诊断学课件：溶血性贫血的实验室检测
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溶血性贫血的实验室检查
红细胞形态改变。 ❖ ３.增生性贫血骨髓象。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验
❖ (1)红细胞寿命测定：用 51Cr标记红细胞测定红细胞的 半小衰于期15(天T1。/2)寿，命正缩常短红是细确胞诊25溶～血32性天贫。血溶最血直性接贫而血确时实常 的证据。
❖ (2)红细胞形态改变：血片中见到红细胞破裂的征象及 典型的异形红细胞。
验呈阳性。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ (5)含铁血黄素尿试验(Rous试验)
❖ 原理 含铁血黄素的铁离子在低铁氰化钾溶液中作用， 生成蓝色的铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。如尿液中脱 落的肾小管上皮细胞中含有含铁血黄素，用尿沉渣进 行此反应，在显微镜下观察尿沉渣中有深蓝色物质者 即为阳性。
❖ 正常结果 阴性
二、溶血性贫血确诊的实验室检验
❖ (一)显示红细胞破坏增加的依据 ❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验 ❖ 2.血浆中游离血红蛋白增高的有关检验 ❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (二)显示红细胞代偿增生的依据 ❖ 1 .外周血网织红细胞增多。 ❖ 2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生旺盛的
❖ 临床意义 慢性血管内溶血可呈现阳性，并持续数周。 常见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (1)血清非结合胆红素增高。 ❖ (2)尿中尿胆原排泄量增高，尿胆红素阴性。
(二)显示红细胞代偿增生的依据
1 .外周血网织红细胞增多。
2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生 旺盛的红细胞形态改变。如红细胞大小不均、 嗜多色性红细胞、点彩红细胞、Howell—Jo1ly 小体、Cabot环、有核红细胞等。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验
❖ (1)红细胞寿命测定：用 51Cr标记红细胞测定红细胞的 半小衰于期15(天T1。/2)寿，命正缩常短红是细确胞诊25溶～血32性天贫。血溶最血直性接贫而血确时实常 的证据。
❖ (2)红细胞形态改变：血片中见到红细胞破裂的征象及 典型的异形红细胞。
验呈阳性。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ (5)含铁血黄素尿试验(Rous试验)
❖ 原理 含铁血黄素的铁离子在低铁氰化钾溶液中作用， 生成蓝色的铁氰化铁，即普鲁士蓝反应。如尿液中脱 落的肾小管上皮细胞中含有含铁血黄素，用尿沉渣进 行此反应，在显微镜下观察尿沉渣中有深蓝色物质者 即为阳性。
❖ 正常结果 阴性
二、溶血性贫血确诊的实验室检验
❖ (一)显示红细胞破坏增加的依据 ❖ 1.红细胞寿命缩短，破坏增加的有关检验 ❖ 2.血浆中游离血红蛋白增高的有关检验 ❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (二)显示红细胞代偿增生的依据 ❖ 1 .外周血网织红细胞增多。 ❖ 2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生旺盛的
❖ 临床意义 慢性血管内溶血可呈现阳性，并持续数周。 常见于阵发性睡眠性血红蛋白尿。
(一)显示红细胞破坏增加的依据
❖ 3.胆红素代谢异常的表现 ❖ (1)血清非结合胆红素增高。 ❖ (2)尿中尿胆原排泄量增高，尿胆红素阴性。
(二)显示红细胞代偿增生的依据
1 .外周血网织红细胞增多。
2.外周血涂片中见到提示骨髓中红细胞系增生 旺盛的红细胞形态改变。如红细胞大小不均、 嗜多色性红细胞、点彩红细胞、Howell—Jo1ly 小体、Cabot环、有核红细胞等。
第九版诊断学配套课件 2.2 溶血性贫血的实验室检测
三、红细胞酶缺陷的检测
（二）氰化物-抗坏血酸试验
1.原理 ➢ 抗坏血酸钠与HbO2反应产生H2O2，氰化钠能抑制过氧化氢酶使H2O2不被分解，于是H2O2
与还原型谷胱甘肽（GSH）发生反应，产生氧化型谷胱甘肽（GSSG），NADPH使GSSG 再还原为GSH。 ➢ 如红细胞中催化NADPH形成的G6PD酶缺陷，则GSH产生减少，蓄积的H2O2会把亚铁型 的HbO2氧化成棕色的高铁血红蛋白。 2.参考值 （1）正常人血液要在4小时以上才变成棕色； （2）纯合子G6PD缺陷的血液变成棕色，在2小时内即变色，杂合子者要3～4小时变色。
二、红细胞膜缺陷的检测
（三）自身溶血试验及纠正试验
3.临床意义 （1）遗传性球形细胞增多症时，孵育后溶血明显增强，加入葡萄糖及ATP后均得到明显纠正 。 （2）Ⅰ型先天性非球形细胞性溶血性贫血（G6PD缺陷症）时自身溶血加重，加葡萄糖和 ATP均可部分纠正。 （3）Ⅱ型先天性非球形细胞性溶血性贫血（丙酮酸激酶缺陷症）自身溶血明显增强，加葡萄 糖不能纠正，加ATP才能纠正。
一、溶血性贫血的筛查检测
（五）红细胞寿命测定
1.原理 用51Cr标记红细胞检测红细胞半衰期。 2.正常值 正常红细胞半衰期为25～32天。 3.临床意义 溶血性贫血时常小于15天，这是确定溶血性贫血的可靠方法。
二、红细胞膜缺Байду номын сангаас的检测
（一）红细胞渗透脆性试验
1.原理 红细胞在低渗氯化钠溶液中细胞逐渐膨胀甚至破裂而溶血。 2.参考值 ➢ 开始溶血：0.42%～0.46%（4.2～4.6g/L）NaCl溶液 ➢ 完全溶血：0.28%～0.34%（2.8～3.4g/L）NaCl溶液 3.临床意义 （1）脆性增高： 遗传性球形细胞增多症、温抗体型自身免疫性溶血性贫血、遗传性椭圆 形细胞增多症等； （2）脆性减低： 海洋性贫血、缺铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸等。
溶血性贫血的实验室检查课件
溶血性贫血的实验室检查
反映红细胞寿命缩短、易于破坏的 检查
红细胞畸形、破坏红细胞增多 单核-巨噬细胞吞噬红细胞现象 红细胞寿命缩短 红细胞脆性增加
溶血性贫血的实验室检查
有关红细胞代偿性增生的检查
网织红细胞增多 血中出现大量幼红细胞 血中大红细胞 骨髓中幼红细胞明显增生
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的常用实验室检查及意义
临床意义
自身免疫性溶血性贫血，冷凝集素综合征，新生 儿同种免疫性溶血，阵发性冷性血红蛋白尿，药 物性免疫性溶血等直接抗人球蛋白试验阳性。
溶血性贫血的实验室检查
（三）酸溶血（Hams）试验
实验原理 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞。
Hams试验即红细胞在酸性（PH6.4-6.5）的 正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细 胞破坏而产生溶血，而正常人RBC不被溶 解，无溶血现象。
溶血性贫血的实验室检查
临床意义
脆性增加 主要见于遗传性球形红细胞增多症，椭
圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血 性贫血。 脆性降低
主要见于珠蛋白生成障碍性贫血，血红 蛋白C、D、E病，低色素性贫血，肝疾病 等。
溶血性贫血的实验室检查
（二）抗人球蛋白试验
（Coombs试验）
实验原理
抗人球蛋白试验（Coombs试验）
溶血性贫血的实验室检查
操作程序
将一份枸橼酸钠全血加入9份新鲜配制 的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸馏水+0.5ml 抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血）， 混合后，置37℃温箱中孵育30分钟，离心 沉淀。
结果分析
如有溶血蔗糖液为红色，即为阳性。
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的临床特点
反映红细胞寿命缩短、易于破坏的 检查
红细胞畸形、破坏红细胞增多 单核-巨噬细胞吞噬红细胞现象 红细胞寿命缩短 红细胞脆性增加
溶血性贫血的实验室检查
有关红细胞代偿性增生的检查
网织红细胞增多 血中出现大量幼红细胞 血中大红细胞 骨髓中幼红细胞明显增生
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的常用实验室检查及意义
临床意义
自身免疫性溶血性贫血，冷凝集素综合征，新生 儿同种免疫性溶血，阵发性冷性血红蛋白尿，药 物性免疫性溶血等直接抗人球蛋白试验阳性。
溶血性贫血的实验室检查
（三）酸溶血（Hams）试验
实验原理 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞。
Hams试验即红细胞在酸性（PH6.4-6.5）的 正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细 胞破坏而产生溶血，而正常人RBC不被溶 解，无溶血现象。
溶血性贫血的实验室检查
临床意义
脆性增加 主要见于遗传性球形红细胞增多症，椭
圆形红细胞增多症和部分自身免疫性溶血 性贫血。 脆性降低
主要见于珠蛋白生成障碍性贫血，血红 蛋白C、D、E病，低色素性贫血，肝疾病 等。
溶血性贫血的实验室检查
（二）抗人球蛋白试验
（Coombs试验）
实验原理
抗人球蛋白试验（Coombs试验）
溶血性贫血的实验室检查
操作程序
将一份枸橼酸钠全血加入9份新鲜配制 的糖水中（即0.5g蔗糖+4.5ml蒸馏水+0.5ml 抗凝血，或10%蔗糖水5ml+0.5ml抗凝血）， 混合后，置37℃温箱中孵育30分钟，离心 沉淀。
结果分析
如有溶血蔗糖液为红色，即为阳性。
溶血性贫血的实验室检查
溶血性贫血的临床特点
实验诊断学概论及质控课件：04_溶血的实验室检查
PNH（阵发性睡眠性Hb尿症） 13
③ 红细胞丢失过量
➢ 急性失血：消化道大出血、大量咯血、创伤、手术、 内脏破裂、宫外孕；
➢ 慢性失血：月经过多、痔疮、慢性创伤出血、疟疾。
15
三、贫血的诊断概述
➢ 贫血的诊断：临床诊断（病史、症状、体征）、 病理学诊断、影像学诊断、实验诊断
➢ 目标：寻找病因，作出贫血病因诊断
巨幼细胞性贫血、脾亢、DIC的鉴别诊断
19
白细胞参数
红细胞参数 血小板参数
② 血细胞涂片检查
➢ 显微镜观察RBC、WBC、PLT的数量、大小、形态； ➢ RBC数量有助于贫血诊断，RBC大小区分大小细胞
性贫血，形态异常有助于膜缺陷型与Hb异常病诊 断。
21
③ 网织红细胞（reticulocyte, Ret）
正细胞性贫血 大细胞性贫血
正常 正常 ﹥100 ﹥32
正常 正常
再障性贫血、溶血性贫血、血 液丢失过多性贫血
巨幼细胞性贫血
小细胞性贫血
小细胞低色素性 贫血
﹤80 ﹤80
﹤26 ﹤23
正常 慢性病引发的贫血 ﹤300 缺血性贫血、血红蛋白病
MCV：平均红细胞容积，MCH：平均红细胞血红蛋
白量MCHC：平均红细胞血红蛋白浓度
《实验诊断学》
溶血性贫血的实验诊断 （第一、十、二十一章 ）
OUTLINE
➢ 贫血的实验诊断概述
诊断标准、分类、实验诊断路径
➢ 常见贫血的实验诊断
缺铁贫、巨幼贫、再障贫 溶血性贫血：先天性（膜缺陷、酶缺陷、
地贫、PNH） 获得性（免疫性溶贫）
2
第一部分 贫血的实验诊断概述
➢ 红细胞（Red blood cells, RBC）功能： 运输O2，排出CO2。
③ 红细胞丢失过量
➢ 急性失血：消化道大出血、大量咯血、创伤、手术、 内脏破裂、宫外孕；
➢ 慢性失血：月经过多、痔疮、慢性创伤出血、疟疾。
15
三、贫血的诊断概述
➢ 贫血的诊断：临床诊断（病史、症状、体征）、 病理学诊断、影像学诊断、实验诊断
➢ 目标：寻找病因，作出贫血病因诊断
巨幼细胞性贫血、脾亢、DIC的鉴别诊断
19
白细胞参数
红细胞参数 血小板参数
② 血细胞涂片检查
➢ 显微镜观察RBC、WBC、PLT的数量、大小、形态； ➢ RBC数量有助于贫血诊断，RBC大小区分大小细胞
性贫血，形态异常有助于膜缺陷型与Hb异常病诊 断。
21
③ 网织红细胞（reticulocyte, Ret）
正细胞性贫血 大细胞性贫血
正常 正常 ﹥100 ﹥32
正常 正常
再障性贫血、溶血性贫血、血 液丢失过多性贫血
巨幼细胞性贫血
小细胞性贫血
小细胞低色素性 贫血
﹤80 ﹤80
﹤26 ﹤23
正常 慢性病引发的贫血 ﹤300 缺血性贫血、血红蛋白病
MCV：平均红细胞容积，MCH：平均红细胞血红蛋
白量MCHC：平均红细胞血红蛋白浓度
《实验诊断学》
溶血性贫血的实验诊断 （第一、十、二十一章 ）
OUTLINE
➢ 贫血的实验诊断概述
诊断标准、分类、实验诊断路径
➢ 常见贫血的实验诊断
缺铁贫、巨幼贫、再障贫 溶血性贫血：先天性（膜缺陷、酶缺陷、
地贫、PNH） 获得性（免疫性溶贫）
2
第一部分 贫血的实验诊断概述
➢ 红细胞（Red blood cells, RBC）功能： 运输O2，排出CO2。
溶血性贫血实验室检测ppt - 安徽省立医院.
• 简单复习一下红细胞的 结构：
• 1.成熟红细胞为双凹圆 盘状、无核细胞
• 2.主要成分：血红蛋白 =血红素+珠蛋白；血红 蛋白成分：HbA（α 2β 2 ）97%，其他为HbA2（ α 2δ 2）HbF（α 2γ 2）
• 3.红细胞内重要的酶： G-6-PD,PK
一、溶血性贫血的过筛实验 目的：证明有红细胞破坏现象 （一）血浆游离血红蛋白的检 测 （二）血清结合珠蛋白检测 （三）血浆高铁血红素清蛋白 检测 （四）尿含铁血黄素试验 （五）红细胞寿命测定
பைடு நூலகம்
• 4.红细胞膜蛋白的十二炕 基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS-PAGE)
• HbS 、HbE 病都有区带1 、2 的缺失或结构异常， HbS 常见4. I 蛋白有缺陷 。
（二） 红细胞酶缺陷的检测 红细胞酶缺陷所致溶血性贫血 又称红细胞酶病，指参与红细 胞代谢（主要是糖代谢）的酶 由于基因缺乏，导致活性改变 而发生溶血的一组疾病。
• 溶血性贫血的临床表现：贫血、黄 疸（主要以间胆高为主）、脾大、 血网织红细胞比例明显增高、血涂 片观察可见破碎、球形、椭圆形、 口形、靶形等异常形态红细胞，甚 至可见幼红细胞，血清结合珠蛋白 降低或消失，LDH(主要LDH2)增高 ，尿胆原增高，甚至可见血红蛋白 尿或含铁血黄素尿，红细胞寿命缩 短等
正常血红蛋 白电泳区带
2.胎儿血红蛋白酸洗脱试验 3.胎儿血红蛋白测定或HbF碱 变性试验
4.HbA2定量测定 5.不稳定血红蛋白测定：异丙 醇试验、热变性试验、血红 蛋白H 包涵体检查
6.红细胞镰变(HbS) 试验 7.HbS 溶解度试验 8.血红蛋白C 试验 9.限制性内切酶谱分析
二、后天获得的溶血性贫血的相 关实验 （一）自身免疫性溶血性贫血检 测
溶血性贫血的实验室检查PPT课件
• 血红蛋白电泳
• 碱变性试验
• HbF酸洗脱法检测
• 血红蛋白H包涵体生成试验
• RBC镰变试验
• 异丙醇沉淀试验
• 热变性试验
• 变性珠蛋白小体生成试验
12
免疫性溶血的检验
• Coombs试验 • 冷热溶血试验 • 冷凝集试验 • 血型检测
13
溶贫常用的实验室检查(1)
• RBC渗透脆性试验 • 温孵育后渗透脆性试验 • 自身溶血试验及纠正试验 • 酸溶血试验 • 蔗糖水溶血试验
• RBC寿命缩短、破坏增加 • 血浆游离Hb增高 • 胆红素代谢异常
4RBC寿ຫໍສະໝຸດ 缩短的检验• RBC寿命测定 • RBC形态改变 • 血浆LDH测定
5
血浆游离Hb增高的检验
• 血浆游离Hb检测 • 血清结合珠蛋白检测 • 血浆高铁血红素清蛋白检测 • 血红蛋白尿检测 • Rous试验
6
胆红素代谢异常
• 血清非结合胆红素增高 • 尿中尿胆原排泄量增高，
尿胆红素阴性
7
RBC代偿增生的依据
• 外周血Ret-RBC增多 • 血涂片中有RBC形态改变，
提示红系增生旺盛 • 骨髓象提示增生性贫血
8
溶血原因分析的有关检验
• 红细胞膜缺陷的检验 • 红细胞内酶缺陷的检验 • 珠蛋白合成异常的检验 • 免疫性溶血的检验
9
RBC膜缺陷的检验
• RBC渗透脆性试验
• 温孵育后渗透脆性试验
• 自身溶血及纠正试验
• 酸溶血试验
• 热溶血试验
• 蔗糖溶血试验
10
RBC内酶缺陷的检验
• 自身溶血及纠正试验 • 变性珠蛋白小体生成试验 • 高铁血红蛋白还原试验 • 氰化物-抗坏血酸盐试验 • 酶活性测定
溶血性贫血的实验室检查ppt课件
致溶ห้องสมุดไป่ตู้。
溶血性贫血——阵发性睡眠性血红蛋白尿症检测
血细胞膜CD55、CD59分析(流式细胞术） 参考范围：外周血CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞均<5% 临床意义：PNH患者外周血CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞均>10%
溶血性贫血——红细胞酶缺陷检测
溶血性贫血——筛查检测
肾脏
溶血性贫血——筛查检测
• • • • 血浆游离血红蛋白测定 血清结合珠蛋白测定 血浆高铁血红素白蛋白试验 含铁血黄素尿试验
• 红细胞寿命测定
溶血性贫血——筛查检测
• 血浆游离血红蛋白测定
参考值：<50mg/L 临床意义： 1.血管内溶血时明显增高。 2.血管外溶血时正常。 3.自身免疫性溶血、珠蛋白异常时轻度增高。
溶血性贫血——红细胞膜缺陷检测
红细胞渗透脆性 试验：测定红细胞 对不同浓度低渗氯 化钠溶液的抵抗力。 渗透脆性，它与红 细胞膜面积与细胞 容积的比值有关。 参考值：开始溶 血 0.42 ％ ～ 0.46 ％ (4.2 ～ 4.6g/L) NaCl 溶液， 完全溶血 0.28 ％ ～ 0.34 ％ (2.8 ～ 3.4g ／ L)NaCl 溶液。 临床意义 1． 脆性增高 开始溶血及完全溶血时氯化钠溶 液的浓度均较正常对照提前两管 (0.04％或 更高)，即开始溶血＞0.50％、完全溶血＞ 0.38％NaCl溶液时为脆性增高。主要见于遗 传性球形细胞增多症，温抗体型自身免疫性 溶血性贫血病人的红细胞有继发球形化，渗 透脆性也可增高。脆性增高也可见于遗传性 椭圆形细胞增多症。轻症病人或急性溶血才 发作后，外周血中球形细胞较少，检测结果 可能在正常范围，此时应考虑做温 孵育后渗 透脆性试验。 2． 脆性减低 常见于海洋性贫血。也可见于缺 铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸等。
溶血性贫血——阵发性睡眠性血红蛋白尿症检测
血细胞膜CD55、CD59分析(流式细胞术） 参考范围：外周血CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞均<5% 临床意义：PNH患者外周血CD55-、CD59-红细胞和中性粒细胞均>10%
溶血性贫血——红细胞酶缺陷检测
溶血性贫血——筛查检测
肾脏
溶血性贫血——筛查检测
• • • • 血浆游离血红蛋白测定 血清结合珠蛋白测定 血浆高铁血红素白蛋白试验 含铁血黄素尿试验
• 红细胞寿命测定
溶血性贫血——筛查检测
• 血浆游离血红蛋白测定
参考值：<50mg/L 临床意义： 1.血管内溶血时明显增高。 2.血管外溶血时正常。 3.自身免疫性溶血、珠蛋白异常时轻度增高。
溶血性贫血——红细胞膜缺陷检测
红细胞渗透脆性 试验：测定红细胞 对不同浓度低渗氯 化钠溶液的抵抗力。 渗透脆性，它与红 细胞膜面积与细胞 容积的比值有关。 参考值：开始溶 血 0.42 ％ ～ 0.46 ％ (4.2 ～ 4.6g/L) NaCl 溶液， 完全溶血 0.28 ％ ～ 0.34 ％ (2.8 ～ 3.4g ／ L)NaCl 溶液。 临床意义 1． 脆性增高 开始溶血及完全溶血时氯化钠溶 液的浓度均较正常对照提前两管 (0.04％或 更高)，即开始溶血＞0.50％、完全溶血＞ 0.38％NaCl溶液时为脆性增高。主要见于遗 传性球形细胞增多症，温抗体型自身免疫性 溶血性贫血病人的红细胞有继发球形化，渗 透脆性也可增高。脆性增高也可见于遗传性 椭圆形细胞增多症。轻症病人或急性溶血才 发作后，外周血中球形细胞较少，检测结果 可能在正常范围，此时应考虑做温 孵育后渗 透脆性试验。 2． 脆性减低 常见于海洋性贫血。也可见于缺 铁性贫血、某些肝硬化及阻塞性黄疸等。
[诊断学]溶血贫血
![[诊断学]溶血贫血](https://img.taocdn.com/s3/m/6d6876050912a21614792942.png)
参考值：高铁血红蛋白还原率>75% 高铁血红蛋白0.3-1.3g/L
G6PD缺陷—高铁血红蛋白还原率明显下降
（3）变性珠蛋白小体生成试验
37℃1~2h
受检RBC＋乙酰苯肼
作活体染色（甲基紫）
有变性珠蛋白小体，则膜上形成紫黑色颗粒
• 计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率 • 正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般小于
（1）血红蛋白电泳检测：
醋酸纤维膜电泳法，检查有无 异常血红蛋白区带 诊断海洋性贫血
地中海贫血
+
异常HB带
—
醋酸纤维蛋白膜电泳
临床意义：
①HbA2↑：β-地中海贫血。恶贫、巨贫轻 度↑。 ②HbA2↓：缺铁、铁粒幼红细胞贫血。 （2）胎儿HB酸洗脱试验 HbF抗酸能力较强，不易被酸洗脱。 血片置酸性缓冲液保湿一定时间。含HbF 的红细胞不被洗脱，再用伊红染色呈鲜红 色
globin ferriheme (Fe3+)
binds to hemopexin & albumin
血管外溶血：慢性溶血
•血红素
卟啉
铁
游离胆红素↑
尿胆原↑ 粪胆原↑
•红细胞 •破坏（脾脏） 珠蛋白
三 、实验室检查 (laboratory features)
（一）溶血性贫血的筛查检测
1. 有关红细胞破坏增加的检查 （1） 血浆游离Hb测定（敏感）
③新生儿同种免疫溶血病、SLE、RA、 HD、NHL 可阳性。
（2）冷凝集素试验 原理：冷凝集素是一种可逆性抗体 ， 在 低 温 时 可 与 自 身 RBC 、 “ O” 型 RBC或与患者同型RBC发生凝集，当 温度升高时，凝集块又复消失。
溶贫检验ppt课件
34
方法
➢ 30%红细胞悬液的配置（1）取患者的血液2ml, 枸橼酸钠抗凝， 混匀，2000转/分离心5分钟；（2）吸出血浆，沉淀的红细胞用8 倍体积的生理盐水洗涤三次，每次2000转/分离心5分钟；（3） 最后沉淀红细胞用生理盐水配成30%的红细胞悬液。
14
尿含铁血黄素试验（Rous试验）
➢ 原理：当血浆中血红蛋白超过肾阈值１.3g/L 时,则可通过肾小球滤过,经过肾小管时被肾小 管上皮细胞嗜取,分解为含铁血黄素沉积在上 皮细胞中,并随着上皮细胞脱落从尿中排出。 含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体,其中的 高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下产 生普鲁氏蓝色的亚铁氰化铁沉淀。尿沉渣肾小 管上皮细胞内外可见直径1~3um的兰色颗粒。
• 参考值：0.5~1.5 Hb/L
12
血清Hp检测的原理（火箭电泳法）
• 将稀释后的Hp抗血清与已融化的2%琼脂糖混匀， 制备凝胶板。在凝胶板上加入一定量的受检血 清（抗原），在电场作用下，定量的抗原在含 有定量抗体的琼脂凝胶中泳动，在一定的时间 内抗原抗体反应形成火箭样沉淀峰，此峰的高 度与抗原浓度成正比，测量峰的高度与标准样 品峰值通过直线回归方程式，计算出受检者血 清中Hp的含量。
9
注意事项
• 采血和分离血浆的过程中，应严格防止 发生体外溶血，以免造成假阳性。
• 一切器材，用前用盐酸浸泡24h，流水冲 洗后再用蒸馏水洗三次，以避免Hb污染 造成假阳性。
• 过氧化氢的浓度要准确，应新鲜配制。 • 当测定管的光密度超过0.6时，应将血浆
稀释后重新检测。
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血清结合珠蛋白测定(measurement of haptoglobin) • 常用的方法有：
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正常值和临床意义
方法
➢ 30%红细胞悬液的配置（1）取患者的血液2ml, 枸橼酸钠抗凝， 混匀，2000转/分离心5分钟；（2）吸出血浆，沉淀的红细胞用8 倍体积的生理盐水洗涤三次，每次2000转/分离心5分钟；（3） 最后沉淀红细胞用生理盐水配成30%的红细胞悬液。
14
尿含铁血黄素试验（Rous试验）
➢ 原理：当血浆中血红蛋白超过肾阈值１.3g/L 时,则可通过肾小球滤过,经过肾小管时被肾小 管上皮细胞嗜取,分解为含铁血黄素沉积在上 皮细胞中,并随着上皮细胞脱落从尿中排出。 含铁血黄素是不稳定的铁蛋白聚合体,其中的 高铁离子与亚铁氰化钾作用,在酸性环境下产 生普鲁氏蓝色的亚铁氰化铁沉淀。尿沉渣肾小 管上皮细胞内外可见直径1~3um的兰色颗粒。
• 参考值：0.5~1.5 Hb/L
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血清Hp检测的原理（火箭电泳法）
• 将稀释后的Hp抗血清与已融化的2%琼脂糖混匀， 制备凝胶板。在凝胶板上加入一定量的受检血 清（抗原），在电场作用下，定量的抗原在含 有定量抗体的琼脂凝胶中泳动，在一定的时间 内抗原抗体反应形成火箭样沉淀峰，此峰的高 度与抗原浓度成正比，测量峰的高度与标准样 品峰值通过直线回归方程式，计算出受检者血 清中Hp的含量。
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注意事项
• 采血和分离血浆的过程中，应严格防止 发生体外溶血，以免造成假阳性。
• 一切器材，用前用盐酸浸泡24h，流水冲 洗后再用蒸馏水洗三次，以避免Hb污染 造成假阳性。
• 过氧化氢的浓度要准确，应新鲜配制。 • 当测定管的光密度超过0.6时，应将血浆
稀释后重新检测。
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血清结合珠蛋白测定(measurement of haptoglobin) • 常用的方法有：
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正常值和临床意义
[诊断学]溶血贫血
![[诊断学]溶血贫血](https://img.taocdn.com/s3/m/e624980b48d7c1c708a145a8.png)
•遗传性球形红细胞增多症和先天性非球 形细胞性溶血性贫血的鉴别诊断。
临床意义：
1、遗传性球形红细胞增多症时，溶血明显增 加，加葡萄糖、ATP溶血明显纠正。
2、Ⅰ型先天性非球形细胞性HA G6PD缺陷 ： ＋ATP：可纠正 但不能纠至正常 ＋G： 同上
3、Ⅱ型先天性非球形细胞性HA PK缺陷 ： ＋ATP：可纠正 ＋G： 不纠正
30%
见图
• G6PD缺乏症常高于45%，故可作为G6PD 缺乏的筛检试验。
• 还原型谷胱甘肽缺乏症也增高。
• 不稳定血红蛋白病含小体的细胞百分率为 75%~84%。
• HbH病和化学物质中毒时也增高。 （ G6PD缺乏症，NADPH减少时，红细胞 内还原型谷胱甘肽减少，高铁血红蛋白增 高，形成变性珠蛋白小体）
• 遗传缺陷—遗传性球形、椭圆形、口形红 细胞增多症。细胞在脾脏清除，属于血管 外溶血。
• 后天获得性红细胞膜缺陷—阵发性睡眠性 血红蛋白尿, 膜上糖化肌醇磷脂（ GPI ）锚 连蛋白异常。为慢性血管内溶血。
Normal
细胞膜 细胞骨架
Hereditary spherocytosis
膜脂质丢失 = 变形能力下降 = 脾清除率增加
（四）珠蛋白合成异常的试验
• 血红蛋白由珠蛋白和血红素构成，珠蛋白 分子由两对肽链组成，一对是α链，另一对 是非α链（β、γ、δ），正常成人血红蛋白 有3种：HbA(α2β2)、HbA2(α2 δ2)、 HbF(α2 γ2)。
• 珠蛋白异常分为两大类，一类是某个肽链 合成量减少，即地中海贫血（ α β ），另 一类是多肽链的结构发生质的改变，即异 常血红蛋白病。
红细胞膜缺陷的检验
红细胞渗透脆性试验 RBC孵育渗透性试验 自身溶血试验及纠正试验
临床意义：
1、遗传性球形红细胞增多症时，溶血明显增 加，加葡萄糖、ATP溶血明显纠正。
2、Ⅰ型先天性非球形细胞性HA G6PD缺陷 ： ＋ATP：可纠正 但不能纠至正常 ＋G： 同上
3、Ⅱ型先天性非球形细胞性HA PK缺陷 ： ＋ATP：可纠正 ＋G： 不纠正
30%
见图
• G6PD缺乏症常高于45%，故可作为G6PD 缺乏的筛检试验。
• 还原型谷胱甘肽缺乏症也增高。
• 不稳定血红蛋白病含小体的细胞百分率为 75%~84%。
• HbH病和化学物质中毒时也增高。 （ G6PD缺乏症，NADPH减少时，红细胞 内还原型谷胱甘肽减少，高铁血红蛋白增 高，形成变性珠蛋白小体）
• 遗传缺陷—遗传性球形、椭圆形、口形红 细胞增多症。细胞在脾脏清除，属于血管 外溶血。
• 后天获得性红细胞膜缺陷—阵发性睡眠性 血红蛋白尿, 膜上糖化肌醇磷脂（ GPI ）锚 连蛋白异常。为慢性血管内溶血。
Normal
细胞膜 细胞骨架
Hereditary spherocytosis
膜脂质丢失 = 变形能力下降 = 脾清除率增加
（四）珠蛋白合成异常的试验
• 血红蛋白由珠蛋白和血红素构成，珠蛋白 分子由两对肽链组成，一对是α链，另一对 是非α链（β、γ、δ），正常成人血红蛋白 有3种：HbA(α2β2)、HbA2(α2 δ2)、 HbF(α2 γ2)。
• 珠蛋白异常分为两大类，一类是某个肽链 合成量减少，即地中海贫血（ α β ），另 一类是多肽链的结构发生质的改变，即异 常血红蛋白病。
红细胞膜缺陷的检验
红细胞渗透脆性试验 RBC孵育渗透性试验 自身溶血试验及纠正试验
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红细胞膜缺陷的检验
红细胞渗透脆性试验 红细胞孵育渗透脆性试验 自身溶血试验及纠正试验
（一）红细胞渗透脆性试验
检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力
主要取决于红细胞表面积与其体积之比。 表面积大而体积小对低渗盐水抵抗力较大（脆性较小）， 反之抵抗力较小（脆性增加）。
ห้องสมุดไป่ตู้
等体积的血液加入一系列的低 渗NaCl溶液中; 达到平衡; 高速离心并测定光密度. 大多数正常RBC在NaCl浓度 约 0.50%时开始结构破坏. 当盐浓度进一步降低 渗漏和
白蛋白
返回
free Hb (a2b2 tetramers)
Hb尿
Hb
Hp
dimers
肾脏
肝
含铁血黄素尿
高铁Hb
HpHb complex
globin ferriheme (Fe3+)
binds to hemopexin & albumin
血管外溶血：慢性溶血
•血红素
卟啉
铁
游离胆红素↑
尿胆原↑ 粪胆原↑
溶血增加.
正常渗透脆性
HS时低渗溶液中的 异常溶血
参考值 开始溶血：0.42%~0.46%（4.2~4.6g/L）NaCI
完全溶血：0.28%~0.34%（2.8~3.4g/L）NaCI
临床意义 开始溶血＞0.50％、完全溶血＞0.38％ 为脆性增高
（1）脆性增高 遗传性球形红细胞增多症 （2）脆性减低 小细胞低色素性贫血：海洋性贫
•红细胞 •破坏（脾脏） 珠蛋白
正常红细胞代谢
单核巨噬细胞系统
循环血液
血红蛋白
红细胞
非结合胆红素
与葡萄糖醛酸结合
结合胆红素
门静脉
尿胆原
尿胆原
尿胆素 粪胆原
溶血性黄疸发生机理示意图
单核巨噬细胞系统 血红蛋白
循环血液 红细胞
非结合胆红素
与葡萄糖醛酸结合
结合胆红素
门静脉 尿胆原
尿胆原
尿胆素 粪胆原
三 、实验室检查
• 遗传缺陷—遗传性球形、椭圆形、口形红细胞增多 症。细胞在脾脏清除，属于血管外溶血。
• 后天获得性红细胞膜缺陷—阵发性睡眠性血红蛋白 尿, 膜上糖化肌醇磷脂（ GPI ）锚连蛋白异常。为慢 性血管内溶血。
Normal
细胞膜 细胞骨架
Hereditary spherocytosis
膜脂质丢失 = 变形能力下降 = 脾清除率增加
一 溶血性贫血的筛查检测
（一） 血浆游离Hb测定（敏感）
• 正常值：<50mg/L
• 意义:血管内溶血时明显增加（60~650mg/L）
•
血管外溶血时正常
（二） 血清结合珠蛋白测定（Hp）
• 正常值：0.7~1.5g/L • 溶血存在时，Hp减少。以血管内溶血时减
低为显著。
（三）血浆高铁血红素清蛋白检测：
正常人： 阴性
阳性：严重血管内溶血。
生化法—高血红素清蛋白与硫化氨形成铵血色原，光 谱仪观测在558nm处有一吸收光带
电泳法—醋酸纤维膜电泳，出现一条高铁血红素清蛋 白带
（四）尿含铁血黄素试验（Rous test)
• 铁离子在酸化的低铁氰化钾溶液中生成蓝色的铁 氰化铁，即普鲁士蓝反应。
（五） RBC寿命测定
血、缺铁性贫血
（二）红细胞孵育渗透脆性试验
原理：37℃孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，
ATP减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀脆性增高 。
参考值 未孵育 50%溶血4~4.45g/L 孵育 50%溶血4.65~5.9g/L
正常红细胞在外力作用下具有变形的能力， 称为 可塑变形性。
变形能力的大小与红细胞的形态、膜特性及内容物 的性质和量有关。
例如：球形红细胞；膜弹性降低；Hb变性或浓度 过高，粘度增高都可使红细胞变形性下降。
渗透脆性(osmotic fragility)
概念：红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的特性 渗透脆性反映红细胞抵抗低渗溶液的能力。 脆性大=抗低渗液的能力小=容易破 脆性小=抗低渗液的能力大=不易破
分类
（一）按病因和发病机制分类
• 红细胞内在缺陷：多为遗传疾病 • 红细胞外在因素损伤：均为后天获得性疾病
分类
(二)按溶血发生部位分类（RBC破坏场所）
血管内溶血 血管外溶血
血管内溶血：急性溶血
红细胞 破坏（血循环中）
游 离 血 红 蛋 白↑ 结合珠蛋白↓ 血红蛋白尿 含铁血黄素尿 高铁血红蛋白
• 正常值：25~32天 • 51Cr同位素标记。 • 溶血性贫血时半衰期<15天，说明有溶血存在。
（六）Hb尿测定
红细胞代偿性增生的检查
网织红细胞计数 （无特异性）
• 血象 见图 • 骨髓象 见图
正常： 百分数0.5~1.5% 绝对值（24~84）×109/L
溶 贫 时 达 5~25% ， 甚 至 75% 以 上 。
临床：造血功能增强而供铁不足（婴幼儿、孕妇、乳母）， 铁吸收利用障碍（胃酸、VitC缺乏)或铁丢失过多（慢性失 血）→缺铁性贫血（小细胞低色素性贫血）。可口服硫酸 亚铁补充铁盐。
红细胞的破坏
平均寿命约为120天。90%的衰老红细胞在脾 和骨髓等处被巨噬细胞吞噬（血管外破坏） ， 吞噬后释放出的铁、氨基酸被重新利用，而脱 铁血红素转变为胆色素随粪或尿排出体外。此 外，10％的衰老红细胞在血管内破坏，游离血 红蛋白与结合珠蛋白结合被肝摄取。
临床意义:衰老的红细胞，遗传性球形红细胞增多症 其脆性特别大。
铁：Hb合成必需原料
体内过程：成人每天需20～30mg合成Hb，其中5%由食 物补充，95%来自体内铁（衰老红细胞被巨噬细胞吞噬破 坏，Hb分解释放的铁）的再利用。Fe3+需还原成Fe2+才能 被利用。
进入血液的铁与转铁蛋白结合被运送到幼红细胞，来合成 血红蛋白。
第二节 溶血性贫血的实验室检测
P260
溶血性贫血（hemolytic anemia）
一、定义
各种原因导致红细胞生存 时间缩短、破坏增多或加 速，而骨髓造血功能不能 相应代偿而发生的一类贫 血。
溶血性疾病 溶血性贫血 溶血性黄疸
正常骨髓有6-8倍的代偿能力
红细胞的可塑变形性
(plastic deformation）
Cabot’s ring
嗜多色性红细胞
Howell-Jolly body
嗜碱点彩红细胞
骨髓象
• 幼红细胞显著增生， 以中幼和晚幼红细胞 最多，核分裂象多见。
二 红细胞膜缺陷的检测
• 红细胞膜上的蛋白（膜蛋白带Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ1、 Ⅳ2、收缩蛋白、骨架蛋白、功能蛋白 ） 的数量或结构发生变化，出现形态和功能异常， 发生溶血性贫血。