HPLC测定肾药Ⅲ号结肠定位片中芦丁、大黄素和大黄甲素的含量

HPLC测定肾药Ⅲ号结肠定位片中芦丁、大黄素和大黄甲素的
含量
邹浪;王哲;郭晓秋;王勇;王亚琴;杨佳柳
【摘要】OBJECTIVE To establish quality standard for Nephropathy medication Ⅲ colon-specific tablets. METHODS HPLC methods were established for the determination of Rutin, Emodin and Physcione. RESULTS The results of HLPC showed good linear relationships. The detection concentration ranges of Rutin , Emodin and Physcione were
2.7~54.0μg/mL (r2=0.999 9), 1.1-22. 0μg/mL (2 = 0.999 3) and 1.17-21. 94 μg/mL (r2 = 0. 999 2). The average recovery rate were 99.04% (RSD=2.04%, n=6) , 101.21% (RSD= 1.01%, n = 6) and 94.7 (RSD=1.5%, n=6) CONCLUSION The method is simple, accurate and reproducible; it could be applicable in quality control of Nephropathy medication HI colon-specific tablets.%目的建立肾药Ⅲ号结肠定位片的质量标准.方法采用HPLC法测定了肾药Ⅲ号中芦丁、大黄素和大黄素甲醚的含量.结果芦丁、大黄素和大黄素甲醚在一定浓度范围内线性关系良好,芦丁、大黄素和大黄素甲醚线性范围分别为2.7～54.0 μg/mL(r2＝0.999 9)、1.1～22.0 μg/mL(r2＝0.999 3)和1.17～21.94 μg/mL(r2＝0.999 2),平均加样回收率分别为99.04％ (RSD＝2.04％,n＝6)、101.21％(RSD＝1.01％,n＝6)和94.7(RSD＝1.5％,n＝6).结论此方法简单准确,重现性良好,能有效控制肾药Ⅲ号结肠定位片的质量.
【期刊名称】《南京中医药大学学报》
【年(卷),期】2012(028)006
【总页数】3页(P577-579)
【关键词】HPLC;薄层色谱;芦丁;大黄素;大黄素甲醚
【作者】邹浪;王哲;郭晓秋;王勇;王亚琴;杨佳柳
【作者单位】江西中医学院附属医院,江西南昌 330006;江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西南昌 330004;江西中医学院附属医院,江西南昌 330006;江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西南昌 330004;江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西南昌 330004;江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西南昌 330004
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
肾药Ⅲ号由生大黄、槐花、蒲公英、煅牡蛎等中药组成，具有通腑泄浊解毒之功，主要用于慢性肾衰竭湿毒内聚的治疗。

肾药Ⅲ号通过灌肠剂使用，疗效颇佳[1]，但临床上使用不便。

本课题组将其设计为结肠定位片，为了有效控制结肠定位片的质量，本文对结肠定位片中的大黄素、大黄素甲醚和芦丁进行了含量测定。

1 材料
1.1 仪器
高效液相色谱仪（Agilent 1200）：检测器VWD：G1314B（Agilent 1200），quat－pump：G1311A（Agilent 1200），Sartorius BS124S电子分析天平，超声清洗机（江苏昆山）。

1.2 试药
芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所，批号：080－9303；大黄素对照品购
于中国药品生物制品检定所，批号：110756－200110；大黄素甲醚对照品购于中国药品生物制品检定所，批号：110758－200912；槐花，购于江西江中（武宁）中药饮片有限公司，批号：110219；大黄及其它药方中药，购于江西江中（武宁）中药饮片有限公司；甲醇，色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。

2 方法与结果
2.1 芦丁的含量测定[2]
2.1.1 检测波长的选择
《中华人民共和国药典》2010年版[3]采用257 nm作为检测波长，用芦丁对照品溶液在190～400 nm波长范围内扫描，结果发现其在257nm与360 nm处都有最大吸收。

但360nm处检测出的杂质峰少且基线较平稳，故选取360nm作为检测波长。

2.1.2 色谱条件
依利特 HypersilC18（4.6mm×250mm，5μL），流动相：水－甲醇－冰醋酸（40∶57.5∶2.5），柱温：25℃，流速：1.0mL／min，检测波长：360nm，进样量20μL。

见图1。

图1 HPLC色谱图A.芦丁对照品；B.肾药Ⅲ号结肠定位片；C.缺槐花的阴性制剂2.1.3 对照品溶液的制备
精密称定在105℃干燥至恒质量的芦丁对照品适量，加70%甲醇溶解，制成每
1mL含芦丁0.1 mg的芦丁对照品溶液。

2.1.4 供试品溶液的制备
取本品10片研细，精密称定1g，置于100mL容量瓶中，加70%甲醇80mL，超声30min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取1mL续滤液定容于10mL容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度。

用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.5 线性关系考察
配制一系列浓度的芦丁对照品，使每1mL溶液含芦丁54、29.7、18.9、8.1、
2.7μg，各吸取20μL进样，以芦丁浓度（X）为横坐标，色谱峰峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝26.047 X－6.477 4，r2＝0.999 9（n＝6）。

结果表明芦丁浓度在2.7～54.0μg／mL范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.1.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液20μL，分别在0、1、2、4、6、8h进样测定，芦丁含
量的RSD＝1.26%，证明供试品溶液在8h内测定是稳定的。

2.1.7 加样回收率试验
取已知含量的片剂适量研细，精密称取样品6份适量，每份约0.5g，分别精密加
入的芦丁对照品3.0mg，按“2.1.4”供试品溶液制备项下的方法处理，按“2.1.2”项下的色谱条件进行测定。

计算回收率，结果芦丁平均回收率为99.04%，RSD为2.04%。

2.1.8 精密度试验
精密吸取芦丁对照品溶液20μL，连续进样6次，记录峰面积，芦丁含量的RSD
为0.98%，表明仪器的精密度良好。

2.1.9 样品测定
取3 批自制样品（批号：120315、120318、120322），依法测定，计算芦
丁的质量浓度分别为6.80、6.68和5.88mg／g。

2.2 大黄素和大黄素甲醚的含量测定
2.2.1 色谱条件
依利特 Hypersil C18（4.6mm×250mm，5 μL），流动相：甲醇－1%冰醋酸（92∶8），柱温：30℃，流速：1.0mL／min，检测波长：254nm，进样量20
μL。

见图2。

图2 HPLC色谱图A.大黄素对照品；B.大黄素甲醚对照品；C.肾药Ⅲ号结肠定位片；
D.缺大黄的阴性对照
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称定大黄素和大黄素甲醚对照品，加70%甲醇溶解，制成每1mL含大黄素0.1mg和大黄素甲醚0.05mg的溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，研细，精密称定2g，置于100mL容量瓶中，精密加入70%甲醇
80mL，超声处理30 min，放冷，精密称定，定容至刻度，摇匀，滤过，精密量
取1mL续滤液定容于10mL容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察
分别配制一系列浓度的标准液，使1mL分别含有大黄素0.472、4.27、8.26、11.80、15.34μg；大黄素甲醚1.17、2.925、5.85、10.23、21.94μg。

按上述色谱条件分别进行测定，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准
曲线，得回归方程大黄素：Y＝68.23 X＋48.994，r2＝0.999 3，大黄素甲醚：Y
＝104.71 X＋8.093 1，r2＝0.999 2。

结果表明大黄素线性范围为1.1～22.0μg／mL；大黄素甲醚线性范围为1.17～21.94μg／mL。

2.2.5 精密度试验
取同一浓度对照品溶液，连续进样6次，每次进样20μL，记录峰面积值，结果大黄素和大黄素甲醚RSD 分别为1.04%和1.15%。

2.2.6 稳定性考察
精密吸取同一供试品溶液20μL，分别在0、1、2、4、6、8h进样测定，大黄素
和大黄素甲醚含量的RSD分别为1.35%和2.26%，说明供试品溶液在8 h内稳定。

2.2.7 加样回收率试验
取已知含量的片剂适量，研细，分别称取6份样品约0.5g，精密称定。

分别精密加入大黄素对照品约0.3mg和大黄素甲醚对照品约0.2mg，按“2.2.3”方法制备样品和“2.2.1”项下的色谱条件进行含量测定，并计算回收率。

结果大黄素平均回收率为101.21%，RSD 为2.04%；大黄素甲醚平均回收率为94.70%，RSD 为
1.50%。

2.2.8 样品测定
取3 批自制样品（批号：120315、120318、120322），依法测定，计算大黄素和大黄素甲醚的质量浓度分别为0.591、0.653、0.655mg／g和0.169、0.143、0.167mg／g。

3 讨论
3.1 流动相的选择
本实验尝试了甲醇－1%冰醋酸（32∶68）和水－甲醇－冰醋酸（40∶57.5∶2.5）2种不同的流动相，结果二者都可使芦丁达到良好的分离，但前者所用分析时间较长，故选取水－甲醇－冰醋酸（40∶57.5∶2.5）为流动相。

3.2 溶剂的选择
《中华人民共和国药典》2010年版采用甲醇作为溶剂，但实验中发现以甲醇作溶剂时色谱峰前沿，故比较了70%甲醇、50%甲醇、70%乙醇做溶剂时芦丁的HPLC色谱图，结果70%甲醇作溶剂时芦丁色谱峰的对称性最好且分离完全[3]。

本实验建立的薄层色谱方法，对照品、对照药材与制剂斑点清晰，阴性无干扰。

建立了制剂中大黄和槐花的质量控制方法，该方法精密度与稳定性良好，杂质峰无干扰，能有效地控制肾药Ⅲ号结肠定位片的质量。

【相关文献】
[1] 王宏顺，宋卫国，程露.肾药Ⅲ号灌肠液治疗尿毒症52例临床观察[J].实用中西医结合临床，2011，11（5）62－63.
Wang HS，Song WG，Cheng L.Observation on Nephropathy medicationⅢ enema fluid in treating uremia 52patients[J].Pract Clin J Integr Tradit Chin West Med，2011，11（5）：62－63.
[2] 杨美华，陈小荣，郑俊华.高效液相色谱法测定槐花药材中芦丁的含量[J].中国药事，2000，14（1）：34－35.
Yang MH，Chen XR，Zheng JH.Determination of Rutin content in Flos Sophorae through HPLC[J].Chin Pharm Affairs，2000，14（1）：34－35.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：333. Pharmacopoeia Commission of People’s Republic of China.Chinese Pharmacopoeia：1st edition[S].Beijing：China medical science and technology press，2010：333.。