游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响

Ｍ２ 型极化基因表达，ＥＬＩＳＡ 检测肝细胞培养上清细胞因子水平。 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测巨噬细胞 Ｔｏｌｌ 样受体 ４（ＴＬＲ４） ／ 核因子 － κＢ（ＮＦ － κＢ）
信号通路相关蛋白表达。 计量资料两组间比较采用独立样本 ｔ 检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 Ｔｕｋｅｙ 检验。
ＣＭ － ＦＦＡ显著增加巨噬细胞 Ｍ１ 型基因诱生型一氧化氮合酶 ２、ＴＮＦα 和 ＩＬ － ６ ｍＲＮＡ 表达（ Ｐ 值均 ＜ ０． ０５） ，降低 Ｍ２ 型基因 ＩＬ － １０
ｍＲＮＡ 表达水平（ Ｐ ＜ ０． ０５） 。 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ 检测结果显示，ＣＭ － ＦＦＡ 显著增加巨噬细胞 ＴＬＲ４、磷酸化 ＮＦ － κＢｐ６５ 和磷酸化 ＮＦ － κＢ
Ｐ 值均 ＜ ０． ０５） ，并降低脂质分解基因脂酰辅酶 Ａ 氧化酶 １ 和肉碱棕榈酰转移酶 １Ａ 的 ｍＲＮＡ 表达（ ｔ 值分别为 １４． ３０、３． ３６，Ｐ 值
均 ＜ ０． ０５） 。ＦＦＡ 诱导肝细胞培养上清炎性细胞因子 ＩＬ － ６、ＩＬ － １β 和 ＴＮＦα 的水平明显增加（ Ｐ 值均 ＜ ０． ０５ ） 。 相比 ＣＭ － ＮＣ，
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Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｆａｔｔｙ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ
， ， （ ， ， ， ， ＬＩ Ｘｉａｏｙｕｎ ＮＩ Ｘｉｘｉ ＨＵＡ Ｊｉｎｇ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ Ｒｅｎｊｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ， ） Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００００１ Ｃｈｉｎａ
李晓芸，等． 游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响
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游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响
李晓芸，倪茜茜，华 静
上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科，上海２００００１
摘要：目的 方法 探讨游离脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性对巨噬细胞极化的影响及可能机制。
结论 抑制因子表达水平（ ｔ 值分别为 ２． ８８、３． ６９、３． ５４，Ｐ 值均 ＜ ０． ０５） 。
ＦＦＡ 诱导的肝细胞脂肪变性和炎症反应可促进巨噬细胞
Ｍ１ 型极化，启动和触发非酒精性脂肪性肝病发生发展。
关键词：非酒精性脂肪性肝病； 巨噬细胞； 脂肪酸类 中图分类号：Ｒ５７５． ５ 文献标志码：Ａ 文章编号： （ ） １００１ － ５２５６ ２０２１ ０２ － ０３８５ － ０５
： Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｆａｔｔｙ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ
， ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｉｍａｒｙ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｏｆ Ｃ５７ＢＬ ／ ６ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ｉｎ ｓｉｔｕ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｈｅｐａ （ ） （ ） （ ） ｔｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ＮＣ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｍｉｘｅｄ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ＦＦＡ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ． Ａ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ ＣＭ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ
结果 与 ＮＣ 组相比，ＦＦＡ 孵育诱导肝细胞内大量脂滴沉积，细胞内甘油三酯和总胆固醇含量明显升高（ ｔ 值分别为 １５． ６５、３． ４９，
Ｐ 值均 ＜ ０． ０５） 。ＦＦＡ 显著上调肝细胞脂质合成基因固醇调节元件结合蛋白 １Ｃ 和脂肪酸合酶的 ｍＲＮＡ 表达（ ｔ 值分别为 ２． ８９、２． ８２，
ｆｏｒ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ＲＡＷ２６４． ７ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ． Ｏｉｌ ｒｅｄ Ｏ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｌｉｐｉｄ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｅｐ
； ａｔｏｃｙｔｅｓ ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ Ｍ１ ／ Ｍ２ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｍａｒｋ ； ； ｅｒｓ ＥＬＩＳＡ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ （ ） （ ） ｉｎ ｔｈｅ Ｔｏｌｌ － ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ ＴＬＲ４ ／ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ － ｋａｐｐａ Ｂ ＮＦ － κＢ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ． Ｔｈｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｔ － ｔｅｓｔ ｗａｓ ； ， ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ａ ｏｎｅ － ｗａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｔｕｋｅｙ ， ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＮＣ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ＦＦＡ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｔｈｅ ｄｅｐｏｓｉ （ ， ｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｓｓｉｖｅ ｌｉｐｉｄ ｄｒｏｐｌｅｔｓ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｔ ＝ １５． ６５ ａｎｄ ３． ４９ ｂｏｔｈ Ｐ ＜ ） ， （ ， ０ ０５ ． Ｂｅｓｉｄｅｓ ＦＦＡ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｇｅｎｅｓ ＳＲＥＢＰ１Ｃ ａｎｄ ＦＡＳＮ ｔ ＝ ２． ８９ ａｎｄ ２． ８２ ） （ ， ｂｏｔｈ Ｐ ＜ ０． ０５ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ＡＣＯＸ１ ａｎｄ ＣＰＴ１Ａ ｔ ＝ １４． ３０ ａｎｄ ３． ３６ ｂｏｔｈ Ｐ ＜ ） （ ）， ０ ０５ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ． ＦＦＡ ａｌｓｏ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ － ６ ＩＬ － ６ ｉｎｔｅｒｌｅｕ ， （ ） （ ） ， ｋｉｎ － １β ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ － α ＴＮＦ － α ｉｎ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ａｌｌ Ｐ ＜ ０． ０５ ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＣＭ － ＮＣ ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ＣＭ － ＦＦＡ ， ， （ ） ｇｒｏｕｐ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｍ１ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉＮＯＳ２ ＴＮＦ － α ａｎｄ ＩＬ － ６ ａｌｌ Ｐ ＜ ０． ０５ ａｎｄ ａ ｓｉｇ （ ） ， ｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｍ２ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｍａｒｋｅｒ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ － １０ Ｐ ＜ ０． ０５ ． Ｍｏｒｅｏｖｅｒ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ， ， （ ， ， ＣＭ － ＦＦＡ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＬＲ４ ｐ － ＮＦ － κＢｐ６５ ａｎｄ ｐ － ＩκＢα ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ ｔ ＝ ��
胶原酶原位灌注法分离
Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠原代肝细胞，将细胞分为对照（ ＮＣ） 组和混合游离脂肪酸（ ＦＦＡ） 处理组，并制备肝细胞条件培养液（ ＣＭ） ，以 ＣＭ 干预
巨噬细胞株 ＲＡＷ２６４． ７。 油红 Ｏ 染色检测肝细胞内脂质沉积情况，Ｒｅａｌ － ｔｉｍｅ ＰＣＲ 检测肝细胞脂质代谢相关基因和巨噬细胞 Ｍ１ ／