方法开发小常识

HPLC
1、甲醇、乙腈
1）乙腈紫外吸收较甲醇低，特别是在低波长处。

2）乙腈比甲醇柱压低3）与水混合时，混合溶液的极性变化。

乙腈，比例与极性线性变化。

甲醇，非线性。

4）纯乙腈的洗脱能力比纯甲醇强。

同比例的乙腈水比同比例的甲醇水洗脱能力强。

5）乙腈与水混合，吸热，溶液温度低，在缓慢恢复至室温时产生气泡。

甲醇与水混合，放热。

气泡容易放出。

6）乙腈价格高。

总结：开发方法时，优选乙腈。

但要注意气泡可能对基线造成的影响。

最终可以考虑甲醇替代乙腈，以降低成本。

2、缓冲盐
1）流动相pH值得改变可影响弱酸弱碱的保留时间，对酯等中性化合的保留时间基本无影响。

一般规律是抑制电离，保留时间增加。

2）磷酸盐比醋酸盐的紫外吸收低
3）钾盐比钠盐的溶解度高。

4）一般浓度为几十个mmol/L。

太低缓冲能力达不到，太高盐析出。

5）如果要用MS检测技术，一定选用挥发性缓冲体系，例如，甲酸铵体系。

6）强的酸、碱一般不能用调节pH的方法改变保留。

选用相应的离子对试剂。

1、实验室必备，弱极性，中等极性，强极性三根柱子。

2、降低温度可以延长保留时间。

但是对于甲醇，乙醇这种极性溶剂来讲，换极性色谱柱更有效增加保留时间。

3、水做溶剂，直接进样。

最大的压力不是来自于对色谱柱的的损伤。

而是在常用溶剂里面水的蒸发膨胀系数最大。

1μl的水蒸发后气体体积在1000μl以上。

而安捷伦气相的进样衬管体积不到900μl。

多于的体积会四散流走。

有可能向来气方向扩散，造成管路污染,精密度差，基线升高，甚至鬼峰出现。

而通过清洗进样口是无法消除，必须换管路。

4、GC难点不是开发方法本身，而是在于仪器设备的维护。

建议动手能力强、思维活跃的男生来做GC。