高效液相色谱法测定蔬菜中噻虫胺与联苯菊酯残留量
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［１］
联苯菊酯在土壤中不移动，对环境较 为安全，残效期长。现在有农药厂家 将噻虫胺与联苯菊酯联合制药使用， 本文就用液相色谱检测噻虫胺与联苯 菊酯的方法条件做了分析研究。
噻虫胺与联苯菊酯进分析检测。
2 结果与讨论
２．１ 噻虫胺与联苯菊酯的色谱峰曲线 以纯甲醇为流动相，流速 ０．７ ｍＬ／ ｍｉｎ， 进样 ５μｌ， 波长 ２２８ ｎｍ 的条件下， 噻虫胺在 ３．３４８ ｍｉｎ 左右，联苯菊酯 在 ，４．９９８ ｍｉｎ 左右产生一灵敏的色谱 峰，根据峰面积定量，保留时间定性。 利用此峰可测定微量噻虫胺与联苯菊 酯含量。色谱如图 １ 所示。 噻虫胺：３．３４８ ｍｉｎ 联苯菊酯： ４．９９８ ｍｉｎ ２．２ 条件实验 影响噻虫胺与联苯菊酯峰面积的 因素有流动相种类与组成、波长、环 境温度等，其中流动相种类及波长的 影响最明显。 ２．２．１ 标样溶液的配制 称取噻虫胺与联苯菊酯标准品各 ０．０５ ｇ（精确至 ０．０００２ ｇ）于 ５０ ｍＬ 容 量瓶中，用甲醇超声溶解后定容，再 准确移取该液 ５．００ ｍＬ 于 ５０ ｍＬ 容量瓶 中，用甲醇定容，过滤备用。 ２．２．２ 流动相的选择 笔者试验了甲醇、乙腈等溶剂， 以 ２４５ ｎｍ 波长，进样 ５μｌ 进行试验， 结果表明， 用甲醇的色谱峰峰形对称，
Jan 2016
CHINA FOOD SAFETY
113
T
echnology
科技
科技文苑
图 1 样品中噻虫胺、联苯菊酯的液相色谱图 无前沿与拖尾峰，效果较好。考虑乙 腈毒性大、成本高，检测样品时色谱 峰峰形不对称，有肩峰等。本文选择 甲醇为流动相，从保留时间、峰面积 与峰高方面考虑，用甲醇检测噻虫胺 与联苯菊酯比用乙腈为流动相检测的 效果更好。 选择甲醇作为流动相溶剂后，以 ２４５ ｎｍ 波长，进样 ５μｌ，甲醇与水按 不同比例配制与不同流速进行高效液 相色谱分析测定。 从检测结果可知，甲醇与水的不 同配比有时会使峰形不对称，出峰时 间推迟，没有找到可同时使两农药出 峰理想的比例。但使用纯甲醇则可使 两样品有较好的峰形，两样品峰分离 较好，大大缩短检测时间。从保留时 间与峰面积及峰分离的情况方面考虑， 本文选择流动相纯甲醇较适宜。 ２．２．３ 检测波长的选择 在没有干扰的情况下用对两样品 都能较好吸收的波长来进行定量测定， 本次试验在流动相纯甲醇与流速 ０．７ ｍＬ／ｍｉｎ 的情况下，改变波长对同一浓 度的噻虫胺与联苯菊酯进行高效液相 色谱分析。 在较长波长时，噻虫胺的吸收比 联苯菊酯要好，随着波长的缩短，噻 虫胺的吸收明显减弱，联苯菊酯的吸 收明显增加，在 ２２８ ｎｍ 左右波长时， 两者的吸收相当，所以要同时测定两 样品，选择 ２２８ ｎｍ 波长是最适宜的检 测波长。 ２．３ 检测限与线性范围 ２．３．１ 检测限 能够定性区别与零的待测物的最 低含量，定量 １０ 次进样 ０．０２ μｇ／ ｍＬ 噻虫胺 ５μｌ， 选取较为平缓的一段基线 作为参比，放大后，记录基线噪音峰 的高度，由数据结果可知 ０．０２ μｇ／ ｍＬ 噻虫胺 ５μｌ 的进样量约是噪音峰的高 度的三倍，可以确定用此法得出噻虫 胺的检测限为 ０．０２ μｇ／ ｍＬ。如果取样 量为 ５ ｇ，则噻虫胺在蔬菜中的检测限 为 ０．０４ ｍｇ／ｋｇ。 定量 １０ 次进样 ０．０６ μｇ／ ｍＬ 联苯 菊酯 ５μｌ， 选取较为平缓的一段基线作 为参比，放大后，记录基线噪音峰的 高度，由数据结果可知 ０．０６ μｇ／ ｍＬ 联苯菊酯 ５μｌ 的进样量约是噪音峰的 高度的三倍，可以确定用此法得出联 苯菊酯的检测限为 ０．０６μｇ／ ｍＬ。如果 取样量为 ５ ｇ，则联苯菊酯在蔬菜中的 检测限为 ０．１２ ｍｇ／ｋｇ。 ２．３．２ 线性范围 在试验最佳的液相色谱分析操作 积对各进样量进行线性回归，由试验 结果显示，噻虫胺在进样 ０．１ μｇ／ ｍＬ 到 ８０ μｇ／ ｍＬ 之间呈良好的线性关系， 相关系数为 ０．９９９ １，线性范围达 ３ 个 数量级。，联苯菊酯在进样 １．０ μｇ／ ｍＬ 到 １００ μｇ／ ｍＬ 之间呈良好的线性 关系，相关系数为 ０．９９９ ５，线性范围 达 ３ 个数量级。 ２．４ 样品测定与加标回收率测定 ２．４．１ 样品测定 ２．４．１．１ 样品提取 取新鲜全株小蔬菜 ２００．０ ｇ 粉碎匀 浆，称取 ５．０ ｇ 匀浆液并加入 ５０．０ ｍＬ 丙酮，震荡提取 ３０ ｍｉｎ，真空抽滤， 滤液于 ７５℃水浴旋转蒸发至近干。 ２．４．１．２ 样品净化 用 ５０．０ ｍＬ 丙 酮 和 ５０．０ ｍＬ 正 己 烷将上述残留物定量转至加有 １００．０ ｍＬ１０％ 氯化钠的分液漏斗中，震荡， 静置，分层，弃去有机相，用 ７５．０ ｍＬ 乙酸乙酯分次萃取水相， 合并有机相， 加无水硫酸钠脱水后，于 ６０℃水浴旋 转蒸发近干，残留物中加 ３．０ ｍＬ 丙酮 完全溶解后，加 ７．０ ｍＬ 正己烷混合， 待层析柱净化。 在玻璃层析柱中注入 １１．０ ｇ 悬浮
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高效液相色谱法测定蔬菜中噻虫胺与 联苯菊酯残留量
□曾勇胜 化州市疾病预防控制中心 钟冬明 广州市罗岗区东区社区卫生服务中心
摘 要：为了建立一种高效液相色谱法测定噻虫胺与联苯菊酯的新方法。本文采用不同的流动相、检测波长等反复测 定噻虫胺与联苯菊酯的峰面积与峰高，按照规定的标准方法用本试验条件检测蔬菜中噻虫胺与联苯菊酯的检测限、线性范 围及加标回收率的实验。最终在流动相纯甲醇、228nm 波长，噻虫胺与联苯菊酯都有较理想的检测效果。因此，高效液相 色谱在一定条件下测定蔬菜中噻虫胺与联苯菊酯的含量具有理想的效果。 关键词：噻虫胺；联苯菊酯 ；高效液相色谱 DOI:10.16043/ki.cfs.2016.03.059 农药是当前农业生产中用于防治 病、虫、杂草对农作物危害不可缺少 的物质，对促进农业增产有极重要的 作用。农药施用到环境中带来的农副 产品农药残留量超标问题，已引起全 社会的普遍关注。另外，由于农药残 留问题引发的各国之间的贸易纠纷也 时有发生。因而，农药残留检测技术 一直是国际农产品和食品安全研究领 域的一个热点
1 实验部分
１．１ 仪器及试剂 １．１．１ 仪器 高效液相色谱仪（大连依利特分 析仪器有限公司，色谱数据工作站） 色 谱 柱：２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（ｉｄ），
。
噻虫胺（ｃｌｏｔｈｉａｎｉｄｉｎ）是第二代 新型烟碱类广谱内吸杀虫剂，主要通 过昆虫神经细胞上的乙酰胆碱型受体， 使神经体持续激活，虫体持续痉挛， 麻痹死亡。与第一代相比，其分子结 硝基亚胺取代了硝基亚 甲基部分，这一改变使其杀虫活性更 高，杀虫谱更广。少量的噻虫胺残留 不会对人体造成立即的、 直接的毒害， 但长期食用受其污染的蔬菜可导致癌 症、内分泌紊乱等疾病。联苯菊酯是 一种高效合成除虫菊酯杀虫、 杀螨剂。 具有触杀、胃毒作用，无内吸、熏蒸 作用。防治对象为各种鳞翅目幼虫、 粉虱、 蚜虫、 植食性叶螨等。 杀虫谱广， 对螨也有较好防效，并且作用迅速。
Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ 不锈钢柱 微量进样器：２０μｌ 溶剂过滤器，滤膜孔径 ０．４５μｍ 针式过滤器，过滤膜孔径 ０．４５μｍ 超声波清洗器 １．１．２ 试剂 噻虫胺与联苯菊酯标准物质：已 知质量分数 ω＝９９％ 甲醇（色谱级，天津市科密欧化 学试剂有限公司） 纯净水：新蒸二次蒸馏水 １．２ 方法实验 噻虫胺与联苯菊酯用纯甲醇溶解 并定溶，以纯甲醇为流动相，使用以 ２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ（ｉｄ），Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ 不锈钢柱，紫外可变波长检测器下对
联苯菊酯在土壤中不移动，对环境较 为安全，残效期长。现在有农药厂家 将噻虫胺与联苯菊酯联合制药使用， 本文就用液相色谱检测噻虫胺与联苯 菊酯的方法条件做了分析研究。
噻虫胺与联苯菊酯进分析检测。
2 结果与讨论
２．１ 噻虫胺与联苯菊酯的色谱峰曲线 以纯甲醇为流动相，流速 ０．７ ｍＬ／ ｍｉｎ， 进样 ５μｌ， 波长 ２２８ ｎｍ 的条件下， 噻虫胺在 ３．３４８ ｍｉｎ 左右，联苯菊酯 在 ，４．９９８ ｍｉｎ 左右产生一灵敏的色谱 峰，根据峰面积定量，保留时间定性。 利用此峰可测定微量噻虫胺与联苯菊 酯含量。色谱如图 １ 所示。 噻虫胺：３．３４８ ｍｉｎ 联苯菊酯： ４．９９８ ｍｉｎ ２．２ 条件实验 影响噻虫胺与联苯菊酯峰面积的 因素有流动相种类与组成、波长、环 境温度等，其中流动相种类及波长的 影响最明显。 ２．２．１ 标样溶液的配制 称取噻虫胺与联苯菊酯标准品各 ０．０５ ｇ（精确至 ０．０００２ ｇ）于 ５０ ｍＬ 容 量瓶中，用甲醇超声溶解后定容，再 准确移取该液 ５．００ ｍＬ 于 ５０ ｍＬ 容量瓶 中，用甲醇定容，过滤备用。 ２．２．２ 流动相的选择 笔者试验了甲醇、乙腈等溶剂， 以 ２４５ ｎｍ 波长，进样 ５μｌ 进行试验， 结果表明， 用甲醇的色谱峰峰形对称，
Jan 2016
CHINA FOOD SAFETY
113
T
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图 1 样品中噻虫胺、联苯菊酯的液相色谱图 无前沿与拖尾峰，效果较好。考虑乙 腈毒性大、成本高，检测样品时色谱 峰峰形不对称，有肩峰等。本文选择 甲醇为流动相，从保留时间、峰面积 与峰高方面考虑，用甲醇检测噻虫胺 与联苯菊酯比用乙腈为流动相检测的 效果更好。 选择甲醇作为流动相溶剂后，以 ２４５ ｎｍ 波长，进样 ５μｌ，甲醇与水按 不同比例配制与不同流速进行高效液 相色谱分析测定。 从检测结果可知，甲醇与水的不 同配比有时会使峰形不对称，出峰时 间推迟，没有找到可同时使两农药出 峰理想的比例。但使用纯甲醇则可使 两样品有较好的峰形，两样品峰分离 较好，大大缩短检测时间。从保留时 间与峰面积及峰分离的情况方面考虑， 本文选择流动相纯甲醇较适宜。 ２．２．３ 检测波长的选择 在没有干扰的情况下用对两样品 都能较好吸收的波长来进行定量测定， 本次试验在流动相纯甲醇与流速 ０．７ ｍＬ／ｍｉｎ 的情况下，改变波长对同一浓 度的噻虫胺与联苯菊酯进行高效液相 色谱分析。 在较长波长时，噻虫胺的吸收比 联苯菊酯要好，随着波长的缩短，噻 虫胺的吸收明显减弱，联苯菊酯的吸 收明显增加，在 ２２８ ｎｍ 左右波长时， 两者的吸收相当，所以要同时测定两 样品，选择 ２２８ ｎｍ 波长是最适宜的检 测波长。 ２．３ 检测限与线性范围 ２．３．１ 检测限 能够定性区别与零的待测物的最 低含量，定量 １０ 次进样 ０．０２ μｇ／ ｍＬ 噻虫胺 ５μｌ， 选取较为平缓的一段基线 作为参比，放大后，记录基线噪音峰 的高度，由数据结果可知 ０．０２ μｇ／ ｍＬ 噻虫胺 ５μｌ 的进样量约是噪音峰的高 度的三倍，可以确定用此法得出噻虫 胺的检测限为 ０．０２ μｇ／ ｍＬ。如果取样 量为 ５ ｇ，则噻虫胺在蔬菜中的检测限 为 ０．０４ ｍｇ／ｋｇ。 定量 １０ 次进样 ０．０６ μｇ／ ｍＬ 联苯 菊酯 ５μｌ， 选取较为平缓的一段基线作 为参比，放大后，记录基线噪音峰的 高度，由数据结果可知 ０．０６ μｇ／ ｍＬ 联苯菊酯 ５μｌ 的进样量约是噪音峰的 高度的三倍，可以确定用此法得出联 苯菊酯的检测限为 ０．０６μｇ／ ｍＬ。如果 取样量为 ５ ｇ，则联苯菊酯在蔬菜中的 检测限为 ０．１２ ｍｇ／ｋｇ。 ２．３．２ 线性范围 在试验最佳的液相色谱分析操作 积对各进样量进行线性回归，由试验 结果显示，噻虫胺在进样 ０．１ μｇ／ ｍＬ 到 ８０ μｇ／ ｍＬ 之间呈良好的线性关系， 相关系数为 ０．９９９ １，线性范围达 ３ 个 数量级。，联苯菊酯在进样 １．０ μｇ／ ｍＬ 到 １００ μｇ／ ｍＬ 之间呈良好的线性 关系，相关系数为 ０．９９９ ５，线性范围 达 ３ 个数量级。 ２．４ 样品测定与加标回收率测定 ２．４．１ 样品测定 ２．４．１．１ 样品提取 取新鲜全株小蔬菜 ２００．０ ｇ 粉碎匀 浆，称取 ５．０ ｇ 匀浆液并加入 ５０．０ ｍＬ 丙酮，震荡提取 ３０ ｍｉｎ，真空抽滤， 滤液于 ７５℃水浴旋转蒸发至近干。 ２．４．１．２ 样品净化 用 ５０．０ ｍＬ 丙 酮 和 ５０．０ ｍＬ 正 己 烷将上述残留物定量转至加有 １００．０ ｍＬ１０％ 氯化钠的分液漏斗中，震荡， 静置，分层，弃去有机相，用 ７５．０ ｍＬ 乙酸乙酯分次萃取水相， 合并有机相， 加无水硫酸钠脱水后，于 ６０℃水浴旋 转蒸发近干，残留物中加 ３．０ ｍＬ 丙酮 完全溶解后，加 ７．０ ｍＬ 正己烷混合， 待层析柱净化。 在玻璃层析柱中注入 １１．０ ｇ 悬浮
科技文苑
高效液相色谱法测定蔬菜中噻虫胺与 联苯菊酯残留量
□曾勇胜 化州市疾病预防控制中心 钟冬明 广州市罗岗区东区社区卫生服务中心
摘 要：为了建立一种高效液相色谱法测定噻虫胺与联苯菊酯的新方法。本文采用不同的流动相、检测波长等反复测 定噻虫胺与联苯菊酯的峰面积与峰高，按照规定的标准方法用本试验条件检测蔬菜中噻虫胺与联苯菊酯的检测限、线性范 围及加标回收率的实验。最终在流动相纯甲醇、228nm 波长，噻虫胺与联苯菊酯都有较理想的检测效果。因此，高效液相 色谱在一定条件下测定蔬菜中噻虫胺与联苯菊酯的含量具有理想的效果。 关键词：噻虫胺；联苯菊酯 ；高效液相色谱 DOI:10.16043/ki.cfs.2016.03.059 农药是当前农业生产中用于防治 病、虫、杂草对农作物危害不可缺少 的物质，对促进农业增产有极重要的 作用。农药施用到环境中带来的农副 产品农药残留量超标问题，已引起全 社会的普遍关注。另外，由于农药残 留问题引发的各国之间的贸易纠纷也 时有发生。因而，农药残留检测技术 一直是国际农产品和食品安全研究领 域的一个热点
1 实验部分
１．１ 仪器及试剂 １．１．１ 仪器 高效液相色谱仪（大连依利特分 析仪器有限公司，色谱数据工作站） 色 谱 柱：２５０ｍｍ×４．６ｍｍ（ｉｄ），
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噻虫胺（ｃｌｏｔｈｉａｎｉｄｉｎ）是第二代 新型烟碱类广谱内吸杀虫剂，主要通 过昆虫神经细胞上的乙酰胆碱型受体， 使神经体持续激活，虫体持续痉挛， 麻痹死亡。与第一代相比，其分子结 硝基亚胺取代了硝基亚 甲基部分，这一改变使其杀虫活性更 高，杀虫谱更广。少量的噻虫胺残留 不会对人体造成立即的、 直接的毒害， 但长期食用受其污染的蔬菜可导致癌 症、内分泌紊乱等疾病。联苯菊酯是 一种高效合成除虫菊酯杀虫、 杀螨剂。 具有触杀、胃毒作用，无内吸、熏蒸 作用。防治对象为各种鳞翅目幼虫、 粉虱、 蚜虫、 植食性叶螨等。 杀虫谱广， 对螨也有较好防效，并且作用迅速。
Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ 不锈钢柱 微量进样器：２０μｌ 溶剂过滤器，滤膜孔径 ０．４５μｍ 针式过滤器，过滤膜孔径 ０．４５μｍ 超声波清洗器 １．１．２ 试剂 噻虫胺与联苯菊酯标准物质：已 知质量分数 ω＝９９％ 甲醇（色谱级，天津市科密欧化 学试剂有限公司） 纯净水：新蒸二次蒸馏水 １．２ 方法实验 噻虫胺与联苯菊酯用纯甲醇溶解 并定溶，以纯甲醇为流动相，使用以 ２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ（ｉｄ），Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ 不锈钢柱，紫外可变波长检测器下对