全血RNA提取试剂盒-柱式(Column

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全血RNA提取试剂盒-柱式（Column Blood RNAout）
货号：M090057
产品及特点：本产品经过精心优化而得，多项指标超过国内外同类产品。

本产品是本公司在血液RNAOUT基础上开发的柱式升级产品，专门从动物全血样品中快速提取总RNA。

跟血液RNAOUT相比，本产品具有下列特点：
1.比血液RNAOUT更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预
处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。

2.产量和纯度更高，OD260/280均在2.0左右，产率一般为2-5 ug/mL人血。

3.每次微量提取的最大样品处理量可以达到1.5 mL，高于进口的同类产品。

4.与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和
Northern杂交等研究。

规格及成分
运输及保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法
1. 将0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5 mL 塑料离心管中。

2. 12,000 rpm 室温离心3 分钟，弃上清(血浆)。

如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2 mL，则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。

3. 将1 mL 溶液A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。

4. 将0.3 mL 的溶液B 加入到离心管中，剧烈震荡30 秒。

5. 和0.2 mL 氯仿加入到离心管中，剧烈震荡30 秒。

6. 12,000 rpm 室温离心3-5 分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。

为防止污染，最好留100 uL 左右的上清液。

下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。

7. 在上清液中加入0.5 mL 的溶液C 和0.2 mL 的自备氯仿，用手上下颠倒或振荡器振荡30 秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。

振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

8. 室温12,000 rpm 离心3 分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。

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9. 将上清液(约1 mL)转移到另一干净的1.5 mL 塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。

10. 在上清液中加入0.5 倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡30 秒混匀。

振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

11. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。

12. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。

13. 加0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。

14. 加0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。

此步可以省略。

15. 室温离心半分钟。

此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA 的使用。

16. 将离心吸附柱转移到RNase-free 收集管中，加入50-100 uL RNA 洗脱液，室温放置1-2 分钟。

17. 12,000 rpm 室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

18. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。

19. RNA 产量产率测定：将5-10 μL RNA 溶于TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260 的光吸收。

通过光吸收可以得出RNA 浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA 的产量（浓度X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。

20. RNA 纯度测定：无污染的总RNA 的OD260/OD280 一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR 等反应。

疑难解答
Q: 如何去除RNA 样品中的DNA 污染？
A: 可以使用本公司的非酶DNA 清除剂DNA ERASOL-2。

Q: 为何有的样品在第6 步离心后有很厚的中间层，上清很少。

A: 这是因为蛋白质变性不充分，可以适当减少血液的用量。

白细胞多的血液
容易产生这种情况。

Q: 离心吸附柱的RNA 最大吸附量是多少？
A: 是40 ug。