探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA碎片指数的影响
男性不育实验诊断方法及临床应用
灰度CASA的特点
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
荧光CASA的特点
识别原理：
荧光色素与活精子（双链DNA）结合 后出现绿色荧光反应，而与死精子（单链 DNA）结合时则呈橙色荧光。除精子和极 少数非精子细胞外，精液中的其他细胞和 颗粒碎片均不发荧光。
临床意义:
精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是 络合钙离子，通过与钙离子结合，而调 节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液 液化过程的功能。
前列腺分泌功能指标:精浆酸性磷酸酶
临床意义：
前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低, 前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量 增高。
前列腺分泌功能指标:精浆锌
临床意义:
① 锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能 减退。 ② 锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可 促进睾酮转变为双氢睾酮。
精子形态学分类标准(Kruger & menkfeld)
精子形态学计算举例
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) =1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) =0.72
人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带 有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白 细胞产生的。 精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这 些物质可能不足。
在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使 精子更易受到氧化损害。
PDF-精子染色质扩散法检测精子DNA完整性方法探讨及临床意义
常规检查 #不以 $ 次检查结果为准 ) 精 液 样 本 准 备! 将精液标本用 " A& D!: , 8 实验 ! $ $& W E& =磷 酸盐缓冲 液 $ 充 分 洗 涤 后 离 心# 弃 上 清# 再用 + + 6 :& 6 :调至 & 制 片! 取 $ 管 $? 低 熔 点 琼 脂 糖 $ 于 $ (>$ (" I 7)$ % E (# 7& % 每管加入处 A '$@ ( b水浴箱融化并于* E b恒温放置*I 5 D
=( 但多在早期发生自 然 流 产 ' )精子 8 成胚胎 # S; 是 遗 传 信 息
但是精子生成 过 程 中 染 色 质 的 浓 缩 异 常 * 受损精原细 的载体 # 胞的凋亡异常 * 环境毒物以及不良的生活习惯都会造成精子 8 S; 损伤
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) 本研究对 % ( ( 例不育者进行精液常 规 检 查 后 用
b5ccdae0文献标识码文章编号ae0的夫妇患有不孕不育这与遗传生态环境内分泌等多种因素密切相关而由男性精子质量下降引起者约占不孕不育人群的一半常规的精液分析能够从精子密度精子活力和精子形态等方面反映精液质量但是其在精子功能的评价方面价值有限不能直接反映精子受精能力和对胚胎发育的影响近年来的研究表明精子8s
目的 ! 探讨精子染色质扩散法检测精子 8 S; 完 整 性 这 一 实 验 方 法 的 操 作 及 其 应 用 价 值 方 法 ! 对 % ( (例男性不 !! 摘 ! 要 育患者及 ' 用染色质 扩 散 法 进 行 8 观察实验条件的改变对检测结果的影 ( 例健康对照者进行精液常规检查后 S; 完 整 性 分 析 从而为这一实验方法的应用和改进提供参考价值 结果 !8 并且晕环 响 S; 完 整 性 正 常 的 精 子 染 色 质 扩 散 而 在 核 周 形 成 晕 环 的宽度不小于精子头部的半径 而受损伤产 生 8 碎 片 的 精 子 则 不 形 成 晕 环 或 晕 环 的 宽 度 小 于 精 子 头 部 的 半 径 实 验 中 试 S; 剂 实验条件及操作方法的改变均影响检测结果的判读 从而为临床诊断带来一定困难 结论 ! 精子染色质扩散法对男性不育 患 该实验过程中应掌握好实验条件及操作方法 者的病因诊断有较大临床意义 关键词 不育 男性 S; ! 精子染色质扩散 ! 精子 !8 ! " & 5 C C D & $ A E * 0 = $ * (& % ( $ %& $ =& ( % ) ! " # $ (& * @ A @ B 文献标识码 ; 文章编号 $ A E * 0 = $ * ( % ( $ % $ = 0 $ E % * 0 ( %
精子形态与核蛋白组型转换及DNA完整性的相关性_李俊
doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725．2015．07．033 基金项目： 河北省人口和计划生育委员会基金项目 （编号： 2013－A08 ） 作 者 单 位 ：050031 石 家 庄 市 ，河 北 医 科 大 学 第 一 医 院 生 殖 医 学科 通 信 作 者 ：刘 芳 E-mail：liufydyy＠163．com
（收 稿 ：2014－11－30 编 辑 ：吴 淑 金 ）
精子形态与核蛋白组型转换及 DNA 完整性的相关性
李俊 杨雪梅 赵婷婷 宋亚曼 刘芳
摘 要 目 的 ：探 讨 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 方 法 ：选 取 248 例 精 液 标 本 ，依 据 正 常 形 态 四 分 位 数 将 标 本 分 为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四 组 ，采 用 苯 胺 蓝 法 检 测 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 ，染 色 质 扩 散 法 检 测 精 子 DNA 完 整 性 ，分 析 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 的 相 关 性 。 结 果 ：检 测 标 本 中 精 子 形 态 异 常 发 生 率 为 27．82％，Ⅰ组 （正 常 形 态 ＜4％）精 子 总 数 、前 向 运 动 精 子 比 例 、核 蛋 白 组 型 转 换 比 例 均 显 著 低 于 其 他 组 （P ＜ 0．05），且 其 DNA 完 整 性 比 例 显 著 低 于Ⅲ组 （正 常 精 子 形 态 6％ ～ 8％）、Ⅳ 组 （正 常 精 子 形 态 ＞ 8％）。 正 常 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 （r ＝ 0．235， P ＝ 0．000）、精 子 DNA 完 整 性 （r ＝ 0．189，P ＝ 0．003）之 间 均 存 在 显 著 正 相 关 ，精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 间 存 在 显 著 正 相 关 （r ＝ 0．219，P ＝ 0．001）。 结 论 ：精 子 形 态 异 常 可 降 低 精 子 总 数 、前 向 运 动 能 力 、精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 比 例 ， 精 子 形 态 与 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 及 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 ， 且 精 子 核 蛋 白 组 型 转 换 与 DNA 完 整 性 之 间 存 在 显 著 正 相 关 。
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
精子染色质扩散法检测精子DNA完整性方法探讨及临床意义
研 究 表 明 阳性 率 小 于 １ 组 的正 常 受 精 率 显 著 高 于大 于 １ ｏ Ｏ
对 照 。年 龄 ２ ～４ ５ Ｏ岁 ， 均 （ １ ２ 岁 。 平 ３± ）
２ １ 不 同 年 龄 段精 子 Ｄ ． ＮＡ 碎 片 完 整 性 检 测 结 果 ， 表 １ 见 。从
表 １ 以看 出 ， 着 年 龄 的 增 长 ， ＮＡ 碎 片 阳性 率 大 于 １ 可 随 Ｄ Ｏ 者 所 占 比 例 越 来 越 高 ， 次 为 ２． 、２ 、 ８ ２ 、 依 ３ １ ３ ．３ ３． ４ ． 、５ ０ 、 ６ ７ ， 后 两 组 因 统 计 量 太 小 予 以 剔 除 ， ２ ９ ２ ． ６ ． 最 有
（ ）： ３ － ３ ． ４ ８ ０ ８ ９
核 蛋 白组 型 转 换 、 二硫 键 交 联 等 一 系 列 过 程 ， 易 受 到 环 境 因 容 素 、 物 因 素 、 物 接 触 、 染 、 烟 等 作 用 会 导 致 染 色 质 结 构 生 药 感 吸 异 常 ］同 时 ， ， 高度 浓 缩 的 结 构 造 成 精 子 缺 乏 修 复 Ｄ ＮＡ 缺 陷 的 能 力 ， 构 损 伤 比较 稳 定 ， 一 直 存 在 。染 色 质 结 构 异 常 的 结 可 发 生 机 制 假 说 包 括 染 色 质 包 装 缺 陷 、 亡 异 常 及 氧 化 应 激 凋 等 ［ ， 现 为核 蛋 白组 型 异 常 和 Ｄ ８表 ］ ＮＡ 链 碎 片 化 。核 蛋 白 核 型
目前 ， 约 １ 的 夫 妇 患 有 不 孕 不 育 ， 与 遗 传 、 态 环 有 ５ 这 生
精子DNA碎片化在男性不育中的研究进展
目前 对 精 子 ＤＮＡ碎 片 的研 究 正 处 于初 步 探 索 的 阶 段 ， 且 其 具 体 发 生机 制 尚未 完 全 弄 清 。但 现 有 的 一 系 列 研 究 结 果 显示 ， 在 辅 助 生 殖 技 术 领 域 中 仍 显 示 出 了 巨 大 的 预 测 其 价值 。 本文 分 析 了精 子 ＤＮＡ碎 片发 生 机 制 、 测 技 术 有 关 检 问题的研究现状 ， 以及 精 子 ＤＮ 碎 片 率 增 加 对 辅 助 生 殖 结 Ａ
山西医药杂志 ２１ 年 １ ０２ ０月第 ４ 卷第 １ 期上半月 １ ０
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精子 Ｄ ＮＡ 碎 片化 在 男性 不 育 中的研 究进 展
天 津 市 中心 妇 产 科 医 院生 殖 医 学 中心 （ ０ １ ０ 张 帅 张 云 山 ３００）
中 白 细胞 产生 Ｒ Ｓ ， 时 就 会 导 致 精 子 Ｄ ０ ）这 ＮＡ遭 受 Ｒ ＯＳ的
透 卵 细 胞 的能 力 。然 而 ， 正 是 以上 因 素 ， 致 精 子 细 胞 核 也 导 Ｄ ＮＡ 自身 修 复 能 力 以 及 应 对 内外 界 环 境 有 害 刺 激 的 能 力 大 大 降 低 。另 一 方 面 ， 生 精 细 胞 分 化 、 生 出 功 能 正 常 的 从 产 精子是一个很漫长的过程 ， 受到 多种因素的协调 控制 ， 且 如
山西 医药 杂 志 ２ １ ０ ２年 １ ０月 第 ４ １卷 第 １ ｏ期 上 半 月 Ｓ ａ ｘ Ｍｅ ， ｔｂｒ２ １ ， １ １Ｎｏ １ ｈ ｉ ｔ ｈ ｎ ｉ ｄＪ Ｏｃｏ ｅ ０ ２ Ｖｏ．４ ， ． ０ｔｅＦｒ ｓ
ＤＮ 碎 片指 数 要 明显 高 于 前 者 ， 且 ＤＮ 碎 片 率 指 数 与 Ａ 而 Ａ 精 液 中 Ｒ ｓ水 平 呈 正 相 关 。并 且 ， 对 上 述 患 者 施 以精 索 ０ 在 静 脉 曲 张结 扎 术 后 ， 子 Ｄ 精 ＮＡ碎 片率 指数 显 著 下 降 。 由 此
精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析
精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析作者：董树林曲文玉王立名王蔓来源：《中国实用医药》2011年第32期【摘要】目的探讨孕早期自发流产或胚胎停育的精液实验指标。
方法 38例精子核蛋白组型严重异常的实验与治疗统计。
结果 38例精子核蛋白组型严重患有经过治疗后，连续监测病例发现核蛋白恢复正常后，其配偶自发性流产或胚胎停育发生机率明显下降，正常分娩率显著提高。
结论精子核蛋白组型异常是导致自发性流产和胚胎停止发育的非遗传危险因素，但通过药物等治疗途径可以得到改善。
【关键词】自发性流产；胚胎停育；精子核蛋白组型临床自发性流产或胚胎停止发育发病率约占妊娠率的3.6%~5.5%，因其发病机制尚未完全阐明，有学者认为可能与解剖异常、免疫失调、内分泌紊乱、感染、染色体异常及基因多态性有关，临床对此病的总体疗效不太理想。
近些年通过对自发性流产或胚胎停止发育病例分析发现男性因素逐渐增多，特别是对男性精子的研究逐渐成为热点。
本文通过精子核蛋白组型严重异常病例及治疗，总结对自发性流产及妊娠结局的研究对照仅供同行参考。
1 资料与方法1.1 一般资料统计2006~2009年我院男科门诊就诊38例精子核蛋白组型严重异常(组型转换超过50%)。
临床上其配偶有2次以上孕早期自发性流产或胚胎停止发育。
双方检查未发现其他异常阳性体征，包括双方染色体检查、免疫及感染项目检查，男女生殖内分泌检查、血糖、甲功及妇科检查。
但这38例患者精液检查发现精子核蛋白组型存在严重异常。
其中9例精子核蛋白组型超过60%，29例介于50%~60%之间。
1.2 研究指标按照WHO技术规范采集和处理检测精液标本，检测精子核蛋白成熟度。
1.3 检测方法将洗涤后精子固定于载玻片，以0.5 g/L苯胺蓝,4%醋酸溶液染色5 min后洗涤、脱色、干燥后显微镜下至少观察400个精子，计算头部染成蓝色精子数量，染成蓝色精子为不成熟精子，计算不成熟精子的百分比(%)。
1.4 检测原理精子成熟过程中，与精子核DNA结合的碱性蛋白发生组型转换，富含赖氨酸残基的组蛋白逐渐被富含赖氨酸和胱氨酸的鱼精蛋白所取代，酸性条件下苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成蓝色化合物。
精子核蛋白染色液(苯胺蓝染色法)
精子核蛋白染色液(苯胺蓝法)产品简介：正常情况下，与精核DNA 结合的碱性蛋白（核蛋白）将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程，这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因（DNA ）具有特殊保护作用。
组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程，称之为精子核蛋白组型转换，这种组型转换具有重要的生理意义。
精子核携带着全部来自父方的遗传信息，这些基因必须在受精后才能开始表达。
受精前精子基因在鱼精蛋白的特殊保护下，紧密浓集，无任何DNA 转录作用。
但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产，其机理为：①精子DNA 不稳定且易受损伤而难以受孕；②一旦受精，由于核蛋白组型异常，精子核不能正常解聚，从而影响了雌雄原核的融合；③胚胎不能正常发育，造成胚胎夭折而流产。
因此，组蛋白的多少是精子成熟度的一个重要指标，酸性条件下苯胺蓝能特异地与精子核组蛋白富含的赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，根据着色的深浅来判断精子的成熟程度。
产品组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 新鲜精液样本3、 恒温箱4、 防脱载玻片操作步骤(仅供参考)：1、配制洗涤工作液: 取适量的10×浓缩洗涤液，以蒸馏水10稀释后即为洗涤工作液。
2、取新鲜精液标本置于恒温箱37℃或常温放置，至完全液化。
3、取上述液化精液0.2~0.5ml 置于EP 管，再加入1-1.5ml 洗涤工作液，用吸管或移液器反复吹打数次，室温2000rpm 离心5min ，弃去上清液，保留管底精子沉淀团；重复操作编号 名称DA1201 20T DA1201 40T Storage 试剂(A): 10×浓缩洗涤液 10ml 20ml RT 试剂(B): 固定液 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(C): 苯胺蓝染色液 5ml10ml RT 避光使用说明书1份3次。
4、向第3步的EP管中加入洗涤工作液约0.1-0.2ml，制成混合精子悬液。
5、取上述已制备好的精子悬液15μl，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。
2022年9月17日全国事业单位联考《综合应用能力》C类
2022年9月17日全国事业单位联考《综合应用能力》C类一、给定材料材料1(330310)男性与女性在某些疾病的患病率和对某些药物的反应上都存在差异，那么这些差异是如何与性别联系起来的呢？以色列魏茨曼科学研究所的一项研究发现，数千个能够编码蛋白质的基因的表达情况存在两性差异。
这些基因中的有害突变倾向于在人群中积累，而且具有较高的基因频率。
这些基因的基因图谱已经发表在BMC Biology上，进一步说明了男性和女性经历了不同而又互相联系的演化历程。
几年前，魏茨曼科学研究所分子遗传所的Shmuel Pietrokovski教授和Moran Gershoni博士意识到，人类某些特定疾病的发病率普遍较高。
他们关注的一个典型案例是，希望生育的夫妇中约15%被诊断为不孕不育，这一数据说明导致生育能力降低的突变较为普遍。
但这种现象与常识相违背——减少后代数量进而影响存活个体数的突变，应该在自然选择过程中很快被淘汰掉，但为什么这种疾病的患病率然如此之高呢？Pietrokovski和Gershoni发现，影响精子形成的特定基因突变能够保留下来的原因是：这些基因仅仅在男性中表达。
当一个突变只能影响种群中的一半个体，那么无论危害大小，它都能够通过另一半个体畅通无阻传递给下一代。
在进一步研究中，研究人员的分析范围由生殖必需的基因扩大到两性间表达不相同的基因。
为了确定这些基因，研究人员开展了GTEx（Genotype-Tissue Expression，基因型-组织表达）项目的研究。
该项目拥有一座人类基因表达的数据库，这些基因表达数据来自近550名成年捐赠者提供的器官和组织样本，使得研究人员第一次能够绘制两性之间具有差异表达的基因的基因图谱。
Pietrokovski和Gershoni分析了大约两万个编码蛋白的基因，按照性别将它们分类，以找出那些存在差异表达的基因。
最终发现，大约6500个基因的表达活性与性别有关，且至少在人体某一个组织中存在差异。
精子染色质扩散实验检测精子DNA 碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系
精子染色质扩散实验检测精子DNA碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系作者：曹晓敏苏园园何茜冬郑轶群林仲秋【摘要】目的：探讨精液DNA碎片与宫腔内人工授精妊娠率的关系。
方法：收集分析70例不育不孕患者共88个IUI治疗周期，精子染色质扩散(SCD) 实验分析精子DNA碎片，苯胺蓝染色法评价精子核成熟度，并按妊娠结局分成妊娠组与非妊娠组，比较各组间精子DNA 碎片比值、精子核成熟度和IUI妊娠率的关系。
结果：非妊娠组SCD小光晕和无光晕精子(精子DNA碎片) 比值平均为(28.3±10.6) % , 非妊娠组明显高于对照组(12. 0 ±5. 9)%( P<0. 05);而大光晕和中光晕精子比值非妊娠组明显低于对照组(P<0. 05) ; 非妊娠组组苯胺蓝染色阳性率明显高于对照组。
结论：非妊娠组患者核成熟度异常的精子、精子DNA碎片比例增高。
【关键词】复发性流产; 精子; DNA损伤宫腔内人工授精(intrauterine insemination, IUI)是将洗涤处理过的精子悬液通过导管直接注入子宫腔内，使精卵自然结合达到妊娠生育目的的一种辅助生育技术，其适用人群广泛。
影响IUI成功的因素诸多，目前尚无定论。
大部分研究主要集中在女方年龄、不孕的年限、授精时机及次数、用药方案、局部盆腔结构、子宫内膜厚度、输卵管壶腹部的直径、输卵管伞端距宫角的距离、精子质量与IUI妊娠率的关系[1～3]。
关于精子质量与IUI妊娠率的研究通常是在常规精液分析水平上进行。
其提供的信息不能很好评估精子的质量。
在预测妊娠结局方面的价值十分有限。
本课题拟通过对精子DNA完整性、精子核成熟度的检测来分析精子质量与IUI妊娠率的关系[4]，本研究对2008年8月～2009年12月来我院生殖中心行IUI治疗的70例男方精液进行分析，精子染色质扩散(SCD) 实验分析精子DNA碎片，苯胺蓝染色法评价精子核成熟度，探讨上述指标与IUI妊娠率的关系。
左卡尼汀联合他莫昔芬对精子DNA碎片率的影响研究
·外科研究·系统医学SYSTEMS MEDICINE 系统医学2019年2月第4卷第3期所谓男性不育症,通常为夫妻在未选用任何避孕策略的情况下,同居时间超过15个月,且因男性因素而引起的女性不孕现象[1]。
近些年以来,在判断生育能力以及评价精液质量上出现了2个更精准的指标:①精子核蛋白组型实际转换值;①精子DNA碎片率[2]。
现今,对DFI异常现象的男性不育者较少有给药救治方面的分析,选取2017年2月—2018年3月到该院治疗的228例有DFI异常的男性不育者,对该类患者选择左卡尼汀配合他莫昔芬来实施救治,取得了十分显著的疗效,现报道如下。
1资料与方法1.1一般资料将到该院治疗的DFI异常现象的男性不育者228例划定为分析目标,并分为对照组(114例)与和观察组(114例)。
该研究所选病例经过伦理委员会批DOI:10.19368/ki.2096-1782.2019.03.086左卡尼汀联合他莫昔芬对精子DNA碎片率的影响研究周成刚昆明医科大学第一附属医院泌尿外二科,云南昆明650032[摘要]目的研究左卡尼汀联合他莫昔芬治疗男性不育症状,对患者精子DNA碎片率的影响。
方法选取2017年2月—2018年3月到该院治疗的228例有DFI异常的男性不育者,随机分成两组,治疗组和对照组各114例。
对照组使用维生素E软胶囊治疗,治疗组采用左卡尼汀联合他莫昔芬进行治疗,疗程是3个月。
治疗后,使用计算机辅助精子分析(CASA)系统、精子染色质扩散法、苯胺蓝染色法分别检测精液参数、DFI和精子核蛋白组型转换(SNT)。
结果通过3个月的治疗,治疗组精子SC、PR、DFI、SNT参数分别(45.8±7.6)×106/mL、(36.5±6.3)、(22.5±8.7)和(12.5±4.8),明显优于对照组,两组的上述指标对比,差异有统计学意义(t=5.143,6.037,5.906,6.285,P<0.05);而治疗组的SM指标为(3.4±1.1)%,和对照组对比,差异无统计学意义(t=0.341,P>0.05)。
男性不育症精子DNA损伤研究进展
道感染 、 睾丸温度 升高 、 精索静脉曲张、 激素 、 环境污 染等 因素有关。Ｔｒ 等 研究表 明， ｏ ｏ 辅助生殖技术 （Ｒ ） Ａ Ｔ 对精液进行体外处理 ， 室温培养和深低温保藏 操作均会加重精子 Ｄ Ａ损伤 。患 Ｂ地 中海贫 血的 Ｎ － 男性其精子 Ｄ Ａ损伤程度会增加 。某些药物 ， Ｎ Ｊ 如 合成除虫菊 酯杀虫剂 与治 疗抑 郁症 的药物 选择 性 ５羟色胺重摄取抑制剂也会造成精子 Ｄ Ａ损伤 。 一 Ｎ １２ 损伤机制 精子 Ｄ Ａ碎片化的发生机制 尚不 ． Ｎ 完全清楚 ， 一般认为与精子发生过程中的异常染色质 包装 、 氧化应激或凋亡异常有关 ， 也可能是几种机制
Ｄ Ａ断裂指数 （ Ｎ ａｔ ｅ ｎ ｅ， Ｆ ） Ｎ Ｄ Ａｆ ｃ ｒ ｉ ｘ Ｄ Ｉ呈显著正相 ｒ ｕ ｄ
彗星细胞 总长、 尾长与 头部 直径 比值等 ， 以评 估 用
Ｄ Ａ损伤程 度 。 Ｎ
２ ３ 脱氧核 糖核 苷 酸末端 转移酶 介 导的缺 口末端标 ．
关 。Ｅｅｐｅ ｓ ｒ ｒｓ 等 根据精液参数正常 与异 常将不 ｎ ｉ
症病 人 中发现 Ｄ Ａ损 伤 加 重 和 氧化 应 激 增 强 ， 虑 Ｎ 考
１ 精子 Ｄ Ａ损伤病 因及 发病机制 Ｎ
１１ 病 因 与男性不育本身一样 ， ． 精子 Ｄ Ａ损伤也 Ｎ
是多 因 素共 同作 用 的结 果 ， 与化 疗 、 疗 、 放 吸烟 、 殖 生
氧化应激与 Ｄ Ａ损伤有关 。精 子的 Ｄ Ａ损伤阻 Ｎ ｊ Ｎ 碍氧化应激有关的甲基化过程 ， 而抗氧化剂如维生素 ｃ等药物的补充似乎可以减少 Ｄ Ａ损伤精子的 Ｄ Ａ Ｎ Ｎ 甲基化和正常化 ＿ 。这些研究也为临床提高了新思 ９ Ｊ 路， 对于精子 Ｄ Ａ损伤严重的病人有可能通过药物 Ｎ 治疗提高精液质量 。
精子dna碎片报告单
精子dna碎片报告单
报告单编号： SP-2022-001
受检者信息：
姓名：XXX 性别：男
年龄：35岁婚姻状况：已婚
检测项目：精子DNA碎片检测
样本：精液标本
检测结果：
本次检测结果显示，受检者精子DNA碎片率为25.6%。
正常参考范围为15%-25%，此次检测结果高于正常参考范围。
解释：
精子DNA碎片率是指精液中的DNA断裂的比例。
较高的精子DNA碎片率可能导致不孕症、习惯性流产等问题，对夫妻生育有
一定影响。
尽管本次检测结果高于正常参考范围，不必过于担心，因为精子DNA碎片率受多种因素影响，如环境、生活习惯、饮食等。
受检者可以采取一些措施，如适当的饮食调理、戒烟限酒、
避免接触放射线等，提高身体的免疫力，从而减少精子DNA碎片率。
如果夫妻在1年内未能自然怀孕，建议到专业的生殖医学中
心进行进一步检查和治疗。
备注：本报告单仅供参考，请咨询专业医生进行评估和治疗。
精子DNA碎片检测
（2） DNA碎片程度反应精子遗传物 质旳完整性，精子DNA发生碎片化对 生育将会产生负面影响，造成不育和 反复流产.
精子DNA碎片化程度被以为是一种新 旳，评价精液质量和预测生育能力旳 指标
（3）男性不育检测旳现状，精子
数量，密度活率和抗精子抗体，这 些检验项目旳成果判断和分析主观 性较强。经国内外教授研究发觉， 男性不育患者旳DNA碎片会明显 增多，精子DNA旳完整性是判断 精子质量旳有效根据。所以检测精 子DAN旳完整性对不育患者精子 质量旳评估具有极大旳价值.
5.参照值
精子DNA碎片率正常<10%
临界值10%-15%表达男性生育力有降低 旳趋势不论是自然妊娠还是人工助孕 成功率还有降低旳可能
碎片异常>15碎片率异常不小于15%表 达男性生育力有降低旳趋势不论是自 然妊娠还是人工助孕成功率还有降低 旳可能，且IVF/ICS助孕有流产风险增 长旳可能
6.精子DNA碎片化临床指导目旳
(2) 低氧和氧自由基旳形成
氧自由基（ROS）过多和抗氧化酶 旳平衡失调造成旳ROS过多，会造成 精子DNA单链和双链旳断裂主要原 因是睾丸局部温度增高（精索静脉曲 张）
(3) 凋亡异常
细胞死亡旳方式有三种凋亡是其中 旳一种它是指细胞旳程序化死亡在 一定旳生理和病理条件下，遵照本 身旳程序，自动结束其生命旳过程 最终细胞脱落立体或分解被其他细 胞吞噬一般是一种生理细胞肿胀死亡，胀亡坏 死多是指炎性旳病理性变化引起
核小体关键而连成一条串珠样旳长链 形成旳核蛋白纤维，染色体是指细胞 分裂时由DNA蛋白质纤维螺旋化后形 成旳棒状小体染色体是基因旳载体， 染色体在分裂旳过程中由间期细胞进 入分裂期时染色质纤维经过四级折叠， 长度压缩8400倍形成光学显微
精子染色质结构分析
精子染色质结构分析董语可153******** 1980年，精子染色质结构分析(Sperm Chromatin Structure Assay,SCSA)首次在Science(240:1131)上提出，精子染色后呈现红色或绿色荧光的显微照片被用作这一期杂志封面。
这一项生物技术发展至今，已被广泛应用于检测精子亚临床损伤、评估男性生育力和预测体外受精胚胎移植的成功率。
一、技术原理精子染色质分析利用吖啶橙的异染性与专用软件计算机界面的流式细胞仪相结合，快速识别带有不正常染色质结构的精子。
[6]哺乳动物精子DNA是遗传信息的载体，对繁衍后代具有重要意义。
这一特殊使命要求精子的染色质具有特殊结构。
与其他细胞不同，精子的染色质形成经过了加倍浓缩与组装。
在精子发生过程中，与DNA结合的核蛋白发生了从组蛋白→过渡蛋白→精核蛋白的组型转换。
早期精子形成阶段，圆形精子细胞伸长，合成的过渡蛋白取代了染色质内的组蛋白；晚期精子形成阶段，过渡蛋白又被精核蛋白取代，精子头部凝缩，精子核外形形成。
精核蛋白的体积仅有组蛋白的一半。
精子双链DNA围绕这些体积较小的精核蛋白形成染色质基本结构，而后通过精核蛋白分子内外的二硫键交联进一步浓缩，从而使染色体更为稳定。
在前列腺液Zn+作用下，余下的精子染色体形成过程（图片来源：/virtue/woocommerce/mammalian-protamines/）Science封面：精子染色后的荧光显微照片(v.240,p.1131,1980)游离巯基间形成共价键，精子核成熟。
这样的成熟精子遇酸能维持双链结构的稳定。
而对于受到损伤的不成熟精子，其精核蛋白中不具备二硫键，形成松散结构的染色质，DNA 在酸的作用下则会变性成单链。
吖啶橙(Scridine Orange,AO)可与双链DN A 结合呈单体形式发出绿色荧光,与单链DNA 结合呈聚合物形式发出红色荧光。
红荧光在总荧光中所占的比例反映了精子染色质结构的缩合水平,可通过各计算机界面流式细胞仪来评价。
精子DFI、HDS与精子形态和患者年龄的相关性分析
㊃短篇论著㊃精子D F I㊁H D S与精子形态和患者年龄的相关性分析*王甩艳1,张秀明1,林喜荣1,罗燕萍1,贺玉莹2,莫红梅1ә1.深圳市罗湖区人民医院医学检验科,广东深圳518001;2.深圳市罗湖医院集团医学检验中心,广东深圳518001摘要:目的对男性不育患者进行精子D N A检测,探讨精子D N A碎片指数(D F I)㊁精子高D N A着色性(H D S)与受检者的精子形态及年龄的关系㊂方法选取深圳市罗湖区人民医院生殖中心601例精液样本,显微镜法计算正常形态精子百分比,流式细胞仪检测精子D F I和H D S,并分析其与受检者的正常形态精子及年龄之间的关系㊂结果正常形态精子百分比<4.00%组与ȡ4.00%组之间的D F I和H D S比较,差异有统计学意义(P<0.05)㊂各年龄组间D F I比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而各年龄组间H D S比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂正常形态精子百分比与精子D F I㊁H D S呈负相关(r=-0.162,P<0.05;r=-0.281,P<0.05),年龄与精子D F I呈正相关(r=0.132,P<0.05),而年龄与精子H D S无相关性㊂结论精子D F I和H D S可作为反映男性生育能力的指标㊂关键词:精子D N A碎片指数;精子高D N A着色性;不育D O I:10.3969/j.i s s n.1673-4130.2021.05.024中图法分类号:R698.2文章编号:1673-4130(2021)05-0621-03文献标志码:A精液常规检测是对男性生育能力进行评估的基础检查项目,但对精子功能的亚细胞结构不能做出评估[1-2]㊂精子D N A检测包括精子D N A碎片指数(D F I)和精子高D N A着色性(H D S)㊂精子D F I是一个被认为较各种常规精液参数更为有效的男性不育指标,可以预测自然受孕和体外受精的结果[3-5]㊂精子H D S指高可染性的精子即核未完全缩合的不成熟精子占总精子的百分数,反映的是精子的成熟度[6]㊂精子D N A损伤有关的因素包括年龄㊁环境污染物等[7]㊂本文对男性不育患者的精子D F I㊁H D S与其形态和患者年龄进行相关性分析,旨在探讨其在男性生殖能力评估上的应用价值㊂1资料与方法1.1一般资料选取2018年5月至2020年1月深圳市罗湖区人民医院生殖中心的601例患者精液样本㊂601例患者婚后均正常性生活1年以上不育,无外伤及遗传性疾病家族史,体检未发现明显睾丸㊁附睾及输精管异常等,且基本排除女方不孕因素㊂正常形态精子百分比为0.00%~9.00%,平均(3.45ʃ1.91)%;年龄21~72岁,平均(35.76ʃ7.43)岁㊂1.2精子形态学分析采用改良巴氏染色,按照世界卫生组织(WHO)‘人类精液检查与处理实验室手册第5版“标准[8],进行精子形态评价,正常形态精子百分比参考范围ȡ4.00%㊂1.3精子D F I和H D S检测方法使用的仪器是流式细胞仪(m i n d r a y,B r i C y t e E6),采用F C S A S软件分析精子的D F I和H D S㊂检验原理是正常精子D N A 紧密结合而具有抗酸性,维持双链的稳定性,而受损的或不成熟的精子形成松散的染色质结构,其D N A 在酸作用下变成单链,吖啶橙(A O)与双链D N A结合发出绿色荧光,与单链D N A结合发出红色荧光,然后通过配有专用软件的流式细胞仪得出相关参数㊂D F Iɤ15%:精子D N A完整性好;15%<D F I<30%:精子D N A完整性一般;D F Iȡ30%:精子D N A完整性差㊂H D Sɤ15%:精子成熟染色质含量正常;H D S>15%:精子成熟染色质含量异常㊂1.4统计学处理采用S P S S17.0统计软件进行数据分析,计数资料以[n(%)]表示,组间差异采用非参数检验分析,受检者的正常形态精子及患者年龄与精子D F I和H D S的相关性均采用P e a r s o n相关分析㊂2结果2.1精液样本检测结果受检的601例精液样本中,精子D N A完整性好的有243例(40.43%);精子D N A完整性一般的有241例(40.10%);精子D N A 完整性差的有117例(19.47%)㊂精子成熟染色质含量正常的有494例(82.20%),精子成熟染色质含量异常有107例(17.80%)㊂2.2正常形态精子百分比与精子D F I和H D S的相关性依据正常形态精子百分比将患者分为< 4.00%组和ȡ4.00%组,分析两组精子不同程度㊃126㊃国际检验医学杂志2021年3月第42卷第5期I n t J L a b M e d,M a r c h2021,V o l.42,N o.5*基金项目:广东省深圳市医疗卫生三名工程项目(S Z S M201601062)㊂ә通信作者,E-m a i l:437897734@q q.c o m㊂本文引用格式:王甩艳,张秀明,林喜荣,等.精子D F I㊁H D S与精子形态和患者年龄的相关性分析[J].国际检验医学杂志,2021,42(5): 621-623.D N A完整性和成熟染色质含量的分布情况,见表1㊁2㊂随着正常形态精子百分比的增大,精子D F Iɤ15%的个体所占的比率逐渐上升,而精子D F Iȡ30%和15%<D F I<30%的个体所占的比率逐渐下降,且精子H D S的比率趋势与D F I一致㊂非参数检验显示正常形态精子百分比<4.00%组与ȡ4.00%组之间的D F I和H D S比较,差异有统计学意义(P<0.05)㊂P e a r s o n相关分析表明正常形态精子百分比与精子D F I呈负相关(r=-0.162,P<0.05),正常形态精子百分比与精子H D S呈负相关(r=-0.281,P< 0.05)㊂表1两组D F I比较组别n D F Iɤ15%15%<D F I<30%D F Iȡ30%P <4.00%组345114(33.04)145(42.03)86(24.93)<0.05ȡ4.00%组256129(50.39)96(37.50)31(12.11)表2两组H D S比较组别n H D Sɤ15%H D S>15%P<4.00%组345257(74.49)88(25.51)<0.05ȡ4.00%组256237(92.58)19(7.42)2.3年龄与精子D F I和H D S的相关性依据年龄将患者分为<35岁㊁35~<40岁和ȡ40岁3组,分析3组之间的精子不同程度D N A完整性和成熟染色质含量的分布情况,见表3㊁4㊂随着年龄的增大,精子D F Iɤ15%的个体所占的比率逐渐下降,而精子D F Iȡ30%和15%<D F I<30%的个体所占的比率不断上升㊂各年龄组间D F I比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而各年龄组间H D S比较差异无统计学意义(P>0.05)㊂P e a r s o n相关分析表明患者年龄与精子D F I呈正相关(r=0.132,P<0.05),患者年龄与精子H D S无相关(r=0.020,P>0.05)㊂表3各组D F I比较组别n D F Iɤ15%15%<D F I<30%D F Iȡ30% <35岁组305149(48.85)119(39.02)37(12.13) 35~<40岁组15964(40.25)63(39.62)32(20.13)ȡ40岁组13730(21.90)59(43.07)48(35.03)表4各组H D S比较组别n H D Sɤ15%H D S>15%<35岁组305249(81.64)56(18.36)35~<40岁组159128(80.50)31(19.50)ȡ40岁组137117(85.40)20(14.60)3讨论精子D N A损伤是男性不育的主要分子原因,这对生育有负面影响㊂依据WHO指南,精液分析检测常规参数是评估男性生育能力的主要方法㊂然而,常规的精液分析对男性生育能力的预测是很有限的,很多时候并不能够解释男性不育的原因㊂在全球范围内进行精子D N A片段分析,可作为男性不育症的预后和诊断及其管理的工具[9]㊂近年来的研究发现,精子在受孕和胚胎发育过程中也扮演了重要角色,包括遗传物质表达异常㊁表观遗传规律紊乱㊁D N A完整性降低等㊂因此在评估男性生育力时,精子D N A完整性受到越来越多的关注㊂精子D N A是父源遗传物质,其完整性对子代健康的重要性不言而喻㊂精子D N A损伤影响D N A碱基对的复制与转录,直接导致了遗传信息的缺失并影响生物转化功能,从而阻碍胚胎形成[10]㊂李清琴等[11]研究表明精子D F I与精子活力呈负相关,且升高水平与精子活力的下降程度有关,提示精子D N A 损伤可能存在与精子活力下降相同的影响机制㊂前者研究的是D F I与精液常规参数相关分析,而本文在其基础上,旨在研究的是D F I和H D S与受检者的正常形态精子百分比及年龄的关系,D F I反映的是精子D N A完整性好或差,是作为检测精子D N A损伤的一个重要指标,而H D S反映精子成熟染色质含量正常与否,是对精子D N A损伤的重要补充依据㊂本研究结果显示,正常形态精子百分比ȡ4.00%与<4.00%这两组间的D F I和H D S差异有统计学意义(P< 0.05)㊂精子D F I和H D S与正常形态精子百分比呈负相关,表明精子碎片率高且其成熟染色质含量异常可能会导致精子形态的异常,或者精子形态缺陷可伴有D N A碎片的增加和成熟染色质含量异常㊂而精子畸形会导致受精能力降低㊂本研究各年龄组之间的D F I比较,差异有统计学意义(P<0.05),并且年龄与精子D F I呈正相关,即年龄越大,D F I越高,精子D N A的完整性越差㊂但是患者年龄与精子H D S无相关,说明年龄可能对于精子染色质的成熟影响不大㊂C R O S N O E L等[12]研究表明随着父方年龄的增大,单基因突变会每年增加两个,这对精子与受精卵的成功结合及胚胎的正常发育有着重要的作用㊂同时也有相关研究表明年龄增长,男性生育力下降,精液参数变差包括精子活动力㊁精子活率等降低[13]㊂因此,年龄增长导致精子D N A损伤概率增大和精子形态异常率升高㊂精子D N A的损伤水平能显著性的预测宫颈内授精㊁宫腔内授精和体外授精等助孕手段的成功率,而且精子D N A损伤与卵细胞胞质内单精子注射及体外授精助孕治疗后的妊娠风险增加显著相关[14-15]㊂精子D F I㊁H D S与精子形态均呈负相关,精子D F I与患者年龄呈正相关,故年龄是影响精子D N A 完整性的因素之一,并且精子D N A损伤会导致精子形态的异常,因此精子D F I和H D S应与常规精液参数等综合分析,这在男性的不育原因诊断㊁精子生殖能力评估和人工辅助生殖结局的预测上有着非常重要的作用,同时需清楚精子D N A损伤的内在机制,有㊃226㊃国际检验医学杂志2021年3月第42卷第5期I n t J L a b M e d,M a r c h2021,V o l.42,N o.5待后续进一步研究㊂参考文献[1]B A R R A T T C L.S e m e n a n a l y s i s i s t h e c o r n e r s t o n e o f i n-v e s t i g a t i o n f o r m a l e i n f e r t i l i t y[J].P r a c t i t i o n e r,2007,251 (1690):8-10.[2]E V G E N I E,C HA R A L A B O 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禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响
禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响杨光;卞廷松;徐福松;史兵伟;毛伟;孙甜【期刊名称】《中国实用医药》【年(卷),期】2008(003)006【摘要】目的观察禁欲时间对男性不育症患者精子核蛋白组型转换半定量检测值的影响.方法对2005年11月至2007年11月期间来常州市中医医院男科门诊就诊的452例不育症患者,采用苯胺蓝染色法进行精子核蛋白组型转换半定量的检测.结果完成的452例患者中,核蛋白组型转换半定量检测值正常者362例(80.09%),异常者90例(19.91%).按照禁欲时间分为小于3 d组、3～7 d组与大于7 d组进行比较,核蛋白组型转换半定量检测值差异有统计学意义(P＜0.05).结论精子核蛋白组型半定量的检测对男性不育症有临床价值,禁欲时间对核蛋白组型转换半定量检测值有一定影响.【总页数】2页(P14-15)【作者】杨光;卞廷松;徐福松;史兵伟;毛伟;孙甜【作者单位】213003,南京中医药大学附属常州市中医院男科;213003,南京中医药大学附属常州市中医院男科;江苏省中医院;213003,南京中医药大学附属常州市中医院男科;213003,南京中医药大学附属常州市中医院男科;常州市妇幼保健医院【正文语种】中文【中图分类】R6【相关文献】1.男性不育患者精子核蛋白组型转换与精子密度及活力分析 [J], 刘居理;罗明;卢雪芳;杜俊2.男性不育症患者精子核蛋白组型转换异常的检测与分析 [J], 卞廷松;徐福松;杨光;史兵伟;周华3.男性不育患者精子核蛋白组型转换实验的检测与分析 [J], 孙永4.探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA碎片指数的影响 [J], 甄国志;麦福劲;林冰;叶宇;庞颖仪;梁洁珩;梁宇玲5.中药治疗精子核蛋白组型异常男性不育症59例 [J], 卞廷松;徐福松;杨光;史兵伟;周华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA 碎片指数的影响作者：甄国志麦福劲林冰叶宇庞颖仪梁洁珩梁宇玲来源：《中国实用医药》2020年第22期【摘要】目的探讨精子核蛋白组型转换异常对精子DNA碎片指数（DFI）的影响。
方法400份精液检查标本为研究对象，按核蛋白组型转换异常率分为<30%组（200例）和≥30%组（200例）。
比较两组的精子数及DFI。
结果≥30%组的大晕环精子数（68.9±11.5）条少于<30%组的（78.6±8.9）条，无晕环精子数（11.9±8.1）条多于<30%组的（4.3±8.5）条， DFI （23.5±9.6）%高于<30%组的（13.8±8.7）%，差异均具有统计学意义（P<0.05） ;两组中晕环精子数、小晕环精子数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
结论精子核蛋白组型转换异常对DFI有影响，可作为评价精子功能的一项有重要意义的参考指标。
【关键词】精子核蛋白组型转换异常;精子DNA碎片指数;不育症DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2020.22.013Discussion on the influence of abnormal sperm nucleoprotein transition on sperm DNA fragment index; ;ZHEN Guo-zhi， MAI Fu-jin， LIN Bing，et al. Shunde Women and Children’s Hospital of Guangdong Medical University， Foshan 528300， China【Abstract】 Objective; ;To discuss the influence of abnormal sperm nucleoprotein transition on sperm DNA fragment index （DFI）. Methods; ;A total of 400 specimens of semen were taken as the research objects， and were divided into <30% group （200 cases）and ≥30% g roup （200 cases）according to the abnormal rate of nucleoprotein transition. The sperm count and DFI of the two groups were compared. Results; ;The number of spermatozoa with large halos （68.9±11.5）pieces of ≥30% group was less than that of <30% group （78.6±8.9） pieces， number of spermatozoa with no halos （11.9±8.1） pieces was more than that of <30% group （4.3±8.5） pieces， and DFI （23.5±9.6）% was higher than that of <30% group （13.8±8.7）%， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in number of spermatozoa with medium-sized and small-sized halosbetween the two groups （P>0.05）. Conclusion; ;Abnormal sperm nucleoprotein transition affects DFI and can be used as an important reference index for evaluating sperm function.【Key words】 Abnormal sperm nucleoprotein transition; Sperm DNA fragment index; Infertility男性不育症是临床常见的一种生殖疾病，根据世界卫生组织（WHO）的统计， 15% 的育龄夫妇存在不育问题，其中，男方因素占40%[1]， DFI是目前评估男性精子质量及功能的重要指标。
精子核蛋白组型转换，是鱼精蛋白与DNA之间的联系导致染色质形成层叠的结构，使精子染色体高度浓缩、稳定。
精子核蛋白组型转换异常，可使精子DNA稳定性降低，增大精子DNA的损伤，在精子受精后精核不能正常聚解，影响雌雄原核的融合。
目前对精子核蛋白组型异常与精子DNA损伤及精子质量之间相关性的报道较少，本研究通过选取2017年5月～2019年5月本中心精液检查的400份标本进行检测、分析。
通过观察精子核蛋白组型转换对DFI的影响，明确其相关性。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 一般资料选取本生殖中心自2017年5月～2019年5月的400份精液标本，受检者平均年龄（28±4.1）歲，禁欲2～7 d，手淫方法收集精液标本，按世界卫生组织《人类精液与宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（第5版）行精液常规参数检查，采用CASA系统（北京伟力新世界科技发展有限公司，型号：WL JY-9000）检测精子。
1. 2 方法1. 2. 1 精子染色质扩散实验实验步骤参考 Halo-sperm 试剂盒说明书。
步骤简述如下：新鲜精液行常规检查后用PBS调整至精子密度10×106/ml，取出30 μl加入溶解的低熔点琼脂糖凝胶30 μl 中，温度37℃下混匀，加20 μl 精子凝胶混合液于预处理载玻片上，盖上22cm×22 cm 盖玻片， 4℃冰箱水平放置5 min。
移去盖玻片，放入酸性 DNA 变性液中，室温孵育7 min。
取出玻片浸泡于裂解液中20 min。
在蒸馏水中5 min洗去残余裂解液。
玻片依次放入70%、90%和100% 乙醇中各2 min 脱水。
晾干后玻片用瑞氏染色液覆盖于样本表面10 min。
用自来水冲洗掉染液，风干。
200倍光镜下观察，比较精子核和核周围晕环大小，计算精子DNA 碎片指数。
1. 2. 2 精子核蛋白组型检测（苯胺蓝染色法）1. 2. 2. 1 实验原理在精子发生成熟过程中，与精子核 DNA 结合的碱性蛋白发生组型转换，富含赖氨酸残基的组蛋白逐渐被富含精氨酸和胱氨酸残基的鱼精蛋白所替代。
在酸性条件下，苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成蓝色化合物，从而显示富含赖氨酸残基蛋白质的存在。
1. 2. 2. 2 精子核蛋白组型转换检测精子核蛋白组型转换采用苯胺蓝染色法（试剂盒购自深圳华康生物医学工程有限公司）分析精子核蛋白成熟度，操作步骤详见试剂盒说明书。
正常参考值为核蛋白组型转换异常率<30%。
1. 3 观察指标比较不同精子核蛋白组型转换异常率间的精子数及DFI。
1. 4 统计学方法采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。
计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示，采用t检验。
P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果400份精液标本按核蛋白组型转换异常率分为<30%组（200例）和≥30%组（200例）。
≥30%组的大晕环精子数（68.9±11.5）条少于<30%组的（78.6±8.9）条，无晕环精子数（11.9±8.1）条多于<30%组的（4.3±8.5）条， DFI（23.5±9.6）%高于<30%组的（13.8±8.7）%，差异均具有统计学意义（P<0.05）;两组中晕环精子数、小晕环精子数比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
见表1。
3 讨论在精子发生过程中，生精细胞内DNA含量发生着规律性变化，富含赖氨酸的组蛋白逐渐被富含精氨酸和胱氨酸的鱼精蛋白所代替。
鱼精蛋白与DNA之间的联系导致染色质形成层叠的结构，使精子染色体高度浓缩、稳定。
精子核蛋白组型转换异常，可使精子DNA稳定性降低，增大精子DNA的损伤，在精子受精后精核不能正常聚解。
研究发现， DFI与囊胚形成率有关[2]，异常的核蛋白可使过量的精源性组蛋白再次被包装入受精卵染色质中，妨碍卵裂时染色体的行为及胚胎发育过程中基因的表达与调控，进而影响了雌雄原核的融合，并且导致胚胎不能正常发育。
Kumar 等[3] 研究指出， DFI>30% 导致胚胎发育受损、胚胎质量严重下降、患不孕症的风险明显增加等不良妊娠结局。
这与 Leach 等[4]研究结论一致。
目前精子DNA碎片的检测被认为是一个新的评价精子质量和预测生育能力的指标[5]，但精子核蛋白组型转换与DFI相关性的研究较少，本研究通过观察精子核蛋白组型转换对DFI 的影响，明确其相关性。
目前临床上认为精子核蛋白组型转换异常的正常临界值是30%，作者的研究发现，≥30%组的大晕环精子数（68.9±11.5）条少于<30%组的（78.6±8.9）条，无晕环精子数（11.9±8.1）条多于<30%组的（4.3±8.5）条， DFI（23.5±9.6）%高于<30%组的（13.8±8.7）%，差异均具有统计学意义（P<0.05） ;两组中晕环精子数、小晕环精子数比较，差異均无统计学意义（P>0.05）。
通过分析发现，精子核DNA完整性与核蛋白成熟度间存在显著正相关，与先前报道一致 [6]。
精子核蛋白组型转换异常可能是男性不育的一个独立性因素 [7] ，目前精子DNA损伤与核蛋白组型转换的检测方法逐渐趋于成熟和完善，并在临床上得到了一定的应用，因此，精子核蛋白组型转换可作为评价精子质量和功能的另一项有重要意义的参考指标。
并且对胚胎形成及妊娠临床结局是一个有效的预测指标。
由于病例数较少，本研究结论有待于更大量病例数，采取多中心的数据及更深入的研究以验证。
参考文献[1] Jungwirth A， Giwercman A， Tournaye H， et al. European Association of Urology guidelines on Male Infertility： the 2012 update. European Urology， 2012， 62（2）：324-332.[2] 郑九嘉，肖仕金，杨旭，等. 精子核蛋白组型转换与精液参数、胚胎发育的相关性分析. 中华泌尿外科杂志， 2013， 34（9）：694-698.[3] Kumar K， Deka D， Singh A， et al. Predictive value of DNA integrity analysis in idiopathic recurrent pregnancy loss following spontaneous conception. Journal of Assisted Reproduction & Genetics， 2012， 29（9）：861-867.[4] Leach M， Aitken RJ， Sacks G. Sperm DNA fragmentation abnormalities in men from couples with a history of recurrent miscarriage. Australian & New Zealand Journal of Obstetrics & Gynaecology， 2015， 55（4）：379-383.[5] World health organization. WHO laboretory; mannal; for the Exanination and processing of human semen （nonserial publications）. Journal of Andrology， 2010， 30（2）：9.[6] 陈康，周宇林，余波澜，等.精子核蛋白组型异常及DNA损伤与精子活动力的相关性研究.中华临床医师杂志（电子版）， 2013， 7（2）：575-578.[7] 刘居理，罗明，卢雪芳，等. 男性不育患者精子核蛋白组型转换与精子密度及活力分析. 检验医学与临床， 2009， 6（13）：1061-1062.[收稿日期：2020-04-02]。