大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮的研究

大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮的研究
李月;陈莹
【摘要】利用4种大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮.结果表明,HPD100型大孔吸附树脂最适合分离纯化银杏叶总黄酮,该树脂的静态饱和吸附量(以干树脂计)为63.8 mg·g-1,静态洗脱率为91.2%,动态饱和吸附-洗脱量为14.0 mg·g-1,洗脱剂为70%乙醇,洗脱剂用量为4倍树脂体积,树脂可重复使用7个周期.%The total flavones from Folium ginkgo leaves were seperated and purified by four kinds of macroporous adsorption resin. The results showed that resin HPD100 was the most efficient one with static adsorption capacity of 63.8 mg·g-1, static elution rate of 91.2% and dynamic saturated adsorption capacity of 14.0 mg·g-1 with 4 BV 70% ethanol as eluting
reagent.Furthurmore,resin HPD100 could be repeatly used for 7 cycles.【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2009(026)007
【总页数】3页(P55-57)
【关键词】银杏叶总黄酮;大孔吸附树脂;分离纯化
【作者】李月;陈莹
【作者单位】中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001;中国医科大学附属第一医院药剂科,辽宁,沈阳,110001
【正文语种】中文
【中图分类】TQ461
大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，广泛应用于中草药化学成分的分离与富集。

根据树脂的孔径、比表面积、结构、极性的差异，大孔吸附树脂分为许多类型，在实际应用中要根据分离要求选择合适的大孔吸附树脂[1，2]。

银杏叶的主要活性成分黄酮醇苷类，具有敛肺、平喘、活血化瘀、止痛的功效，可用于肺虚、咳喘、冠心病、心绞痛和高脂血症的治疗。

作者在此对4种型号的大孔吸附树脂进行筛选，并对银杏叶总黄酮的分离纯化工艺进行了探讨。

1 实验
1.1 材料、试剂与仪器
银杏叶提取物(总黄酮含量为3.0%)，自制。

芦丁对照品(批号：0080-9705)，中国药品生物制品检定所；HPD100、HPD600型大孔吸附树脂(医药级)，河北沧州宝恩化工有限公司；D101型大孔吸附树脂，
天津海光化工有限公司；AB-8型大孔吸附树脂，南开大学化工厂；其它试剂均为分析纯。

UV-7520型紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂。

1.2 上柱溶液的制备
称取一定量银杏叶提取物置于烧杯中，加约20倍的蒸馏水，充分搅拌，超声处理10 min，使其充分溶解，过滤，即得上柱溶液。

1.3 标准曲线的绘制
精密称取芦丁对照品13.13 mg，置于50 mL量瓶中，加60%乙醇溶解，定容至
刻度，摇匀，即得浓度为0.2626 mg·mL-1的对照品溶液。

精密吸取芦丁对照品
溶液1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL，置于10 mL量瓶中，各加水
至5 mL，加5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min；加10%硝酸铝0.3 mL，
摇匀，静置6 min；加氢氧化钠4 mL，静置15 min，再加水至刻度。

随行溶剂
作空白对照，在500 nm波长处测定吸光度。

标准曲线线性回归方程为：
A=9.5891c+0.0086(R=0.9993)，线性范围为26.26～78.78 μg·mL-1。

1.4 样品测定
称取银杏叶提取物约0.1 g置于25 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，超声溶解，作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液3 mL，置于10 mL量瓶中，按1.3方法测定吸光度。

精密量取供试品溶液3 mL，置于10 mL量瓶中加水至刻度，摇匀，
作为空白对照溶液。

根据标准曲线计算样品溶液中总黄酮(以芦丁计)的浓度。

1.5 大孔吸附树脂的筛选与吸附工艺研究
1.5.1 大孔吸附树脂的筛选
分别精密称取处理好的干树脂1.0 g，置于100 mL具塞三角瓶中，加样品溶液
20 mL，每隔5 min振摇10 s，持续2 h，然后静置24 h，使其达到饱和吸附，
吸附上层液测定总黄酮浓度。

再将经静态饱和吸附后的树脂滤出，吸干表面水分，精密加入70%乙醇20 mL，每隔5 min振摇10 s，持续2 h，测定洗脱液的浓度，通过比较各树脂的静态饱和吸附量和洗脱率来筛选出最适合分离纯化银杏叶总黄酮的树脂。

两者分别依下式计算：
静态饱和吸附量
洗脱率
1.5.2 洗脱剂体积分数的选择
精密称取处理好的HPD100型树脂1.0 g，分别置于100 mL具塞锥形瓶中，加
入样品液20 mL，充分吸附后，分离树脂，晾干，对应加入体积分数为30%、50%、60%、70%、80%、95%的乙醇各20 mL，每隔5 min振摇10 s，持续2 h，测定洗脱液浓度，计算洗脱率。

通过比较洗脱率来选择洗脱剂的体积分数。

1.5.3 洗脱剂用量的选择
称取处理好的HPD100型干树脂5 g，装入1.5 cm×30 cm的层析柱中，银杏叶
提取物水溶液20 mL(总黄酮浓度为2.0 mg·mL-1)以5 mL·min-1的流速上柱，用蒸馏水洗至无色后，分别用3 BV、4 BV、5 BV的洗脱剂洗脱，收集洗脱液，测
定总黄酮浓度及收率。

通过比较总黄酮收率来选择洗脱剂的用量。

1.5.4 HPD100型树脂的动态饱和吸附-洗脱性能研究
分别称取处理好的HPD100型干树脂150 g和50 g，用湿法装柱法各装入3
cm×100 cm的层析柱中，将两份银杏叶提取物溶液600 mL(总黄酮浓度为2.0 mg·mL-1)以5 mL·min-1的上柱速度分别上柱，用蒸馏水洗至无色，再分别用5 BV的洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，称重，测定总黄酮浓度，分别计算出两根层析柱中树脂的动态吸附-洗脱量。

1.5.5 HPD100型树脂的稳定性考察
称取处理好的HPD100型树脂100 g，湿法装入3 cm×100 cm的层析柱中，银
杏叶提取物溶液600 mL(总黄酮浓度为2.0 mg·mL-1)以5 mL·min-1的流速上柱，用蒸馏水洗至无色，再用4 BV洗脱剂洗脱，收集洗脱液，此过程为一个周期。

分别将各次洗脱液减压回收，浓缩，干燥，重复上述周期，测定总黄酮的含量与收率。

通过比较各周期总黄酮的含量与收率来考察树脂重复使用的次数。

2 结果与讨论
2.1 树脂的筛选(表1)
表1 4种树脂的静态饱和吸附-洗脱性能Tab.1 The static saturated adsorption-elution performance of four kinds of resin树脂型号初始浓度mg·mL-1吸附
后浓度mg·mL-1静态饱和吸附量mg·g-1 洗脱量mg·g-1洗脱率%HPD1006 132 9463 858 291 2D1016 133 8346 038 583 7AB⁃86 134 0741 233 280
6HPD6006 133 2757 250 588 3
由表1可知，HPD100型树脂对银杏叶总黄酮的静态饱和吸附量和洗脱率均高于
其它3种树脂，具有最好的静态饱和吸附-洗脱性能，最适合分离纯化银杏叶总黄酮。

2.2 洗脱剂体积分数的选择
实验表明，乙醇体积分数为30%、50%、60%、70%、80%、95%时，洗脱率分别为34%、67%、76%、92%、92%、93%。

用70%～95%的乙醇洗脱，洗脱率无明显差异，为节省成本，选择70%乙醇作为洗脱剂。

2.3 洗脱剂用量的选择
实验表明，洗脱剂用量为3 BV、4 BV和5 BV时，总黄酮收率分别为83.4%、91.7%及92.3%，考虑到生产成本，选择洗脱剂的用量为4 BV。

2.4 HPD100型树脂的动态饱和吸附-洗脱量(表2)
表2 HPD100型树脂动态饱和吸附-洗脱实验结果Tab.2 The dynamic saturated adsorption-elution experimental results of resin HPD100干树脂量/g上样前总黄酮的量/g所得纯化物的量/g上柱后所得总黄酮的量/g总黄酮吸附率/%总黄
酮含量/%吸附-洗脱量/mg·g-11501 203 611 1293 3317 47501 202 420 7058 32914 0
由表2可知，树脂量为150 g时总黄酮吸附率为93.3%，说明总黄酮已吸附完全，没有流失，树脂的吸附能力尚未达到极限，即树脂未达到饱和；而树脂量为50 g
时总黄酮吸附率为58.3%，说明相对过量的总黄酮无法被全部吸附于树脂上，有
大量流失，树脂的吸附能力已达到极限，即树脂已达到饱和。

因此，HPD100型
树脂的动态饱和吸附-洗脱量为14.0 mg·g-1。

当HPD100型树脂达到饱和吸附时，银杏叶总黄酮与树脂质量比为1∶71.4，为保证总黄酮吸附完全，建议实际生产中银杏叶总黄酮与HPD100型树脂质量比至少为1∶75。

2.5 HPD100型树脂的稳定性(表3)
表3 HPD100型树脂吸附-洗脱银杏叶总黄酮的稳定性Tab.3 The stability of
adsorption-elution of resin HPD100 for total flavones from Folium ginkgo leaves吸附-洗脱周期上样前总黄酮的量/g所得纯化物的量/g上柱后所得总黄酮的量/g总黄酮含量/%总黄酮收率/%11 203 581 11319321 203 551 10319231 203 601 08309041 203 521 02298551 203 530 99288361 203 690 96268071 203 540 92267781 203 540 782265
由表3可知，第8个周期时总黄酮含量与收率都明显下降，因此，建议HPD100型树脂重复使用7个周期后进行再生。

3 结论
利用4种大孔吸附树脂分离纯化银杏叶总黄酮，其中HPD100型树脂分离纯化所得总黄酮的含量和收率均较高，最适合分离纯化银杏叶总黄酮，且稳定性好，可重复使用7个周期。

HPD100型大孔吸附树脂的静态饱和吸附量(以干树脂计)为63.8 mg·g-1，静态洗脱率为91.2%，动态饱和吸附—洗脱量为14.0 mg·g-1，洗脱剂为70%乙醇，洗脱剂用量为4倍树脂体积。

该工艺简单、高效，适合推广于工业生产。

参考文献：
[1] 胡军，周跃华. 大孔吸附树脂在中药成分精制纯化中的应用[J].中成药，2002，24(2)：127-130.
[2] 刘斌，石任兵，余超. 影响大孔吸附树脂吸附分离中草药化学成分的因素[J].中草药，2002，33(5)：475-476.。