小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进

小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进
刘庆军;孙永君
【摘要】我们在细胞生物学实验教学中对小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法实验
操作做了一些改进:由传统的取小鼠后腿骨改为取四肢骨,提高了实验材料的利用率；由注射器法收集骨髓细胞改为震荡器法收集骨髓细胞,使收集细胞的实验操作更加
简便、安全,而且大大提高了骨髓细胞的收得率,同时明显增加染色体中期分裂相的
细胞数,由对照组中的每视野中的中期分裂相细胞2～4个提高到5～9个,极大提高了实验教学的效果.
【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2012(026)004
【总页数】2页(P64-65)
【关键词】小鼠;骨髓细胞染色体;标本;改进
【作者】刘庆军;孙永君
【作者单位】山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353;山东轻工业
学院食品与生物工程学院,山东济南250353
【正文语种】中文
【中图分类】Q2-06
小鼠骨髓细胞染色体标本制备是细胞生物学实验教学中一个经典而常规的实验教学项目，染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质
存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果。

染色体是有机体遗传信息的载体，对染色体的研究在生物进化、发育、遗传传和变异中有十分重要的作用。

处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态［1］。

本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗、固定、浸片染色等处理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。

1 实验用品
1.1 器材
解剖板、解剖剪、大小镊子、吸管、离心管、培养皿、量筒、预冷载玻片、酒精灯、普通天平、擦镜纸、HZS－H型恒温水浴箱、TDL－5型离心机、SK－1型振荡混匀器。

1.2 试剂
秋水仙素200 μg/mL、0.075 mol/L KCl低渗液、甲醇乙酸(3∶1)固定液、Giemsa 染液、0.85% 生理盐水、香柏油、香柏油清洗剂(无水乙醇:无水乙醚
=1∶1)
1.3 材料
小白鼠(KM洁净级，约25 g)
2 实验方法［2，3］
2.1 秋水仙素处理
取骨髓前3 h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，每只小鼠注射200 μg/mL浓度的秋水仙素0.4 mL。

2.2 取骨髓收集骨髓细胞
用脱臼法处死小鼠，然后用剪刀剪开四肢骨的皮肤和肌肉，从四肢根部取出腿骨置
于培养皿中，剪去爪，用脱脂棉蘸0.85%生理盐水搓净去除附在骨上的肌肉碎渣。

将腿骨剪碎后移入10 mL离心管中，加入0.075 mol/L KCl低渗液2 mL，放入
振荡混匀器中震荡30 s备用。

2.3 骨髓细胞的低渗处理
将所获得的细胞悬浮液加入0.075 mol/L KCL溶液(经37℃预热)5 mL，将离心管放入37℃水浴中低渗处理30 min。

2.4 固定
低渗处理后，立即加入1 mL新配制且预冷的甲醇乙酸(3∶1)固定液，手动混匀，静置5 min，此为第一次固定。

然后3000 rpm离心8 min，弃去上清液。

沿离
心管壁加入甲醇乙酸(3∶1)固定液5 mL，手动混匀后静置固定20 min进行第二
次固定。

按上述条件再离心，弃去上清液，再往沉淀物中滴加0.3 mL固定液，手动混匀。

2.5 滴片
取事先在冰箱中预冷(－20℃)的载玻片，迅速从约30 cm高处向每个载玻片上滴1～2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，酒精灯火焰上过火2～3次(切勿过热烤干)，风干。

2.6 染色
将制片插入Giemsa工作染液(Giemsa原液用pH6.8磷酸盐缓冲液稀释10倍)中
染色30 min，流水冲洗后风干。

2.7 显微镜检观察
将标本先置于显微镜低倍镜下观察，于显微视野中寻找染色体分散良好的中期分裂相，移至视野中央，然后转换高倍镜和油镜观察。

小鼠染色体数2n=40，形态一
般呈“U”形，都为近端着丝粒染色体。

3 结果与讨论
3.1 小鼠前腿骨与后腿骨骨髓细胞染色体制片比较
由原实验教材中的只取后腿骨，改为取用四肢骨皆可，以提高实验材料的利用率，实验结果与只取后腿骨时并没有很大的差异(表1)。

表1 小鼠前腿骨与后腿骨骨髓细胞染色体制片比较注:上表中显微镜视野放大倍数为40×16取材视野中骨髓细胞数染色体中期分裂相细胞数细胞中期分裂率(%)95 9 9.596 9 9.4后腿骨前腿骨
3.2 小鼠骨髓细胞不同收集方法染色体制片比较
收集骨髓细胞时，采取的方法是将小鼠腿骨用解剖剪剪碎后移入离心管中，再加入0.075 mol/L KCI低渗液，然后用SK-1型震荡混匀器震荡30 s，使骨髓细胞充分游离到低渗液中。

与原实验教材中采用注射器往小鼠腿骨中注射低渗液而收集骨髓细胞的方法比较，使收集细胞的实验操作更加简便、安全，而且大大提高了骨髓细胞的收得率;同时明显增加中期分裂相的细胞数，由对照组中的每视野中的2～4个提高到5～9个中期分裂相细胞，细胞中期分裂相得率也由4% ～6.7%提高到5.6% ～9%(表2)，染色体形态也更容易观察(图1)。

表2 小鼠骨髓细胞不同收集方法染色体制片比较注:上表中显微镜视野放大倍数为40×16收集方法视野中骨髓细胞数染色体中期分裂相细胞数细胞中期分裂相得率(%)90～100 5～9 5.6～950～60 2～4 4～6.7剪碎震荡法注射器法
图1 小鼠骨髓细胞染色体形态(100×10)
参考文献:
［1］辛华.细胞生物学实验［M］.北京:科学出版社，2001.
［2］唐慕湘，张兴华，陈家强，等.小鼠染色体制备方法初探［J］.解剖学研究，2011，33(2):160-161.
［3］李标.浅谈成功制作小鼠骨髓细胞染色体标本方法［J］.科学教育，2008，
14(4):69-70.。