鼓槌石斛多糖提取工艺优化及含量测定

鼓槌石斛多糖提取工艺优化及含量测定△
滕建北1张婷2刘喜华2刘安韬2*莫展雄1（1.广西中医药大学南宁530001；2.广西卫生职业技术学院南宁530023）
摘要：目的：优化鼓槌石斛多糖提取工艺，并测定其含量。

方法：通过单因素和正交实验，考察提取时间、料液比和提取次数等影响因素，研究鼓槌石斛最佳的提取工艺参数。

参照《中国药典》2015版石斛多糖含量测定，采用硫酸-苯酚显色法，测定药材多糖含量。

结果：确定最佳提取工艺为料液比为1∶100，提取时间1.5h，提取2次，测得鼓槌石斛多糖含量30.65%。

结论：该方法稳定、可靠，可作为鼓槌石斛多糖的提取方法。

关键词：鼓槌石斛多糖提取工艺正交试验硫酸-苯酚法
中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1672-8351（2020）07-0008-03
Determination of polysaccharide content and Extraction Technology from Dendrobiun chrysotoxum
Teng Jianbei1Zhang Ting2Liu Xihua2Liu Antao2*Mo Zhanxiong1（1.Guangxi University of traditional Chinese medicine Nanning530001；
2.Guangxi Vocational College of health,Nanning,530023）
Abstract：Objective：Optimum extraction process and determination of polysaccharide content of Dendrobiun chrysotoxum.Methods：Extraction time，Material-liquid ratio and extraction times polysaccharide content was determined by single factor investigation and orthogonal experiment.Phenol-sulfuric acid method was used to quantitative determination.Results：The ratio of material to liquid was1：100，and the extraction time was1.5h.The extraction times were2times，and the content of polysaccharide in Dendrobiun chrysotoxum was30.65%under these conditions.Conclusion：It is stable and reliable method that can be used to extract and determine polysaccharides of Dendrobiun chrysotoxum.
Keywords:Dendrobiun chrysotoxum Polysaccharides Extraction technology Orthogonal experiment Phenol-sulfuric acid method
鼓槌石斛Dendrobiun chrysotoxum Lindl.为兰科石斛属多年生附生草本[1]，是目前市场上石斛药材的主要来源之一，具有益胃生津、滋阴清热的功效[2]。

化学成分研究表明，鼓槌石斛主要含有糖类、鞣质及挥发性成分等[3-9]。

石斛多糖是鼓槌石斛的主要有效成分之一，具有抗肿瘤、降血糖、保护肝脏等多种药理活性[10-16]。

本研究通过正交试验，测定不同提取条件下鼓槌石斛多糖含量，确定最佳的提取工艺方法，为鼓槌石斛多糖的提取及药材质量控制提供参考。

1材料
鼓槌石斛原药材（采自广西壮族自治区河池市宜州区），由广西中医药大学中药鉴定教研室滕建北教授鉴定，为兰科石斛属植物鼓槌石斛（Dendrobiun chrysotoxum Lindl）。

除去杂质，将药材剪成小段，50℃烘干，打粉，过用三号筛，备用。

UV1780型紫外-可见分光光度计（日本，岛津公司）；SIM-F140AY65-PC制冰机（日本，松下电器产业株式会社）；Merck Millipore Direct-Q，3，5，8，纯水/超纯水一体机（德国，默克集团）；HWS-28电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；KQ-500DA数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；D-无水葡萄糖标准品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201506）；浓硫酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20180227）；苯酚（国药集团化学试剂有限公司，批号：20151116）；其他试剂均为国产分析纯。

2方法
2.1多糖含量测定：以D-无水葡萄糖为对照，采用硫酸-苯酚显色
法，测定多糖含量，标准曲线方程为y=7.66812x+0.00000（r= 0.99926），式中x为D-无水葡萄糖质量浓度（mg/mL）、y为吸光
度，测定吸光度后，根据回归方程，计算多糖含量。

2.2提取工艺优化：取鼓槌石斛药材粉末，精密称定，在单因素提
取工艺考察基础上，考察料液比（A）、提取时间（B）和提取次数（C）3个因素，每个因素设3个水平。

选用L9（33）表进行正交实验，以多糖含量为评价指标，计算标准偏差，以两独立样本均数比较t 检验。

3结果
3.1单因素实验
3.1.1提取方法考察：分别取药材粉末0.5g，精密称定，加蒸馏水80mL，采用超声提取法（1h）、回流提取法（1h）两种方法对鼓槌石斛多糖进行提取，采用紫外分光光度计测定吸光度。

结果显示采用回流提取法多糖平均含量为26.25%，而超声提取多糖平均含量为17%，前者鼓槌石斛多糖提取率最高。

3.1.2提取次数考察：采用回流提取法，选取多糖提取时间1.5h、料液比0.5∶40（g/mL），考察提取次数，结果显示提取3次的多糖提取率较高，但多糖提取2次和3次的含量仅相差0.25%，故提取次数为2次较为合理。

见表1，见图1。

表1提取次数考察
提取次数
吸光度
（A）
浓度
（mg/mL）
多糖含量
（%）
平均多糖含量
（%）1
2
3
0.117
0.118
0.127
0.161
0.165
0.167
0.166
0.165
0.167
0.015
0.015
0.016
0.020
0.021
0.021
0.022
0.022
0.022
15.28
15.40
16.57
20.98
21.56
21.75
21.70
21.54
21.80
15.75
21.43
21.68
展[J].中草药，2017，48（22）：4797-4803.
[3]魏文丽，杨丽花，王佩龙，等.川木香化学成分及质量控制研究
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醋和去氢木香内醋含量[J].中国药业，2013，22（19）：37-38.
△基金项目：《内蒙古蒙药制剂规范》（第三册）（编号JYCZ18-027-3）；内蒙古自治区级大学生创新创业训练项目（编号1910132014）
*通讯作者
编号吸光度（A ）浓度（mg/mL ）样品重量（g ）
多糖含量（%）平均多糖
含量（%）RSD
（%）123
0.2360.2350.234
0.03070.03060.03050.50020.50030.5004
30.7130.6930.56
30.65
4.26图1提取次数考察
3.1.3料液比考察：采用回流提取法，提取时间为1.5h ，提取2次，
考察料液比对鼓槌石斛多糖得率影响，显示料液比为0.5∶50（g/mL ）的提取率为最高。

见表2，见图2。

表2料液比考察
图2料液比考察
3.1.4提取时间考察：采用回流法提取，料液比为0.5∶50（g/mL ）、提取2次、考察提取时间对多糖得率影响，结果提取时间为1.5h 多
糖的得率最高，见表3，图3。

3.2正交实验：根据单因素实验，考察料液比（A ）、提取时间（B ）和
提取次数（C ）3个因素，进行L 9（33
）
安排正交实验。

结果见表4。

根据正交试验R 值结果分析：料液比（A ）>提取次数（C ）>提
取时间（B ）。

A 因素中对指标影响K 1最大，C 因素中对指标影响K 2最大，B 因素中对指标影响K 3最大，正交实验结果显示为A 1B 2C 2测得含量最高，综合各工艺因素确定最佳提取方法为料液比1∶100，提取时间为1.5h ，提取2次。

3.3多糖含量测定：按照正交试验设计最佳提取工艺，每份取
0.5g ，共3份。

置锥形瓶中，加石油醚30mL ，水浴加热30min ，取
出，弃滤液，保留滤渣蒸发干溶剂，加乙醇80mL ，摇匀，水浴加热
1h ，取出，弃滤液，留滤渣蒸发干溶剂，
加入50mL 蒸馏水，加热回流2次，每次1.5h ，过滤，合并两次滤液，
放冷置200mL
容量编号料液比（g/mL ）吸光度（A ）浓度（mg/mL ）多糖含量（%）平均多糖含量（%）12345
0.5∶400.5∶500.5∶600.5∶700.5∶80
0.1560.1430.1510.1690.1490.1810.1570.1620.1490.1610.1650.1640.1750.1380.181
0.0200.0190.0190.0220.0190.0240.0200.0210.0190.0210.0210.0210.0230.0180.024
20.3118.6419.6422.0119.4823.6420.4621.0919.4720.9421.4821.3622.8418.0723.56
19.5321.7120.3421.26
21.49
编号时间（h ）吸光度（A ）浓度（mg/mL ）多糖含量（%）平均多糖含量（%）123
45
0.51.01.52.02.5
0.1190.1330.1100.1410.1400.1410.1570.1610.1550.1580.1440.1450.1640.1520.125
0.0150.0170.0140.0180.0180.0180.0200.0210.0200.0210.0190.0190.0210.0200.016
15.4617.3314.3618.4118.2218.4520.4821.0320.2620.2618.7718.9021.3619.8716.34
15.7218.3620.5919.4119.19
编号A B C 平均含量（%）
123456789
K 1K 2K 3R 111222333
26.2315.7826.1510.447
123123123
21.122.6223.641.730123231312
19.4624.4622.244.9920.6530.1227.9115.9515.6915.7029.1222.0427.30
表3提取时间考察
图3提取时间考察
表4正交试验结果
表5样品含量测定结果
瓶，加纯水至刻度，摇匀，吸取1mL置25mL容量瓶，定容，摇匀，即得。

结果鼓槌石斛提取平均多糖含量为30.65%，RSD值为4.26%。

正交试验提取平均多糖含量为30.12%，RSD值为1.06%。

见表5。

4讨论
4.1在单因素工艺考察中，回流提取法比超声提取法多糖含量明显要高，回流提取是直火加热的温度高，相比超声提取只有40℃，可能与提取温度密切相关。

在提取次数中含量测定显示回流提取3次的多糖提取率较高，考虑到多糖提取2次和3次多糖含量仅相差0.25%，从减少耗能和时间方面考虑，采用提取2次。

在提取时间中提取1.5h多糖的得率较高，分析得出提取时间在2h后含量开始降低，可能单糖被分离水解从而影响多糖的含量。

4.2经正交试验方法得出本实验最佳多糖提取工艺条件，通过紫外-可见光分光光度法对鼓槌石斛多糖含量进行测定，试验结果表明该提取工艺方法稳定，可靠。

参考文献
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△基金项目：2018年中药特色技术传承人才培训项目（编号：T20184828005）；广西壮瑶药重点实验室项目“壮药小黄草全成分颗粒的制备研究”（GXZYZZ201707）；广西中医药大学课题“广西产石斛的质量评价及其多糖提取工艺研究”。

*通讯作者
白芷质量分析及标准探索研究
李珍孟美英杨洋张烨吕彩莲丁华*（鄂尔多斯市药品医疗器械检验研究中心鄂尔多斯017000）摘要：目的：对全区范围内抽验涉及36家饮片生产企业的49批白芷饮片进行了市场质量分析。

发现了白芷中欧前胡素含量的快速筛查方法，为进一步研究和开发白芷药材提供质量检验参考。

建立高效液相色谱法同时测定白芷药材（饮片）中欧前胡素和异欧前胡素的含量。

方法：主要采用高效液相色谱法，色谱柱：Tnature C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相：乙腈—水（48∶52），柱温30℃，
检测波长249nm，流速1.0mL·min-1。

结果：欧前胡素含量快筛方法规律分布，简便易行。

新建HPLC法测定白芷中欧前胡素和异欧前胡素两种化学成分分离度高。

欧前胡素在24.2~386ng范围内线性关系良好（r=1.0000）,异欧前胡素在46.66~746.6ng范围内线性关系良好（r=0.9998）。

结论：现行标准可控制市场上白芷的质量，但需完善提高。

运用欧前胡素液相色谱图快筛法可提高检验效率。

新建含量测定方法专属性强，灵敏度高、准确性好、重复性好，可用于白芷的质量控制。

关键词：白芷质量分析快速筛查欧前胡素异欧前胡素高效液相色谱
中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：1672-8351（2020）07-0010-04
Quality analysis and standard improvement of Radix Angelicae
Li Zhen Meng Meiying Yang Yang Zhang Ye Lv Cailian Ding Hua（Ordos Testing&Research Center of Drug and Medical Devices, Inner Mongolia,ordos017000，China）
Abstract：Objective：Through the quality analysis of49batches of Radix Angelicae dahuricae from36factories in Inner Mongolia,a rapid screening method for the content of the Chinese angelica dahurica was found to provide a reference for the deep research and development of Radix Angelicae dahuricae.A HPLC method was established for the quantitative determination of the content of isocarotene and isoisocarotene in Radix Angelicae dahuricae.Method:The HPLC system consisted of the Tnature C18（4.6mm×250mm，5μm）column,the mobile phase consisted of acetonitrile and water,the flow rate was1.0mL·min-1,and the column temperature was30℃.UV detectorwas set at249nm,The linear response range was24.2~386ng（r=1.0000）for imperatiorin and46.66~746.6ng（r=0.9998）for isoimperatorin. Conclusion:Sulfur dioxide fumigation and the color of the transverse section of Radix Angelicae and the acromion in the HPLC are related to the quality of Radix Angelicae.The method is highly sensitive and repeatable,and can be used for quality control for Radix angelicae. Keywords:Radix Angelicae Quality analysis Rapid screening Imperatiorin Isoimperatorin HPLC
白芷为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根,最早收载于《神农本草经》，临床主要用于治疗感冒头痛、鼻塞、鼻渊、白带等证，常用于多种中成药组方[1]，也作为药食同源药材被百姓广泛接受并普遍使用。

白芷药材主要含香豆素类化合物，现行标准《中国药典》2015年版一部“白芷”项下的检验方法专属性较强，基本可以控制市场上白芷的质量，但薄层鉴别和含量测定方法仍可提高完善。

由于欧前胡素和异欧前胡素均为白芷的主要化学成分，但目前药典“白芷”项下的含量测定指标为欧前胡素，国内文献资料[2-7]对白芷中欧前胡素和异欧前胡素虽然有研究检测，但多数沿用甲醇和水为流动相且都缺少耐用性试验。

本文在参考结合上述文献。