抗头孢氨苄单克隆抗体的制备与初步应用
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中 国 畜牧 兽 医
２ ０ １ ７ ， ４ ４ （ ４ ） ： １ １ ５ ９ — １ １ ６ ７
Ｃｈ ｉ ｎ ａ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄｒ ｙ ＆ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． １ ６ ４ ３ １ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． １ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ４ ． ０ ３ １
２ ．Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｍ ｉ ｃ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ ｐ ｕ Ｔ ｏ ｗｎ， Ｋｕ ｎ ｓ ｈ ａ ｎ ２ １ ５ ３ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｅ ａ ｉ ｍ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｗａ ｓ ｔ ｏ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ａ ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ（ Ｍｃ Ａｂ ）ａ ｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ （ ＣＥＸ）， ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｉ ｌ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｎ ＥＬＩ Ｓ Ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｃ ＥＸ ｉ ｎ ｍｉ ｌ ｋ ．Ｔｈ ｅ Ｃ ＥＸ
抗 头 孢 氨 苄 单克 隆抗 体 的 制备 与初 步 应 用
张 伟 ， 王 兴ｚ ， 刘金 萍 ， 徐声乐 ， 秦 海艳 ， 刘 若璇 ， 蔡 云虹 ， 汝 晓 飞 ， 侯 珂 ， 王捍 东
（ １ ． 扬 州 大学 兽 医 学 院 ， 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ； ２ ． 张浦镇动物防疫站 ， 昆山 ２ １ ５ ３ ０ ０ ）
关 键词 ： 单克隆抗体 ； 头孢氨苄 ； Ｅ Ｌ ｌ Ｓ Ａ； 人 工抗 原
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ９ ． ７ ９ ６ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ４ — １ １ ５ ９ — ０ ９
Ｐｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｐｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ａｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｎｔ ｉ — ｃ ｅ ｐ ｈａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ Ａｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ Ｚ ＨＡＮＧ Ｗｅ ｉ 。ＷＡＮＧ Ｘｉ ｎ ｇ ，Ｌ Ｉ Ｕ Ｊ ｉ ｎ － ｐ ｉ ｎ ｇ ，ＸＵ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ － ｌ ｅ ，ＱＩ Ｎ Ｈａ ｌ — ｙ ａ ｎ ，
范 围为 ２ ０ ～１ ０ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ ， 线性方程 ｙ 一０ ． ４ ６ ７ ４ ｘ 一０ ． ５ ３ ５ ９ （ 一０ ． ９ ９ ０ ９ ） ， 检测下限为 １ ９ ． ６ ８ ｎ ｇ ／ ｍＬ， 平 均 回 收 率 为
９ １ ． ３ １ ％， 平 均 变 异 系 数低 于 １ ５ ％， 低 于 中 国及 欧 盟 规 定 的头 孢 氨 苄 最 高 残 留 限量 ， 具有一定的应用前景 。
摘 要 ：为制 备 抗 头孢 氨 苄 （ ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ ， Ｃ Ｅ Ｘ ） 的单 Байду номын сангаас 隆 抗 体 并 建 立 鲜 奶 中 Ｃ Ｅ Ｘ残 留检测 的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法 ， 本 试 验
采 用 戊 二醛 两 步 法 分 别 将 Ｃ Ｅ Ｘ 与 牛 血 清 白蛋 白（ Ｂ Ｓ Ａ） 、 卵清 白蛋 白（ Ｏ ＶＡ） 偶联， 用合 成 的 Ｃ Ｅ Ｘ － Ｂ Ｓ Ａ 作 为 免 疫 原
ｗａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｊ ｕ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ａ ｌ ｂ ｕ ｍｉ ｎ（ Ｂ Ｓ Ａ）ａ ｎ ｄ ｏ ｖ ａ ｌ ｂ ｕ ｍｉ ｎ（ ＯＶＡ）ｂ ｙ ｔ ｗｏ — ｓ ｔ ｅ ｐ ｇ ｌ ｕ ｔ —
免疫 Ｂ ＡＬ Ｂ ／ ｃ 雌 鼠； ５ 次免疫后 ， 应用杂交瘤细胞融 合技术建 立并筛 选 出两株 （ ２ Ｇ ４ 、 ５ Ｂ ３ ） 分泌抗 Ｃ Ｅ Ｘ 单 克 隆 抗 体
（ ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ ， Ｍｃ Ａｂ ） 的 杂交 瘤 细 胞 株 ， 将 ２ Ｇ ４细 胞 株 注入 Ｂ ＡＬ Ｂ ／ ｃ 小 鼠腹 腔 制 备 腹 水 ， 并 对 腹 水 进 行 纯 化及鉴 定 。结果 显 示 ， ２ Ｇ４腹 水 效 价 大 于 １：１ ． ２ ８ ×１ ０ ， 其 抗 体亚 型为 Ｉ ｇ Ｇ２ ｂ （ ） ， 亲 和 力 常 数 Ｋ一 １ ． ５ １ × １ ０ 。Ｌ ／ ｍｏ ｌ ； 交叉试验结 果显示 ， 该 单 克 隆抗 体 除 了 与 头 孢 拉 定 有 ５ ２ ． ５ ５ 的交 叉 反 应 率 外 ， 与头孢 噻呋、 头孢 曲松 、 头孢 噻肟 、 头孢 噻吩、 青霉素 、 链 霉素 、 四环 素 均无 明显 交 叉 反 应 ； 建 立 了测 定 鲜 奶 样 品 中 Ｃ Ｅ Ｘ的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法 ， 线 性
ＬＩ Ｕ Ｒｕ ｏ － ｘ ｕ ａ ｎ 。ＣＡＩ Ｙｕ ｎ － ｈ ｏ ｎ ｇ ， ＲＵ Ｘｉ ａ ｏ － ｆ ｅ ｉ ，Ｈ Ｏ Ｕ Ｋｅ ， ＷＡＮ Ｇ Ｈ ａ ｎ － ｄ ｏ ｎ ｇ
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２ ０ １ ７ ， ４ ４ （ ４ ） ： １ １ ５ ９ — １ １ ６ ７
Ｃｈ ｉ ｎ ａ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄｒ ｙ ＆ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． １ ６ ４ ３ １ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． １ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ４ ． ０ ３ １
２ ．Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｍ ｉ ｃ Ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ ｐ ｕ Ｔ ｏ ｗｎ， Ｋｕ ｎ ｓ ｈ ａ ｎ ２ １ ５ ３ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｅ ａ ｉ ｍ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｗａ ｓ ｔ ｏ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ｅ ａ ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ（ Ｍｃ Ａｂ ）ａ ｇ ａ ｉ ｎ ｓ ｔ ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ （ ＣＥＸ）， ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｉ ｌ ｙ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ａ ｎ ＥＬＩ Ｓ Ａ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｒ ｅ ｓ ｉ ｄ ｕ ｅ ｓ ｏ ｆ Ｃ ＥＸ ｉ ｎ ｍｉ ｌ ｋ ．Ｔｈ ｅ Ｃ ＥＸ
抗 头 孢 氨 苄 单克 隆抗 体 的 制备 与初 步 应 用
张 伟 ， 王 兴ｚ ， 刘金 萍 ， 徐声乐 ， 秦 海艳 ， 刘 若璇 ， 蔡 云虹 ， 汝 晓 飞 ， 侯 珂 ， 王捍 东
（ １ ． 扬 州 大学 兽 医 学 院 ， 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ； ２ ． 张浦镇动物防疫站 ， 昆山 ２ １ ５ ３ ０ ０ ）
关 键词 ： 单克隆抗体 ； 头孢氨苄 ； Ｅ Ｌ ｌ Ｓ Ａ； 人 工抗 原
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ９ ． ７ ９ ６ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ６ ７ １ — ７ ２ ３ ６ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ４ — １ １ ５ ９ — ０ ９
Ｐｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｐｒ ｅ ｌ ｉ ｍｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ａｐｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｎｔ ｉ — ｃ ｅ ｐ ｈａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ Ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ Ａｎｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｙ Ｚ ＨＡＮＧ Ｗｅ ｉ 。ＷＡＮＧ Ｘｉ ｎ ｇ ，Ｌ Ｉ Ｕ Ｊ ｉ ｎ － ｐ ｉ ｎ ｇ ，ＸＵ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ － ｌ ｅ ，ＱＩ Ｎ Ｈａ ｌ — ｙ ａ ｎ ，
范 围为 ２ ０ ～１ ０ ０ ０ ｎ ｇ ／ ｍＬ ， 线性方程 ｙ 一０ ． ４ ６ ７ ４ ｘ 一０ ． ５ ３ ５ ９ （ 一０ ． ９ ９ ０ ９ ） ， 检测下限为 １ ９ ． ６ ８ ｎ ｇ ／ ｍＬ， 平 均 回 收 率 为
９ １ ． ３ １ ％， 平 均 变 异 系 数低 于 １ ５ ％， 低 于 中 国及 欧 盟 规 定 的头 孢 氨 苄 最 高 残 留 限量 ， 具有一定的应用前景 。
摘 要 ：为制 备 抗 头孢 氨 苄 （ ｃ ｅ ｐ ｈ ａ ｌ ｅ ｘ ｉ ｎ ， Ｃ Ｅ Ｘ ） 的单 Байду номын сангаас 隆 抗 体 并 建 立 鲜 奶 中 Ｃ Ｅ Ｘ残 留检测 的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法 ， 本 试 验
采 用 戊 二醛 两 步 法 分 别 将 Ｃ Ｅ Ｘ 与 牛 血 清 白蛋 白（ Ｂ Ｓ Ａ） 、 卵清 白蛋 白（ Ｏ ＶＡ） 偶联， 用合 成 的 Ｃ Ｅ Ｘ － Ｂ Ｓ Ａ 作 为 免 疫 原
ｗａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｊ ｕ ｇ ａ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｒ ｂ ｏ ｖ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ａ ｌ ｂ ｕ ｍｉ ｎ（ Ｂ Ｓ Ａ）ａ ｎ ｄ ｏ ｖ ａ ｌ ｂ ｕ ｍｉ ｎ（ ＯＶＡ）ｂ ｙ ｔ ｗｏ — ｓ ｔ ｅ ｐ ｇ ｌ ｕ ｔ —
免疫 Ｂ ＡＬ Ｂ ／ ｃ 雌 鼠； ５ 次免疫后 ， 应用杂交瘤细胞融 合技术建 立并筛 选 出两株 （ ２ Ｇ ４ 、 ５ Ｂ ３ ） 分泌抗 Ｃ Ｅ Ｘ 单 克 隆 抗 体
（ ｍｏ ｎ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ａ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｏ ｄ ｉ ｅ ｓ ， Ｍｃ Ａｂ ） 的 杂交 瘤 细 胞 株 ， 将 ２ Ｇ ４细 胞 株 注入 Ｂ ＡＬ Ｂ ／ ｃ 小 鼠腹 腔 制 备 腹 水 ， 并 对 腹 水 进 行 纯 化及鉴 定 。结果 显 示 ， ２ Ｇ４腹 水 效 价 大 于 １：１ ． ２ ８ ×１ ０ ， 其 抗 体亚 型为 Ｉ ｇ Ｇ２ ｂ （ ） ， 亲 和 力 常 数 Ｋ一 １ ． ５ １ × １ ０ 。Ｌ ／ ｍｏ ｌ ； 交叉试验结 果显示 ， 该 单 克 隆抗 体 除 了 与 头 孢 拉 定 有 ５ ２ ． ５ ５ 的交 叉 反 应 率 外 ， 与头孢 噻呋、 头孢 曲松 、 头孢 噻肟 、 头孢 噻吩、 青霉素 、 链 霉素 、 四环 素 均无 明显 交 叉 反 应 ； 建 立 了测 定 鲜 奶 样 品 中 Ｃ Ｅ Ｘ的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法 ， 线 性
ＬＩ Ｕ Ｒｕ ｏ － ｘ ｕ ａ ｎ 。ＣＡＩ Ｙｕ ｎ － ｈ ｏ ｎ ｇ ， ＲＵ Ｘｉ ａ ｏ － ｆ ｅ ｉ ，Ｈ Ｏ Ｕ Ｋｅ ， ＷＡＮ Ｇ Ｈ ａ ｎ － ｄ ｏ ｎ ｇ
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