DNA的粗提取和鉴定
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DNA的粗提取与鉴定
1
DNA的粗提取与鉴定
复习：
蛋白质
染色体成分
DNA
RNA(少量)
提取DNA的基本思路：
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的 差异，提取DNA，去除其他成分。
2
DNA的物理化学性质 DNA的溶解性 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 DNA的鉴定
3
15
鉴定
比较 加入物质
自变量
结果
溶液逐渐 变蓝 不变蓝
图示
均加入： 丝状 实验组 ①4 mL二苯胺 物 试剂 (DNA) ②2mol/LNaCl 溶液5 mL —— 对照组
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，加1滴 甲基绿溶液，丝状物变成绿色。 注意：鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
1.DNA的粗提取实验原理
1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细 胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋 白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。 大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变 性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。
用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。
洋葱的鳞片叶表皮细胞 16
6
二、目的要求
初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质
三、材料用具
用什么做实验材料？ 动物：鸡血 、猪肝等 植物：洋葱、菠菜等
盛放鸡血细胞液的容器，为什么最好是塑料容器？
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附, 由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸 附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中 最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中 DNA的损失。 7
12
方法步骤（植物）
1、将30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研 钵中加入2g氯化钠，研磨直至成半流体状。 2、向研钵中加入10ml蒸馏水或凉开水，搅 拌。然后加入10ml洗涤剂，轻轻搅拌。
3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中 加入预冷的10ml乙醇溶液，静置，可产生 絮状的DNA。 4、取两支试管，分别加入5ml生 理盐水，将DNA挑至其中一支试管 中，轻轻搅拌使其溶解
三、材料用具
体积分数为95%的酒精溶液预冷的优点是什么？
从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。 一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解； 二是降低分子运动，易于形成沉淀析出； 三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
8
四、方法步骤（动物）
实验前：制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心或静置沉淀。 活鸡鲜பைடு நூலகம்180mL
5
2、利用什么原理进一步提取含杂质较少的DNA？
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶 于酒精溶液。
3、利用什么试剂鉴定DNA?
DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。
为什么要建议现配现用二苯胺试剂？
二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果（二 苯胺试剂性质不稳定,极易变色，如浅蓝色或绿色）。
析出DNA：
在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌， 出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl 溶液的浓度相当于0.14mol/L）。
滤取DNA黏稠物：
用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。
DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 过滤含DNA的NaCl溶液：用两层纱布过滤。滤液中含有DNA。 所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿 提取较纯净的DNA： 一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用 玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 DNA的鉴定：取两试管各加2mol/L的NaCl溶液，将DNA充分溶解于其 中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热 10 5min后冷却，可发现DNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
柠檬酸钠的作用？ 防止血液凝固
9
实验方法步骤：
提取细胞核物质： 利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)
14
四、方法步骤
去除滤液中的杂质的其他方法 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10——15min， 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 原理：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有 影响。 将滤液放在60——75℃的恒温水浴箱中保温 10——15min，注意严格控制温度范围。 原理：大多数蛋白质不能忍受60——80℃的高 温，而DNA在80℃以上才会变性。
实验中加入物质及作用
11
方法步骤（植物）：
植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶 解细胞膜。
洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是： 洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和 碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白 质变性，使蛋白质与DNA分离开来。 利于DNA的释放。
动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂） 破坏的，因为动物细胞膜外面没 有细胞壁的保护，放在清水中自 然的就会吸水而胀破，释放出其 中的DNA等物质。
13
思考
加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么 ？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA 的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。
如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响 ？ 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量 变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺 鉴定不显示蓝色等。 95%预冷酒精的作用时什么？ DNA洗出，除去溶于酒精的蛋白质
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一、实验原理
1、利用什么原理使溶解在NaCl溶液中的DNA析出？
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的 变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA的溶解度最低。
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解 的杂质； 用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂 质。 因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去 与DNA溶解度不同的多种杂质。
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DNA的粗提取与鉴定
复习：
蛋白质
染色体成分
DNA
RNA(少量)
提取DNA的基本思路：
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的 差异，提取DNA，去除其他成分。
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DNA的物理化学性质 DNA的溶解性 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 DNA的鉴定
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鉴定
比较 加入物质
自变量
结果
溶液逐渐 变蓝 不变蓝
图示
均加入： 丝状 实验组 ①4 mL二苯胺 物 试剂 (DNA) ②2mol/LNaCl 溶液5 mL —— 对照组
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。 你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？ 取少许丝状物，置玻片中央，加1滴 甲基绿溶液，丝状物变成绿色。 注意：鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。
1.DNA的粗提取实验原理
1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细 胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性——蛋白酶水解蛋 白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。 大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变 性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。
用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。
洋葱的鳞片叶表皮细胞 16
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二、目的要求
初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质
三、材料用具
用什么做实验材料？ 动物：鸡血 、猪肝等 植物：洋葱、菠菜等
盛放鸡血细胞液的容器，为什么最好是塑料容器？
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附, 由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸 附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中 最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中 DNA的损失。 7
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方法步骤（植物）
1、将30g香蕉或菜花切碎，放入研钵中。向研 钵中加入2g氯化钠，研磨直至成半流体状。 2、向研钵中加入10ml蒸馏水或凉开水，搅 拌。然后加入10ml洗涤剂，轻轻搅拌。
3、将混合液用两层纱布过滤，向滤液中 加入预冷的10ml乙醇溶液，静置，可产生 絮状的DNA。 4、取两支试管，分别加入5ml生 理盐水，将DNA挑至其中一支试管 中，轻轻搅拌使其溶解
三、材料用具
体积分数为95%的酒精溶液预冷的优点是什么？
从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。 一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解； 二是降低分子运动，易于形成沉淀析出； 三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。
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四、方法步骤（动物）
实验前：制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心或静置沉淀。 活鸡鲜பைடு நூலகம்180mL
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2、利用什么原理进一步提取含杂质较少的DNA？
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶 于酒精溶液。
3、利用什么试剂鉴定DNA?
DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。
为什么要建议现配现用二苯胺试剂？
二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果（二 苯胺试剂性质不稳定,极易变色，如浅蓝色或绿色）。
析出DNA：
在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌， 出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl 溶液的浓度相当于0.14mol/L）。
滤取DNA黏稠物：
用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。
DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 过滤含DNA的NaCl溶液：用两层纱布过滤。滤液中含有DNA。 所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿 提取较纯净的DNA： 一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用 玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 DNA的鉴定：取两试管各加2mol/L的NaCl溶液，将DNA充分溶解于其 中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热 10 5min后冷却，可发现DNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
柠檬酸钠的作用？ 防止血液凝固
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实验方法步骤：
提取细胞核物质： 利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)
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四、方法步骤
去除滤液中的杂质的其他方法 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10——15min， 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 原理：蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有 影响。 将滤液放在60——75℃的恒温水浴箱中保温 10——15min，注意严格控制温度范围。 原理：大多数蛋白质不能忍受60——80℃的高 温，而DNA在80℃以上才会变性。
实验中加入物质及作用
11
方法步骤（植物）：
植物细胞需要先用洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）溶 解细胞膜。
洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是： 洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和 碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白 质变性，使蛋白质与DNA分离开来。 利于DNA的释放。
动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂） 破坏的，因为动物细胞膜外面没 有细胞壁的保护，放在清水中自 然的就会吸水而胀破，释放出其 中的DNA等物质。
13
思考
加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么 ？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA 的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。
如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响 ？ 研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量 变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺 鉴定不显示蓝色等。 95%预冷酒精的作用时什么？ DNA洗出，除去溶于酒精的蛋白质
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一、实验原理
1、利用什么原理使溶解在NaCl溶液中的DNA析出？
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的 变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA的溶解度最低。
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解 的杂质； 用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂 质。 因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去 与DNA溶解度不同的多种杂质。