新城疫病毒单抗酶联试剂盒与RT—PCR方法检测新城疫强毒感染的比较

中 图分 类 号 ： ８ ８ ３ ３ ￥ ５ ． ５
文献 标 识码 ： Ｂ
文 章编 号 ：５ ９ ６ ０ （０ ２ ０ — ０ ２０ ０ ２ — ０ ５ ２ ０ ） ８０ ２ — ２
的 阳性 样 品 的鸡 胚分 离 毒 ， 由本 室 保 存 。 １ ２ 棉 拭 样 品 常 州 、 州 和 上 海 等 地 鸡 场 现 场 采 ． 徐
合成。
ＤＶ １：‘ 一 ＴＧ Ａ Ａ ＴＴ ＣＴ ＴＧ Ａ Ｔ Ｇ ＧＣ Ａ ＧＧ Ｃ Ｔ ＣＴ ５Ｇ
Ｔ ＧＣ 一 ３’
Ｎ ＩＶ ２：‘ 一 Ｔ ＡＧ ＣＴ Ｔ ＧＧ Ａ ＧＧ Ａ Ｔ Ｇ Ｔ ＴＧ Ｇ ＣＡ Ｇ Ｃ ） ５Ｇ
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ＤＶ ３：。 一 Ｔ Ａ Ａ Ｇ ＣＴＴ Ａ Ｇ ＣＧ ＴＣＴ ＣＴＣ ＴＧ Ｔ ＣＴＣ ５Ｇ ＣＴ 一 ３’ Ｎ ＤＶ ４：‘ 一 Ｔ Ａ Ａ Ｇ ＣＴ ＴＧ Ａ ＣＧ Ａ ＣＣＣＴＧ Ｔ ＣＴ ＣＣ ５Ｇ
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区 分 强 弱 毒 ‘ 而 且 操 作 简 便 ， 便 于 临 床 活 检 。 试 。 ， 更 但 剂 盒 本 身 并 不 是 以针 对 ＮＤ 强 毒 的 ， 区 分 强 弱 毒 Ｖ 其 的 基 础 是 建 立 在 鸡 群 感 染 ＮＤＶ 后 排 毒 规 律 之 上 的 。 因 此 。 背 景 清 楚 且在 其 适 用 范 围 内 的 鸡 群 ， 用 试 对 应 剂 盒 可 准 确 方 便 的 监 测 鸡 群 是 否 感 染 ＮＤＶ 强 毒 ； 但 对 于 其 适 用 范 围 外 的 鸡 群 ， 剂 盒 只能 证 实 待 检 样 品 试 中是 否 存 在 ＮＤＶ， 是 不 是 强 毒 。 有 待 于 其 他 方 法 而 则 进一 步验证 。 ＲＴ— ＣＲ 方 法 直 接 根 据 ＮＤＶ 毒 力 的 决 Ｐ 定 性 基 因序 列 来 判 定 强 弱 毒 ， 确 特 异 、 便 快 捷 ， 准 方 但 该 方 法 成 本 较 高 ， 量 样 品 的 检 测 成 本 太 高 。 单 抗 酶 大 联 试 剂 盒 方 法 与 ＲＴ— ＣＲ 方 法 虽 然 各 有 优 缺 点 。 Ｐ 但 它 们 有 较 强 的 互 补 性 。 果 它 们 检 测 结 果 的 可 信 性 高 如 且 相 互 之 间 的 符 合 性 好 ， 这 两 种 方 法 相 结 合 便 可 以 将 建 立 一 种 有 较 大 实 用 价 值 的 检 测 ＮＤＶ 强 毒 的 方 法 。 本 试 验 便 试 图 通 过 将 这 两 种 方 法 比 较 ， 探 讨 如 何 将 来 这两 种方法 相结 合 。
集 样 品 以 及 门 诊 送 检 样 品 ， 经 试 剂 盒 检 测 ， 其 中 并 取 阳 性 样 品 ６份 ， 疑 样 品 ３份 和 阴 性 样 品 ５份 。 剂 可 试 盒 由本室 提 供 。 １ ＲＴ— ．３ ＰＣＲ 引 物 中 科 院 上 海 细 胞 研 究 所
新城 疫 （ ＮＤ） 威 胁 我 国 养 禽 业 的 头 号 疾 病 ， 是 病
因 此 ， 确 诊 ＮＩ 要 ）就 必 须 确 定 ＮＩＶ 强 毒 株 的 存 在 。 ） 在 众 多 区 分 ＮＩＶ 强 弱 毒 的 方 法 中 ， １ 典 方 法 ） 除 ｒ经 外 ． 抗 酶 联 试 剂 盒 方 法 。与 ＲＴ— 单 。 ＰＣＲ 方 法 有 较 大 的 实 际 应 用 价 值 。 试 剂 盒 方 法 以单 抗 捕 获 抗 原 ， 反 应 特 异 。 泄 殖 腔 采 集 样 品 不 仅 可 以利 用 绝 大 多 数 弱 从 毒 株 在 泄 殖 腔 复 制 增 殖 很 差 ， ＥＩＩ Ａ 不 能 检 出 以 用 Ｓ
１ 材 料 与 方 法 １ 病 毒 鸡 胚 分 离 毒 Ｃｈ ｃ ｅ Ｙｕ ｎ ｎ ９ ９ 、 ．１ ｉｋ ｎ／ ｎ ａ ／ ／ ７
Ｃｈ ｃ ｅ ／ ａ ｎａ ｇ／ ／ ７ ｉｋ ｎ ｈ ｏ ｉｎ １ ９ 、 Ｐｉｅ ｎ Ｈｕ ｉｉ ／ ／ ８ ２ ｇ ｏ ／ ａｙｎ ３ ９ 、 Ｇｏ ｓ ／ ｉｎ ｄ ／ ／ ８ ｈｃ ｅ ／ ｈ ｎ ｉ 山 西 ） ５ ９ 、 ｏ ｅ Ｊａ ｇ ｕ ＇ ９ 、 ｉｋ ｎ Ｓ ａ ｓ （ ４ ／ ／ ８
１ ４ 生 化 试 剂 ＡＭ Ｖ 反 转 录 酶 、 ＮＴＰ、 ｑ ． ｄ Ｔａ ＤＮＡ 聚 合 酶 为 Ｐｒ ｍｅ ａ公 司 产 品 。Ｓ ｏ ｇ ＤＳ、 ＲＮＡ 酶 抑 制 剂 （ ａ ｉ ） 低 分 子 量 ＰＣＲ Ｍ ａ ｋ ｒ均 购 自华 美 生 物 Ｒｎ ｓｎ 、 ｒｅ
工程 公 司 。
维普资讯 http://www来自中国兽医 杂志 ２ ０ ０ ２年（ ３ 第 ８卷） ８期 第
新 城 疫 病 毒 单 抗 酶 联 试 剂 盒 与 ＲＴ Ｐ — ＣＲ 方 法 检 测 新 城 疫 强毒 感 染 的 比较
董 伟 ． 刘 秀 梵 。张 如 宽
（ 州 大学畜牧兽 医学院 ，江苏 扬州 ２５０ ） 扬 ２ ０ ９
原 是 新 城 疫 病 毒 （ Ｖ） ＮＤ 。ＮＤＶ 只 有 一 个 血 清 型 ， 其 抗 原 性 一 致 ． 毒 力 差 异 很 大 。 强 毒 毒 株 可 引 起 易 感 但 鸡 群 高 发 病 率 和 高 死 亡 率 的 典 型 ＮＤ， 免 疫 鸡 群 则 在 引 起 低 死 亡 率 的 非 典 型 ＮＤ； 毒 株 不 致 病 ， 的 弱 弱 有 毒 株 还 被 用 作 弱 毒 疫 苗 。 于 弱 株 在 自然 界 中 广 泛 存 由 在 及 弱 毒 疫 苗 的 大 范 围 使 用 ， 弱 毒 株 与 强 毒 株 的 抗 而 原 性 高 度 一致 ， 样 。 毒 株 便 可 干 扰 ＮＤＶ 的 确 诊 。 这 弱
１ ５ 试 剂 盒 检 测 的 阳 性 样 品 的 鸡 胚 分 离 尿 囊 液 用 ． ＲＴ— ＰＣＲ 检 测 按 试 剂 盒 的 操 作 程 序 （ ． 样 和 上 １采 样 ： 灭 菌 棉 签 从 鸡 泄 殖 腔 采 取 样 品 反 复 冻 融 ３次 用 后 ， 冻 融 液 上 清 按 １ ０ ｌ孑 加 入 已 完 成 单 抗 包 被 取 ０ ／ Ｌ 的 酶 标 板 ， ７ １ ５ｈ， Ｐ Ｔ 洗 涤 ３次 ， ３次 １ ３ ． 用 ＢＳ 第 ０