生物大分子的分离与制备(共89张PPT)
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2022/9/24
2022/9/24 7
生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析
2. 酶活力检测
3. 蛋白质组学分析
4. DNA序列分析
5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交
7. 基因克隆8. 基因组构建9. cDNA构建
10. 筛选11. 报告基因检测12. 基因芯片
13. 基因敲除
➢ 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各种蛋 白质的合成。
2022/9/24
生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比，有下列
几个特点： • 生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数千种化
合物，并且在分离过程中，这些化合物仍在发生代谢 变化，如蛋白质和核酸的水解。
有些化合物的含量极微，如激素等。 许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变 变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。
• 功能或分子生物化学阶段（1950 年至今）。研究生命的本质和奥秘： 运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机理 。
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生物化学研究技术方法
❖ 生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象
– 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过 滤、离心、色谱）
立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技 确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之 间相互聚集并从溶液中析出。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。
脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂；采用快速加热 （50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后 凝聚成油块而被除去。
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1、动物组织
• 保存：对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻 保存。
a.冰冻：剥去脂肪和筋皮等结缔组织，短期保存：－
10℃的冰箱内； 长期保存：－70℃低温冰箱内。
– 分析：
• 结构与性质（序列分析，X-射线晶体衍射，核磁共振 ，波谱，质谱等）
• 功能（实验设计与方法）
• 代谢及其细胞调控
• 改造及利用
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4
生物化学研究技术方法
❖经典的研究步骤：
– 分离生化组分（细胞器 和生物分子）；
– 分析生化组分的结构；
生命现象
分离
改造利用
功能基础。随着分子生物学研究的进展，建 对疏水性物质具有很强的亲和力，能结合并溶解磷脂， 破坏内膜的磷脂双分子层，使某些胞内物质释放出来。
选择适宜的溶剂，使蛋白质等杂质形成沉淀而与核酸分离，这种方法称为选择性溶剂沉淀法 。 超声波破碎的有效能量利用率极低 采用快速加热（50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后凝聚成油块而被除去。 但在高盐溶液中，温度的升高有时反而下降。
生物材料一般是指在自然界易采集的、目的物含量较高的生物个 体、器官或组织。
人工生物材料又分为三种： 1、 新品种材料
2、组织培养材料 3、生物产品与生物制品材料
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要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有：
在水和各种有机溶剂中的溶解性。 在不同温度、pH值和各种缓冲液中生物大分子 的稳定
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1.动物组织： 选材：必须选择有效成分含量丰富且易分离的脏器组
织为原材料。单酯酶，从含量看，虽然在胰脏、肝脏 和脾脏中较丰如磷酸富，但是因其与磷酸二酯酶共存 ，进行提纯时，这两种酶很难分开。所以实践中常选 用含磷酸单酯酶少，但几乎不含磷酸二酯酶的前列腺 作材料。
脱脂：脏器中含量较高的脂肪，容易氧化酸败，导致 原料变质影响纯度操作和制品的率。 常用的脱脂方法有：人工剥去脏器外的脂肪组织；浸泡在
b.干燥：对于像脑垂体一类小组织，可置丙酮液中脱 水，干燥后磨粉储存备用；对于含耐高温有效成分（ 如：肝素）的肠粘膜，可在沸水蒸煮处理，烘干后能 长期保存。
冰箱的除霜循环，可能对細胞造成伤害，要特別小心。 解冻時要越快越好，但避免局部過熱。
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2.植物材料：
选材：注意植物品种和生长发育状况不同，其中所 含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。
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3 、微生物
为制备生命大分子物质的主要材料之一。
用离心法收集到的上清液， 可用于制备胞外酶和某些辅基等有效成分；
可置低温下短时间贮存。
收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有效成 分；
或制成冻干粉，在4℃保存(数月不会变质)。
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第二节 细胞的破碎
胞外物质——直接提取
胞内物质——破坏细胞壁或细胞膜后提取
细胞破碎的主要方法： 机械破碎 溶胀和自溶 化学处理：如丙酮、氯仿、甲苯、SDS等
生物酶降解
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ22/9/24
细胞破碎技术
破碎方式
机械法
非机械法
固体剪切 作用
液体剪切 作用
干燥 处理
珠磨法 压榨 高
压
研磨
匀
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浆
超 酶溶法 声 破 碎
溶胞 作用
化学法 物理法
操作：低温、短时。
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(3) 超声波法：
借助声波的震动力破碎细胞壁和细胞器的有效 方法。多用于微生物细胞的破碎，一般输出功率 100-200W，破碎时间3—15min。如果在细胞悬浮液中加
石英砂则可缩短时间。 为了防止电器长时间运转产生过多的热量，常采用间
歇处理和降低温度的方法进行。 超声波的细胞破碎效率与细胞种类、浓度和超声波的
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生物材料的破碎和预处理。 分离纯化方案的选择和探索，这是最困难 的过程。 生物大分子制备物的均一性（即纯度）的 鉴定，要求达到一维电泳一条带，二维电 泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一 个峰。 产物的浓缩，干燥和保存。
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生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
生物组织→ →提取液→ →粗产品→
声频、声能有关。
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超声波破碎的机理：
一般认为在超声波作用下液体发生空化作用（ cavitation),
液体中局部空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲 击波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造成了剪切 力，使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。
– 分析生化组分的功能和代 谢（合成与分解）及其相 互作用。
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生化组分
分析
1、结构与性质 2、功能 3、代谢及其细胞调控
生物化学研究技术方法
• 生物化学研究技术：
– 分离技术：沉淀、吸附、膜分离（过滤、透析等）、离心、层析 、电泳等；
– 分析检测技术：电泳、层析、光谱、质谱、电化学技术、分 子标记等。
生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素很 多，实验方法经验性较强。
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生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：
确定要制备的生物大分子的目的和要求， 是进行科研、开发还是要发现新的物质。 建立相应的可靠的分析测定方法，这是制 备生物大分子的关键。 通过文献调研和预备性实验，掌握生物大 分子目的产物的物理化学性质。
性。 固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。 各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带电的
情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝 胶、树脂等填料中的分配系数。
其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性 和对各种化学试剂的稳定性。
对其他生物分子的特殊亲和力。
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制备生物大分子的分离纯化方法多种多样， 主要是利用它们之间特异性的差异，如分子 的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、 极性、电荷和与其他分子的亲和性等。
术。
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生物大分子相互作用分析技术:
1. 凝胶阻滞分析法 2. DNA酶Ⅰ足纹分析法
3. 蛋白质芯片 4. 酵母双杂交系统筛选相互作用蛋白质
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第一章 生物大分子的分离纯化
➢ 蛋白质（酶）、核酸存在于一切生物体中，是非 常重要的生物大分子。
➢ 蛋白质是生物功能的执行者，担负着生物催化、物质 运输、运动、防御、调控及记忆、识别等多种生理功 能；
层析法
电泳法
超离心法
透析和超滤
→结晶
│←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│
•材料选择与处理 •细胞破碎（机械破碎、 溶账和自溶、酶解、化学 处理）
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•盐析（硫酸铵盐析）
•等点电沉淀
•有机溶剂沉淀 •离心
依据原理
• 分子大小 • 溶解度
• 电荷性质 • 吸附性质
• 生物亲和力
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(2) 组织捣碎器法： （大量样品）
用捣碎器(转速8000-10000r/m)处理30-45s可将植物 和动物细胞完全破碎。如用其破碎酵母菌和细菌的细胞 时，须加入石英砂才有效。
在捣碎期间必须保持低温，捣碎的时间不易太长 ，以防温度升高引起有效成分变性。现在多用细胞破 碎仪。
效果：作用强烈，但活性 物质易受破坏
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生物大分子 的提取与制备
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引
言
❖ 生物化学研究的三个主要发展阶段：
• 叙述生物化学阶段（1770～1903 年）。又称为静态或形态生物化 学，研究内容以分析生物体内物质的化学组成、性质和含量为主 。
• 动态生物化学阶段（1903～1950 年）。又称为生理化学。主要研 究生物体内组成物质的化学变化及相互转变。
注意事项
基本原则：防止生物分子变性、降解 1．控制适当的pH 2．控制低温 3．注意提取过程中的溶液环境 4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基
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第一节：生物材料的选择
选择生物材料的原则：有效成分含量多，稳定性好；来源丰富，保
持新鲜；提取方法简单；有综合利用价值等。
生物材料一般可以分为两大类：天然生物材料和人工生物材料 。
课程要求
平时成绩占30%，包括考勤、课前提问10 分；要求每位同学准备笔记本，记好每堂课 的笔记，占20分。
期末考试占到70%，其中包括名词解释， 填空，简答题，分析及其叙述题
借阅相关的书籍资料进行预习以及复习， 奠定好基础。
课程讲述以专题的形式，涉及相关的实验 技术以及生物化学与分子生物学相关技术的 发展。
细胞破碎方法及其原理
机械破碎 物理破碎 化学破碎 酶促破碎
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通过机械运动产生的剪切力， 使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用，使组 织、细胞的外层结构破坏，而使 细胞破碎。
通过各种化学试剂对细胞膜的作 用，而使细胞破碎
通过细胞本身的酶系或外加酶 制剂的催化作用，使细胞外层 结构受到破坏，而达到细胞破 碎
– 分子生物学研究技术：基因重组、分子杂交、PCR与反转 录、核酸测序、免疫技术、生物芯片等等。
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生物化学研究技术方法
• 研究技术的选择：？？？
– 实验的目的：定性分析与定量分析；
– 分离或分析物的物理化学性质；
– 研究技术的精确性、准确性及检测限； – 研究成本； – 潜在的风险与危害。
种子须泡胀或粉碎才可使用。
含油脂较多的也要进行脱脂处理。
：选用黄化苗（生长7－10天小麦，水稻），防止叶绿 体DNA的干扰
：根据实验目的选用生长幼嫩组织为好。 保存：冷冻采样后尽快放于－4℃――20℃冰箱内。
DNA,RNA 采样后，N2速冻，至－70℃冰箱。对RNA样，如 不立即使用，冷冻保存尤为重要。
捣碎法
研磨法 匀浆法
超声法
温度差破碎法
压力差破碎法
有机溶剂： 表面活性剂： 酸碱
自溶法
外加酶制剂法
1. 机械破碎：
(1) 研磨法（小量样品） 剪碎的动物组织如鼠肝、兔肝等置研钵中，用研磨棒研
碎。为了提高研磨效果，可加入一定量的石英砂。用匀浆器 处理，也能破碎动物细胞。此法较温和，适宜实验室使用。
但加石英砂时，要注意其对有效成分的吸附作用。如 系大规模生产时，可用电动研磨法。细菌和植物组织的细 胞破碎均可用此法。
14. RNAi
15. 转基因动物
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生物大分子相互作用分析:
• 生化反应过程实际上是生物分子间的相互作
特点：成本低，反应激烈，不具选择性。 时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超过50%；
用过程。生物大分子间的相互作用是它们的 来源广泛、价格低廉、操作安全等。
分离生化组分（细胞器和生物分子）； ②沉淀不用脱盐，过滤比较容易（如有必要，可用透析袋脱有机溶剂）。 无论表面活性剂是阴离子、阳离子还是非离子型，都是两性的，既能和水作用也能和脂作用， 收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有效成分；
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生物分子的结构与功能分析：
1. 蛋白质结构分析
2. 酶活力检测
3. 蛋白质组学分析
4. DNA序列分析
5. 聚合酶链反应（PCR）6. 分子杂交
7. 基因克隆8. 基因组构建9. cDNA构建
10. 筛选11. 报告基因检测12. 基因芯片
13. 基因敲除
➢ 核酸是遗传信息的携带者，在生物体中指导各种蛋 白质的合成。
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生物化学分离方法与一般的化学分离方法相比，有下列
几个特点： • 生物材料组成非常复杂。其中包括数百种甚至数千种化
合物，并且在分离过程中，这些化合物仍在发生代谢 变化，如蛋白质和核酸的水解。
有些化合物的含量极微，如激素等。 许多具有生物活性的物质一旦离开活体，很易变 变性破坏，因此常选用比较温和的条件进行制备。
• 功能或分子生物化学阶段（1950 年至今）。研究生命的本质和奥秘： 运动、神经、内分泌、生长、发育、繁殖等的分子机理 。
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生物化学研究技术方法
❖ 生物化学研究的方法：
– 观察：生命现象
– 分离：未知蛋白组分，新基因片段，新的次生代谢物。 （抽提、过 滤、离心、色谱）
立了一系列研究核酸及蛋白质相互作用的技 确定要制备的生物大分子的目的和要求，是进行科研、开发还是要发现新的物质。
盐析的发生在于盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子之 间相互聚集并从溶液中析出。 其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性和对各种化学试剂的稳定性。
脂溶性的有机溶剂（丙酮，乙醚）中脱脂；采用快速加热 （50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后 凝聚成油块而被除去。
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1、动物组织
• 保存：对预处理好的材料，若不立即进行实验，应冷冻 保存。
a.冰冻：剥去脂肪和筋皮等结缔组织，短期保存：－
10℃的冰箱内； 长期保存：－70℃低温冰箱内。
– 分析：
• 结构与性质（序列分析，X-射线晶体衍射，核磁共振 ，波谱，质谱等）
• 功能（实验设计与方法）
• 代谢及其细胞调控
• 改造及利用
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生物化学研究技术方法
❖经典的研究步骤：
– 分离生化组分（细胞器 和生物分子）；
– 分析生化组分的结构；
生命现象
分离
改造利用
功能基础。随着分子生物学研究的进展，建 对疏水性物质具有很强的亲和力，能结合并溶解磷脂， 破坏内膜的磷脂双分子层，使某些胞内物质释放出来。
选择适宜的溶剂，使蛋白质等杂质形成沉淀而与核酸分离，这种方法称为选择性溶剂沉淀法 。 超声波破碎的有效能量利用率极低 采用快速加热（50℃左右），快速冷却的方法，使溶化的油滴冷却后凝聚成油块而被除去。 但在高盐溶液中，温度的升高有时反而下降。
生物材料一般是指在自然界易采集的、目的物含量较高的生物个 体、器官或组织。
人工生物材料又分为三种： 1、 新品种材料
2、组织培养材料 3、生物产品与生物制品材料
2022/9/24
要了解的生物大分子的物理、化学性质主要有：
在水和各种有机溶剂中的溶解性。 在不同温度、pH值和各种缓冲液中生物大分子 的稳定
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1.动物组织： 选材：必须选择有效成分含量丰富且易分离的脏器组
织为原材料。单酯酶，从含量看，虽然在胰脏、肝脏 和脾脏中较丰如磷酸富，但是因其与磷酸二酯酶共存 ，进行提纯时，这两种酶很难分开。所以实践中常选 用含磷酸单酯酶少，但几乎不含磷酸二酯酶的前列腺 作材料。
脱脂：脏器中含量较高的脂肪，容易氧化酸败，导致 原料变质影响纯度操作和制品的率。 常用的脱脂方法有：人工剥去脏器外的脂肪组织；浸泡在
b.干燥：对于像脑垂体一类小组织，可置丙酮液中脱 水，干燥后磨粉储存备用；对于含耐高温有效成分（ 如：肝素）的肠粘膜，可在沸水蒸煮处理，烘干后能 长期保存。
冰箱的除霜循环，可能对細胞造成伤害，要特別小心。 解冻時要越快越好，但避免局部過熱。
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2.植物材料：
选材：注意植物品种和生长发育状况不同，其中所 含生物大分子的量变化很大，另外与季节性关系密切。
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3 、微生物
为制备生命大分子物质的主要材料之一。
用离心法收集到的上清液， 可用于制备胞外酶和某些辅基等有效成分；
可置低温下短时间贮存。
收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有效成 分；
或制成冻干粉，在4℃保存(数月不会变质)。
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第二节 细胞的破碎
胞外物质——直接提取
胞内物质——破坏细胞壁或细胞膜后提取
细胞破碎的主要方法： 机械破碎 溶胀和自溶 化学处理：如丙酮、氯仿、甲苯、SDS等
生物酶降解
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ22/9/24
细胞破碎技术
破碎方式
机械法
非机械法
固体剪切 作用
液体剪切 作用
干燥 处理
珠磨法 压榨 高
压
研磨
匀
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浆
超 酶溶法 声 破 碎
溶胞 作用
化学法 物理法
操作：低温、短时。
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(3) 超声波法：
借助声波的震动力破碎细胞壁和细胞器的有效 方法。多用于微生物细胞的破碎，一般输出功率 100-200W，破碎时间3—15min。如果在细胞悬浮液中加
石英砂则可缩短时间。 为了防止电器长时间运转产生过多的热量，常采用间
歇处理和降低温度的方法进行。 超声波的细胞破碎效率与细胞种类、浓度和超声波的
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生物材料的破碎和预处理。 分离纯化方案的选择和探索，这是最困难 的过程。 生物大分子制备物的均一性（即纯度）的 鉴定，要求达到一维电泳一条带，二维电 泳一个点，或HPLC和毛细管电泳都是一 个峰。 产物的浓缩，干燥和保存。
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生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
生物组织→ →提取液→ →粗产品→
声频、声能有关。
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超声波破碎的机理：
一般认为在超声波作用下液体发生空化作用（ cavitation),
液体中局部空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲 击波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造成了剪切 力，使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。
– 分析生化组分的功能和代 谢（合成与分解）及其相 互作用。
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生化组分
分析
1、结构与性质 2、功能 3、代谢及其细胞调控
生物化学研究技术方法
• 生物化学研究技术：
– 分离技术：沉淀、吸附、膜分离（过滤、透析等）、离心、层析 、电泳等；
– 分析检测技术：电泳、层析、光谱、质谱、电化学技术、分 子标记等。
生化分离制备几乎都在溶液中进行，影响因素很 多，实验方法经验性较强。
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生物大分子的制备通常可按以下步骤进行：
确定要制备的生物大分子的目的和要求， 是进行科研、开发还是要发现新的物质。 建立相应的可靠的分析测定方法，这是制 备生物大分子的关键。 通过文献调研和预备性实验，掌握生物大 分子目的产物的物理化学性质。
性。 固态时对温度、含水量和冻干时的稳定性。 各种物理性质：如分子的大小、穿膜的能力、带电的
情况、在电场中的行为、离心沉降的表现、在各种凝 胶、树脂等填料中的分配系数。
其他化学性质：如对各种蛋白酶、水解酶的稳定性 和对各种化学试剂的稳定性。
对其他生物分子的特殊亲和力。
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制备生物大分子的分离纯化方法多种多样， 主要是利用它们之间特异性的差异，如分子 的大小、形状、酸碱性、溶解性、溶解度、 极性、电荷和与其他分子的亲和性等。
术。
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生物大分子相互作用分析技术:
1. 凝胶阻滞分析法 2. DNA酶Ⅰ足纹分析法
3. 蛋白质芯片 4. 酵母双杂交系统筛选相互作用蛋白质
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第一章 生物大分子的分离纯化
➢ 蛋白质（酶）、核酸存在于一切生物体中，是非 常重要的生物大分子。
➢ 蛋白质是生物功能的执行者，担负着生物催化、物质 运输、运动、防御、调控及记忆、识别等多种生理功 能；
层析法
电泳法
超离心法
透析和超滤
→结晶
│←前处理→│ ←粗分级→ │ ← 细分级 →│
•材料选择与处理 •细胞破碎（机械破碎、 溶账和自溶、酶解、化学 处理）
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•盐析（硫酸铵盐析）
•等点电沉淀
•有机溶剂沉淀 •离心
依据原理
• 分子大小 • 溶解度
• 电荷性质 • 吸附性质
• 生物亲和力
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(2) 组织捣碎器法： （大量样品）
用捣碎器(转速8000-10000r/m)处理30-45s可将植物 和动物细胞完全破碎。如用其破碎酵母菌和细菌的细胞 时，须加入石英砂才有效。
在捣碎期间必须保持低温，捣碎的时间不易太长 ，以防温度升高引起有效成分变性。现在多用细胞破 碎仪。
效果：作用强烈，但活性 物质易受破坏
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生物大分子 的提取与制备
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引
言
❖ 生物化学研究的三个主要发展阶段：
• 叙述生物化学阶段（1770～1903 年）。又称为静态或形态生物化 学，研究内容以分析生物体内物质的化学组成、性质和含量为主 。
• 动态生物化学阶段（1903～1950 年）。又称为生理化学。主要研 究生物体内组成物质的化学变化及相互转变。
注意事项
基本原则：防止生物分子变性、降解 1．控制适当的pH 2．控制低温 3．注意提取过程中的溶液环境 4．防止提纯过程中丟失一些辅助因子或亚基
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第一节：生物材料的选择
选择生物材料的原则：有效成分含量多，稳定性好；来源丰富，保
持新鲜；提取方法简单；有综合利用价值等。
生物材料一般可以分为两大类：天然生物材料和人工生物材料 。
课程要求
平时成绩占30%，包括考勤、课前提问10 分；要求每位同学准备笔记本，记好每堂课 的笔记，占20分。
期末考试占到70%，其中包括名词解释， 填空，简答题，分析及其叙述题
借阅相关的书籍资料进行预习以及复习， 奠定好基础。
课程讲述以专题的形式，涉及相关的实验 技术以及生物化学与分子生物学相关技术的 发展。
细胞破碎方法及其原理
机械破碎 物理破碎 化学破碎 酶促破碎
2022/9/24
通过机械运动产生的剪切力， 使组织、细胞破碎。
通过各种物理因素的作用，使组 织、细胞的外层结构破坏，而使 细胞破碎。
通过各种化学试剂对细胞膜的作 用，而使细胞破碎
通过细胞本身的酶系或外加酶 制剂的催化作用，使细胞外层 结构受到破坏，而达到细胞破 碎
– 分子生物学研究技术：基因重组、分子杂交、PCR与反转 录、核酸测序、免疫技术、生物芯片等等。
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6
生物化学研究技术方法
• 研究技术的选择：？？？
– 实验的目的：定性分析与定量分析；
– 分离或分析物的物理化学性质；
– 研究技术的精确性、准确性及检测限； – 研究成本； – 潜在的风险与危害。
种子须泡胀或粉碎才可使用。
含油脂较多的也要进行脱脂处理。
：选用黄化苗（生长7－10天小麦，水稻），防止叶绿 体DNA的干扰
：根据实验目的选用生长幼嫩组织为好。 保存：冷冻采样后尽快放于－4℃――20℃冰箱内。
DNA,RNA 采样后，N2速冻，至－70℃冰箱。对RNA样，如 不立即使用，冷冻保存尤为重要。
捣碎法
研磨法 匀浆法
超声法
温度差破碎法
压力差破碎法
有机溶剂： 表面活性剂： 酸碱
自溶法
外加酶制剂法
1. 机械破碎：
(1) 研磨法（小量样品） 剪碎的动物组织如鼠肝、兔肝等置研钵中，用研磨棒研
碎。为了提高研磨效果，可加入一定量的石英砂。用匀浆器 处理，也能破碎动物细胞。此法较温和，适宜实验室使用。
但加石英砂时，要注意其对有效成分的吸附作用。如 系大规模生产时，可用电动研磨法。细菌和植物组织的细 胞破碎均可用此法。
14. RNAi
15. 转基因动物
2022/9/24
生物大分子相互作用分析:
• 生化反应过程实际上是生物分子间的相互作
特点：成本低，反应激烈，不具选择性。 时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超过50%；
用过程。生物大分子间的相互作用是它们的 来源广泛、价格低廉、操作安全等。
分离生化组分（细胞器和生物分子）； ②沉淀不用脱盐，过滤比较容易（如有必要，可用透析袋脱有机溶剂）。 无论表面活性剂是阴离子、阳离子还是非离子型，都是两性的，既能和水作用也能和脂作用， 收集到的菌体，经破细胞处理后则可从中提取其他有效成分；