高效液相色谱法测定蔬菜中四种农药的残留量

高效液相色谱法测定蔬菜中
四种农药的残留量
张玉芬1 ,齐景凯2 ,韩娜仁花1 ,何瑞玲3
( 11内蒙古民族大学分析测试中心,内蒙古通辽028043;
21内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028043;
31内蒙古民族大学医学院,内蒙古通辽028043 )
摘要:利用高效液相色谱同时测定了蔬菜中痕量灭多威、水胺硫磷、2 , 4 -滴和噻嗪酮的残留量。

采用超声波辅助提取样品,提取液在XDB - C18柱上分离, 以70 %甲醇+ 30 %水为流动相,以保留时间定性确证,峰面积外标法进行定量。

结果表明, 4种农药的浓度与其峰面积在50～350μg /L 的范围内呈良好的线性关系, 检出限为010028～0102μg / g,样品的加标平均回收率为96133 %～105124 % ,相对标准偏差2113 %～4182 %。

此方法简便、快速、灵敏,适用于蔬菜中农药的多残留分析。

关键词:高效液相色谱法,蔬菜,农药残留
A na ly s is o f fo u r k i n d s o f p e s tic id e s in ve g e ta b le
b y h ig h p e rfo r m a n
c e liqu i
d c h rom a to g rap h y
ZHA NG Y u- fen1 , Q I J i n g- ka i2, HA N NA Ren -hua2 , HE Ru i- l i n g3
( 11A n a l ysis Cen t e r of Inne r M ong o l ia U n i ve r sity of N a t iona l itie s, Tongliao 028043 , Ch i na;
21L ife Sc i ence Co l lege of I nne r M ong o l ia U n i ve r sity of N a t i o na l itie s1, Tongliao 028043 , Ch i na;
31M ed i ca l Co l lege of Inne r M ong o l ia U n i ve r sity of N a t iona l itie s, Tongliao 028043 , Ch i na)
A b s tra c t: A h ig h p e r fo r m a n c e liq u id c h r om a to g ra p h y m e th o d fo r th e d e te r m in a ti o n o f m e th o m y l, is o c a rb o p h o s, 2, 4 - D a n d b up r o f e z i n in ve g e ta b le w a s d e ve lop e d1Th e s am p le s w e re e x tra c te d w ith a c e to n e u s i n g u l t ra s o u n d a s s is te d e x t ra c ti o n1C h r o m a to g ra p h ic s e p a ra ti o n w a s p e rfo r m e d o n a XD
B - C18 c o lu m n u s in g70 % m e th a n o l + 30 % w a te r a s liq u id p h a g e 1Th e re s u l t s d em o n s tra te d th a t th e lin e a r r a n g e s ra n g e d from 50μg /L to 350μg /L a n d
d e te c tio n l i m its ra n g e d fro m 010028μg / g to 0102μg / g1 Th e a ve r a g e re c o ve r y ra te fo r fo u r a n a l y tic a l p e s ti c i d e s r a n g e d fro m 96133 % to 105124 % w ith re la tive s ta n d a rd d e v i a ti o n ra n g e d fro m 2113 % to 4182 % 1Th e m e th o d w a s s i m p le , ra p id , a c c u r a te a n d s u ita b le fo r s i m u lta n e o u s d e te r m in a tio n o f th e s e p e s tic id e s i n ve g e ta b le s 1
Ke y w o rd s: h ig h p e rfo r m a n c e liq u id c h r om a to g ra p h y; ve g e ta b le; p e s ti c id e re s id u e
中图分类号: TS20715 + 3 文献标识码: A 文章编号: 1002 - 0306 ( 2008 )011 - 0264 - 03
长期大量地使用农药,在得到效益的同时,也产生了广泛的副作用。

大量残留在蔬菜上的农药不仅对人体产生直接毒害,引起急性中毒或导致农药在人体内的积累和富集,从而引发各种疾病,而且还导
[ 1 ～3 ]致有害物质对生态环境造成严重的污染与危害。

因此, 如何切实有效地控制、监测农药污染, 成为人
们最为关心的问题, 也引起了政府的高度重视。

我
国的农药残留分析技术始于20 世纪50 年代, 近年来取得了重要进展。

在试剂速测误差较大, 社会农药残留检测点纷纷筹建的情况下, 建立行之有效的农药多残留检测方法显得尤为迫切。

在国内未曾见
收稿日期: 2008 - 04 - 03
作者简介:张玉芬( 1972 - ),女,讲师,从事农药残留分析工作。

基金项目:内蒙古教育厅项目( AJ02080 ) ; 内蒙古民族大学科学研究项目( Y B0725 ) 。

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264 2008年第11期
分析检测食品工业科技
Vo l.29 , No. 11 , 2008
使用高效液相色谱对灭多威、水胺硫磷、2 , 4 - 滴和噻嗪酮 4 种农药残留量进行同时测定的报道, 本文本着指导、适用、简便、准确、快速的思想,对蔬菜中这4种农药残留量同时测定的高效液相色谱法进行了探索,实现了农药的多残留测定, 取得了较好的效果。

运用本法进行检测分析, 耗时短, 回收率高, 检测限低。

1 材料与方法
1 11 材料与仪器
甲醇色谱纯, flish e r公司; 氯化钠、无水硫酸钠分析纯;农药标准品灭多威、水胺硫磷、2 , 4 - 滴和噻嗪酮,由国家粮食局科学研究院、国家标准物质研究中心、四川粮食贮藏科学研究所、中华人民共和国卫生检疫所提供, 含量≥9914 % ; 二氯甲烷, 丙酮,活性碳。

日本岛津LC - 6A 高效液相色谱仪,岛津紫外可见检测器,色谱柱XDB - C18 ,数据处理装臵N 3000 ,高速组织捣碎机, 过滤器, 超声波清洗器, 冷凝旋转蒸发仪,恒温水浴箱, 7125 微量进样器。

1 1
2 色谱分析条件
色谱柱: XDB - C18 ; 柱温: 室温; 流动相: 甲醇∶水= 70 ∶30; 流速: 018mL /m in; 进样量: 5μL ; 检测波长: 240 nm。

1 13 样品制备
称取蔬菜样品90 g,切碎混匀后,加入15 g N aC l + 200mL 丙酮+ 50m L 二氯甲烷,匀浆1m in 后,臵于超声波清洗仪中振荡, 使混合均匀, 之后经过滤器过滤,将滤液臵于分液漏斗中静臵分层, 取上清液, 倾入500m L 烧杯中,加入活性炭脱色120m in ,脱色后的液体中再加入40 g 无水硫酸钠, 不断震荡, 静臵15m in 后,然后过装有无水硫酸钠的漏斗,以少许二氯甲烷洗涤无水硫酸钠相,合并滤液,用冷凝旋转蒸发仪在30～40 ℃下将洗脱液浓缩近干,取出浓缩液在
2 , 4 - 滴和噻嗪酮的最大吸收波长分别是225、254、225、210 nm。

综合 4 种组分,最终选择紫外吸收检测波长为240 nm。

21112 流动相的选择参照文献[ 4～6 ] , 使用甲醇- 水作流动相,当甲醇含量过高时,部分峰重叠;甲醇含量过低时,各组分的保留时间太长且灵敏度低,最后选择甲醇∶水(V ∶V ) = 70 ∶30 作为流动相。

212 定性分析
在选定的色谱条件下, 4 种农药可获得良好的分离和适宜的保留时间,各组分均在11m in 内出峰,见图 1 ,根据峰的保留时间进行定性。

图1 标准品的色谱图
2 1
3 线性关系及检出限
将 4 种农药标准储备液配制成浓度为50、100、150、250、350μg /L 的系列混合溶液。

取以上系列标准品混合溶液各5μL 进样分析,每标样进 5 针, 以标准品峰面积对质量浓度进行线性回归, 其中标样的浓度为横坐标,标样的峰面积的平均值为纵坐标,绘制标准曲线,得到 4 种标准品的回归方程和相关系数见表1。

2 14 实际样品分析
对市售的蔬菜样品进行了测定,其中西红柿 5 份、菜花 6 份、油菜7 份、菠菜 5 份、白菜 5 份,黄瓜 6 份、甘蓝5份,只有西红柿中含有待测农药2, 4 - 滴和噻嗪酮,见图2。

西红柿中2, 4 - 滴残留量是01045μg / g,符
合国家标准( G B 15194-94 ≤012μg / g[ 7 ] ) ; 噻嗪酮的残
留量是0118μg / g, 符合国家标准( G B 14970 - 94 ≤013μg / g) [ 7 ] 。

215 回收率与精密度
为了进一步验证方法的可靠性, 进行了回收率实验。

在西红柿样品中分别取 5 份, 加入已知量的灭多威、水胺硫磷、2 , 4 - 滴和噻嗪酮的标准溶液, 按
室温下挥干, 用甲醇溶解, 并准确定容到
0145μm的针头过滤器过滤后,待分析。

2 结果与讨论
211 色谱条件的优化
1m L , 用
21111检测波长的选择分别将灭多威、水胺硫磷、
2 , 4 - 滴和噻嗪酮的标准液于紫外- 可见分光光度计
中进行光谱扫描,在甲醇体系中,灭多威、水胺硫磷、给定的色谱条件重复测定 5 次, 色谱图见图 3 , 结果
表14种农药的回归方程及检出限
线性范围(μg /L )最低检出限( S /N ,μg / g)农药种类回归方程相关性
y = 64197 x + 22502143 y = 1172 x + 2769139 y = 110131x + 6851172 y = 641192 x + 13456154 01991
01994
01997
01996
010028
0102
0101
01003
灭多威水胺硫磷2 , 4 -滴噻嗪酮
50～350
50～350
50～350
50～350
表2四种农药的回收率和相对标准偏差实验结果( n = 5 )
被测组分原有值(μg / g)加入值(μg / g)测得值(μg /mL )平均回收率( % )R S D ( % )
灭多威水胺硫磷2, 4 - 滴噻嗪酮
01045
0118
0103
0103
0103
0103
010300
010289
010737
01221
100100
96133
98127
105124
4182
4166
3141
2113
2008年第11期
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分析检测
食品工业科技
Sc i ence and Techno l o gy of Food I ndu s try
多威 、2 , 4 - 滴 、水 胺 硫 磷 和 噻 嗪 酮 4 种 农 药 的 残 留
量 。

从 4 种农药的回 收 率 、变异 系数 和 最小 检 出限
看出 , 该方法的准确度和精密度很高 , 且简便省 时 、 操作简单 、便于推广应用 ,适用于蔬菜与原粮中灭多 威 、2 , 4 - 滴 、水 胺 硫 磷 和 噻 嗪 酮 4 种 农 药 的 多 残留测定 ,完全满足现代社会所需要的简便 、快速 、 灵敏 、准确的农药多残留分析方法 。

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图 2 西红柿样品图
见表 2。

由表 2 可知 , 4 种农药在西红柿中所测得的
相对标准偏差均小于 5 % ,由此可见该方法的准确度 和精密度很高 。

图 3 样品中添加标准品的色谱图
3 结论
本实验采用高效液相色谱同时测定了蔬菜中灭
(上接第 239 页 )
为 01118m g / kg; 环 丙 沙 星 的 检 出 限 为 010105m g / k g, 定 量 限 为 010350m g / k g ; 恩 诺 沙 星 的 检 出 限 为
010124m g / k g,定量限为 010368m g / k g 。

2 15 残留及消除规律
上述三种药物按 11217 中方法饲喂后 ,其在鲫鱼 肌肉中的残留量检测结果如图 2 所示 。

素和恩诺沙星的残留量可降至最大残留限量以下 , 环丙沙星的残留量仍略高于最大残留限量 。

目前我 国还没有对四环素类和氟喹诺酮类在水产动物体内 的休药期作出明确的规定 , 但一般药物规定为 20 ℃
[ 8 ]
的水温下饲喂 20 d ,本文的结果在一定程度上证实 农业部的规定是合理的 。

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[ 8 ]中华人们共和国农业部公告第 235 号 1 兽药休药期规定 [ S ] 120031
图 2 土霉素 、环丙沙星和恩诺沙星在鲫鱼肌肉中的残留 从图 2 可以看出 ,经过 5 d 的含药饲喂 , 3 种药物
在鲫鱼肌肉内浓度均在停药后第 5 d 达到最大值 ,此
时 土 霉 素 残 留 为 0135
μg /mL , 环 丙 沙 星 残 留 为 0118μg /mL ,恩诺沙星残留为 0120μg /mL ; 此后不断降
低 ,在停药后 第 15d 时 土 霉 素 在 鲫 鱼 肌 肉 内 残 留 为 011μg /mL (低于 M RL s) [ 6 ]
,环丙沙星残留为 0103μg /mL
(高 于 M RL s ) , 恩 诺 沙 星 残 留 为 M RL s)
[ 7 ]。

3 结论
0101μg /mL (低 于 本文采用高效液相色谱法测定鲫鱼肌肉中土霉 素 、环丙沙星和恩诺沙星的残留 ,考察这 3 种药物在 鲫鱼体重的残留规律 。

结果发现 : 经过 5 d 的给药饲
喂后 , 再 经 25 ℃的 水 温 下 15 d 的 无 药 饲 喂 , 土 霉
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