金银花不同花期总黄酮含量的测定

金银花不同花期总黄酮含量的测定
摘要采用芦丁比色法对宁夏引种金银花不同花期(金花、银花、白蕾、绿蕾)中的总黄酮的含量进行了测定。

结果表明,银花中总黄酮含量最高,达到 3.433%,而绿蕾中含量最低,为2.539%,金花中含量为2.988%,白蕾中含量为2.621%。

关键词金银花;花期;总黄酮;含量;测定
金银花(Honeysuckle)为忍冬科多年生半常绿缠绕植物忍冬的花蕾及初开的花,又名忍冬花、银花、双花等[1]。

金银花在我国栽培历史悠久,应用范围广,目前已在我国医药、工业、农业、畜牧生产和园林绿化等各个领域广泛应用[2-4]。

金银花的茎、叶、花、果、根均可入药。

金银花性寒味甘,清热解毒,对治疗上呼吸道感染、流行性感冒、扁桃体炎、急性乳腺炎、急性结膜炎、大叶性肺炎等有特效。

金银花也是外科药,其对痈疽疗疮、梅毒、丹毒及杆菌性痢疾疗效良好。

用金银花泡茶,可预防中暑、感冒及肠道传染病,同时还有降低血脂、预防冠心病的作用[5]。

金银花中黄酮类化合物种类丰富,如忍冬苷、忍冬黄素、木犀草素及木犀草素-7-葡萄糖苷、异绿原酸、绿原酸等。

有学者从金银花正丁醇萃取物中分离得到4个黄酮类化合物,分别鉴定为木犀草素-3-0-α-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-0-β-D-半乳糖苷、槲皮素-7-0-β-D-葡萄糖苷和金丝桃苷,从金银花氯仿萃取物中又分得5羟基-3′,4′,7-三甲氧基黄酮[6]。

现代医学研究表明,黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量,使冠脉、脑血管流量增加,抗心律、软化血管和降血糖、血脂等作用;同时它还是一种天然的抗氧化剂,具有清除人体中超氧离子自由基抗衰老、增加机体免疫力的生理活性作用[2]。

此外,其还具有抗溃疡、解痉、抗炎及降脂等系列的生物活性。

研究表明,黄酮类是金银花抑菌有效成分之一,可以作为综合分析该类药材的质量的指标[7]。

1材料与方法
1.1供试仪器及试剂
722紫外-可见分光光度计,索氏提取器,自动控温水浴箱,电子分析天平SL-202型,铁架台,烧杯,量筒,移液管,容量瓶,吸耳球,圆底烧瓶,漏斗,玻璃棒,试纸;乙醇,硝酸铝,亚硝酸钠,氢氧化钠。

1.2试验材料
金银花采自宁夏合木生物技术开发有限公司实验基地,所采部位分别为金花、银花、绿蕾、白蕾。

将所采样品放入恒温箱中,在80 ℃时烘4 h,至恒重。

取出后自然阴干。

再将其研碎,过滤后放入烧杯中,备用。

1.3测定内容及方法
1.3.1测定波长的选择。

将标准品溶液和供试溶液在400～620 nm进行扫描,其均在510 nm处有最大吸收值,故检测波长为510 nm。

1.3.2标准曲线的建立。

精密称取120 ℃干燥芦丁标准品9 mg,加乙醇于水浴上微热,冷却后,定容至50 mL容量瓶中,摇匀,制成浓度为0.18 mg/mL的标准品溶液。

分别取标准品溶液0、0.5、1.0、
2.0、
3.0、
4.0 mL于10.0 mL容量瓶中,加亚硝酸钠(5%)0.4 mL,放置6 min后,加硝酸铝(10%)0.4 mL,放置6 min,再加4%的氢氧化钠4 mL,加水至刻度,摇匀,放置15 min,以空白作对照于510 nm波长下进行比色测定。

1.3.3供试品溶液的制备。

将金银花不同花期样品(金花、银花、绿蕾、白蕾)研磨至粉末状,精密称取粉末各 1.0 g,放于索氏提取器中,加入60.0 mL乙醇,在80～85 ℃回流提取3 h,将乙醇提取液转移到100 mL容量瓶中,用乙醇定容至刻度,作为供试品溶液,待测。

试验设3次重复。

1.3.4金银花中总黄酮含量的测定。

精密吸取供试品溶液
2.0 mL,置于10.0 mL 容量瓶中,参照1.
3.2中方法测定,记录数据,以吸光值带入标准曲线,代入以下公式计算结果。

W=×100%
式中,y为吸光度;M为金银花样品重量,单位为mg;W为金银花中总黄酮含量;500为稀释倍数。

2结果与分析
2.1标准曲线的建立
以标准溶液浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,得标准曲线图见图1,标准回归直线方程为:y=10.15x+0.001,R2=0.999 9。

表明标准溶液浓度与吸光度有良好的线性关系。

2.2金银花中总黄酮含量的测定
金银花不同花期(金花、银花、绿蕾、白蕾)中总黄酮含量的测定结果见表1。

从表1可以看出,金银花不同花期中总黄酮含量差异明显。

以银花中总黄酮含量最高,为 3.433%;金花次之,为 2.988%;其次是白蕾,为 2.621%;绿蕾中最低,为2.539%。

研究表明,不同花期的金银花中活性物质的含量不同,用其加工保健品、药品等,需注意采收时期。

3结论与讨论
黄酮类化合物的母核为2-苯基色原酮,它常有许多羟基取代的不同衍生物组成,在试验配制溶液过程中,当有铝盐存在时,铝在芦丁的4-酮基核5-羟基位置配位络合显色,成为分光光度测定黄酮类化合物的基础。

分析结果表明,银花中黄酮含量最高,达到 3.433%,而绿蕾中含量最低,为2.539%,金花中含量为2.988%,白蕾含量为2.621%。

生物合成途径的研究结果表明,植物体内黄酮(下转第116页)
类化合物的形成,是由1分子桂皮酰辅酶A(苯丙氨酸经桂皮酸途径产生)与3分子丙二酸单酰辅酶A(醋酸—丙二酸途径产生)先缩合生成查耳酮,再由查耳酮在异构化酶的作用下异构化形成二氢黄酮,而查耳酮和二氢黄酮则是黄酮类化合物生物合成的重要中间体,两者在各种酶的催化下进一步转化衍生出各种结构类型的黄酮化合物。

该研究测定表明,不同花期中总黄酮含量有差异,说明在不同花期中总黄酮合成途径和速度不同。

在绿蕾中,合成速度较快,合成较多;银花中,合成速度较慢。

黄酮是金银花清热解毒、抗炎灭菌作用的主要药用成分之一。

之前各种金银花的试验主要是对绿原酸的研究,本试验测定了金银花不同花期中总黄酮的含量,对总黄酮在金银花不同花期中的分布规律有了初步的了解。

本试验采用比色法测定总黄酮含量,其他成分干扰较大,因此若准确测定其含量,需不断探索,使杂质的干扰作用消除到最小程度。

4参考文献
[1] 樊庆银,刘旭.金银花及其同属植物的研究近况[J].黑龙江中医药,2000(3):57.
[2] 丁利君,吴振辉,蔡创海,等.金银花中黄酮类物质最佳提取工艺的研究[J].食品科学,2002,23(2):62-66.
[3] 毛启政.西部开发的先锋高效植物——金银花[J].湖北林业科技,2002(3):58.
[4] 李庆荣.金银花的开发前景广阔[J].计划与市场探索,1995(12):47.
[5] 黄霞,樊骏,樊军龙,等.金银花的经济价值与栽培技术[J].陕西林业科技,2004(4):103-105.
[6] 石钺,石任兵,陆蕴如.我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J].中国药学杂志,1999,34(11):724-727.
[7] 邢俊波,李会军,李萍,等.中药金银花质量标准研究——总黄酮的含量测
定[J].中国现代应用药学杂志,2002,19(3):169-170.。