与油水分配系数的测定
石榴皮中活性成分鞣花酸的平衡溶解度与油水分配系数的测定施洋;孙芸;谢莉;田莉【摘要】目的：考察鞣花酸在25℃和37℃下不同 pH 磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度与表观油水分配系数（P app ）。
方法采用紫外-可见分光光度法测定鞣花酸在不同 pH 缓冲液中的平衡溶解度；采用摇瓶法测定鞣花酸的 P app 值。
结果25℃时鞣花酸在 pH 值为1．2、2．5、5．0、5．8、6．8、7．4、7．8～8．0的磷酸盐缓冲液中的平衡溶解度分别为2．77、4．97、8．14、6．16、1．22、1．33、1．01 g／mL，相应条件下 P app 值分别为－3．20、－2．36、－2．49、－2．50、－2．48、－2．37、－2．22；37℃时鞣花酸在上述 pH 缓冲液中的平衡溶解度为3．25、5．08、8．04、6．39、1．02、1．54、1．14 g／mL，相应条件下的 P app 值分别为－2．38、－2．32、－2．38、－2．41、－2．44、－2．38、－2．18。
结论鞣花酸在酸性溶液中的平衡溶解度随 pH 值的升高而增大，在中性及弱碱性溶液中其溶解度较小。
在 pH 值为1．2～8．0时，鞣花酸的 P app 值均＜－2，表明鞣花酸不易透过生物膜，推测其在胃肠道的吸收不好，且温度对鞣花酸的 P app 值几乎无影响。
%Objective To determine the equilibrium solubility and the apperent oli/water partion coefficient (Papp )of ellagic acid in different pH phosphate buffer solutions in 25℃ and 37℃.Methods Ultraviol et spectrophotometry was employed to determine the equilibrium solubility of ellagic acid in phosphate buffer solutions of different pH value,and the P app values of ellagic acid were determined by shaking flask. Results At 25℃ the equilibrium solubility o f ellagic acid in different phosphate buffer solutions of pH 1.2, 2.5,5.0,5.8,6.8,7.4,7.8 - 8.0 were 2.77,4.97,8.14,6.16,1.22,1.33,1.01 g/mL,and the P app values of ellagicacid were - 3.20,- 2.36,- 2.49,- 2.50,- 2.48,- 2.37,- 2.22 respectively;At 37℃ the equilibrium solubility of ellagic acid in different phosphate buffer solutions of pH 1.2,2.5,5.0,5.8,6.8,7.4, 7.8-8.0 were3.25,5.08,8.04,6.39,1.02,1.54,1.14 g/mL,and the P app values of ellagic acid were -2.38,-2.32,- 2.38,- 2.41,- 2.44,- 2.38,- 2.18 respectively.Conclusion The equilibrium solubility of ellagic acid is increasing with pH increases in acidic solution and its solubility is less in neutral and weak al-kaline solution.The P app values of ellagic acid were <-2 at the pH range from 1.2 to 8.0,which shows it is not easy to through the biological membrane and the absorption is poor in the gastrointestinal tract.The temperature has little influence on the P app values of ellagic acid.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】4页(P145-148)【关键词】鞣花酸;平衡溶解度;表观油水分配系数【作者】施洋;孙芸;谢莉;田莉【作者单位】新疆医科大学学报编辑部，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011;新疆医科大学中医学院，乌鲁木齐 830011; 新疆医科大学新疆名医名方与特色方剂学重点实验室，乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】R943鞣花酸是石榴皮中的主要多酚类成分，属于没食子酸的二聚体衍生物，化学名为联二没食子酸内酯，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗诱变、抗癌变等作用，被广泛应用于医疗、化妆品、食品等领域[1-2]。
鞣花酸含量检测方法
鞣花酸含量检测方法一、研究背景鞣花酸是一种具有鞣质作用的有机酸，广泛存在于植物中，特别是木本植物的根、茎和叶部。
鞣花酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性，因此在医药、食品、皮革等领域具有广泛的应用价值。
准确测定鞣花酸含量对于研究其生物活性和应用前景具有重要意义。
二、方法原理目前常用的鞣花酸含量检测方法主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法和滴定法等。
其中，高效液相色谱法是一种常用的分析方法，其原理是利用高效液相色谱仪对样品中的鞣花酸进行分离和定量测定。
三、实验步骤1. 样品准备：将待测样品粉碎并过筛，取适量样品称重。
2. 样品提取：将样品与适量的溶剂（如乙酸乙酯）混合，超声提取一定时间后，离心沉淀，取上清液待用。
3. 样品分离：将上清液经过固相萃取柱进行分离，洗脱得到鞣花酸纯化溶液。
4. 样品检测：将纯化溶液进一步稀释后注入高效液相色谱仪中，设置合适的流动相和检测条件进行分析。
5. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中鞣花酸的含量。
四、应用前景鞣花酸含量检测方法在医药、食品、皮革等领域具有广泛的应用前景。
1. 医药领域：鞣花酸是一种天然的抗氧化剂，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性，因此可用于药物研发和制备。
2. 食品领域：鞣花酸可用作食品添加剂，具有保鲜、防腐、增稠等作用，可以延长食品的保质期并改善口感。
3. 皮革领域：鞣花酸是一种重要的鞣质物质，可用于制作高品质的皮革制品，提高皮革的柔软度和耐久性。
鞣花酸含量检测方法是研究鞣花酸生物活性和应用前景的关键手段之一。
高效液相色谱法是常用的分析方法，通过对样品的提取、分离和检测，可以准确测定鞣花酸的含量。
该方法在医药、食品、皮革等领域具有广泛的应用前景，对于相关行业的发展具有重要意义。
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石 榴 皮 为 石 榴 科 植 物石 榴 （ ｕ ｉａ ｇ ａ ａｕ Ｐ ｎｃ ｒ ｎ ｔｍ Ｌ ） ． 的果 皮 ， 温 ，味酸 、 ， 大肠经 ， 性 涩 归 具有 涩肠 止
ｍｉ ａ ｉ ｎ ｏｆｅ ｌ ｇ ｃａ ｉ ｎ ｔ ｘ ｒ ｃ ｆｐ ｍ ｅ ａ ａ ｅｐｅ １ ｎ ｔｏ ｌａ ｉ ｃｄ ｉ ｈｅｅ ｔ ａ ｔｏ ｏ ｇｒ ｎ ｔ ｅ．Ｍ ｅ ｈ ｄｓ Ｔｈ ｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｓｃ ｒ ｉ ｄ ｏｕ ｎ ｔｏ ｅ ｄ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｗａ ａ ｒｅ ｔｏ
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Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒｃ ：Ｏｂ ｅ ｔ ｅ Ｔｏ ｅ ｔ ｂｉｈ ａ ｉ ｈ ｐ ｅ ｓ ｒ ｉｕ ｄ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｙ （ ＬＣ）ｍｅｈ ｄ ｆ ｒｔ ｅ ｄ ｔｒ ｊｃｉ ｖ ｓａ ｌｓ ｎ ｈｇ ｒ ｓ ｕ ｅｌ ｉ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ＨＰ ｑ ｔ ｏ ｏ ｈ ｅ ｅ—
丁 楠 ，高 晓黎
（ 疆 医科 大 学 药 学 院 药 剂 ／ 新 物化 教 研 室 ， 鲁 木 齐 乌 ８０ １ ） ３ ０ １
摘要 ：目 的 建立 石榴 皮 提 取 物 中鞣 花 酸 含 量 的 ＨＰ Ｃ测 定 方 法 。 方 法 色 谱 条 件 ： 谱 柱 为 Ａｇｌ ｔ Ｃ Ｌ 色 ｉｎ ｅ Ｔ Ｃ８ ２ （ ． １（ ）４ ６ｍｍ￣２ ０ｍｍ， ｍ） 流 动 相 为 乙 酸 乙 酯 ： 酸 （ ． １ｒｏ／ ５ ５ ； 磷 Ｏ ０ ｎ ｌ Ｌ）： 酸 二 氢 钾 （ ． １ｔ ｌＬ 磷 Ｏ ０ ｏ／ ）：甲醇 ｏ
重 复 性好 ， 用 于 石 榴 皮 提 取 物 中鞣 花 酸 的含 量 测 定 。 可
ＨＰ Ｃ法 简 便 ， 确 ， Ｌ 准
关 键 词 ： 榴 皮 ； 花 酸 ；ＨＰ Ｃ 石 鞣 Ｌ
中图分类号 ：９４ Ｒ １ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ９５ ５ （ ０ ２ ０ — ７ ０ ０ １ ０ — ５ １ ２ １ ） ６０ ７ — ３
第 ３ ５卷 第 ６ 期
２１ Ｏ ２年 ６月
新 疆 医 科 大 学 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＸｉｊａ ｇ Ｍ ｅ ｉａ ｉｅｓｔ ｏ ｒ ａ ｎｉｎ ｄｃｌＵｎｖ ｒｉｙ ｏ
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ａ ｉ ｎ ｎ Ａｇ ｌ ｔＴＣ— １ （ ｃ ｌ ｍｎ （ ． ｅ Ｃ ８ ２） ｏ ｕ ４ ６ ｍｍ × ２ ０ ｍｍ ， ｍ ） ｗｉｈ ｍｏ ｉ ｈ ｓ ｏ ｓｓ ｅ ｆ ｅ ｈ ｌ ａ ｅ ａ ｅ ５ ５ｕ ｔ ｂ ｌ ｐ ａ ｅ ｃ ｎ ｉｔ ｄ ｏ ｔ ｙ ｃ ｔ ｔ ， ｅ
（ ． ５： Ｏ： ０：６ ） 流 速 １ｍＬ ｍｉ ； 测波 长 为 ２ ４ ｎ 柱 温 ２ Ｃ。 结 果 Ｏ０ ２ ２ ０； ／ ｎ检 ５ ｍ； ５。 鞣 花 酸 在 ５ ３ ￣１ １ ４ ￣ ／ ． ６ ７ ． ０／ ｍＩ 范 ｇ
围 内 与 峰 面积 呈 良好 的线 性 关 系 ， 均 回 收率 为 ９ ． ２ ，Ｒ Ｄ 为 １ ４ （ 平 ７ ８ Ｓ ．１ ”＝９ 。 结 论 ）
ｗａ ． ６ １ １ ４ ￣ ／ ｓ５ ３ ～ ７ ． ０／ ｍＬ．Ｔｈ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅ ｙｗａ ７ ８ ％ ａ ｄＲＳ ｗａ ． １ （ 一９ ．Ｃ ｎ ｌｓｏ ｇ ｅａ ｅａ ｅｒ ｃ ｖ ｒ ｓ９ ． ２ ｎ Ｄ ｓ１ ４ ） ｏ ｃｕ ｉｎ
Ｔｈｅ ｍｅ ｈ ｓ ｓｍ ｐ ｅ ａ ｃ ｒ ｔ ｎｄ ｒ ｐｒ ｄｕ ｉ ｅ ｆ ｒ ｄ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｌａ ｃ ａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｅ ｔ ａ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｏｄ ｉ ｉ ｌ ， ｃ ｕ ａ ｅ ａ ｅ ｏ ｃｂｌ ｏ ｅ ｅ ｍｉ ｔｏ ｆ ｅ ｌｇｉ ｃｄ ｉ ｈ ｘ ｒ ｃ ｆ ｐｏ ｇｒ ｎ ｔ ｅ １ ａ ａ ｅｐ ｅ． Ｋｅ ｒ ｓ ｏ ｅ ａ ａ ｅ ｐｅ ｌ ｌａ ｉ ｃｄ；ｈｉ ｈ ｐ ｅ ｓ ｅ ｌｑ ｄ ｃ ｏ ａ ｏｇ ａ ｈｙ （ ＰＬＣ） ｙ ｗｏ ｄ ：ｐ ｍ ｇｒ ｎ ｔ ｅ ；ｅｌ ｇ ｃ ａ ｉ ｇ ｒ ｓ ｕｒ ｉ ｕｉ ｈｒ ｍ ｔ ｒ ｐ Ｈ