MM FS CNG 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定方法

MMFSCNG0160 食品 亚硝酸盐 硝酸盐 格里斯试剂比色法 示波极谱法
MM_FS_CNG_0160
食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定方法
1.适用范围
本方法适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。

亚硝酸盐方法检出限为1mg/kg，硝酸盐方法检出限为1.4mg/kg。

第一部分：格里斯试剂比色法
(一)亚硝酸盐测定
2.原理概要
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N－1－萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。

3.主要仪器和试剂
3.1.主要试剂
氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入500mL水，准确加入20.0mL盐酸，混匀，准确加入50mL氢氧化铵，用水稀释至刻度。

必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7。

硫酸锌溶液(0.42mol/L)：称取120g硫酸锌(ZnSO
4·7H
2
O)，用水溶解，并稀释至1000mL。

氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。

对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。

N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L)：称取0.1gN-1-萘基乙二胺，加60％乙酸溶解并稀释至100mL，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。

显色剂：临用前将N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。

亚硝酸钠标准溶液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加100mL氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存。

此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠。

亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0μg亚硝酸钠。

3.2.仪器
小型粉碎机、分光光度计。

4.过程简述
4.1.样品制备
称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氢氧化钠溶液(20g/L)，混匀，用氢氧化钠溶液(20g/L)调样品pH＝8，定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2～5mL氢氧化钠，混匀。

置60℃水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。

放置0.5h，用滤纸过滤，弃去初滤液20mL，收集滤液备用。

4.2.测定
亚硝酸盐标准曲线的制备：吸取0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于25mL带塞比色管中。

于标准管中分别加入4.5mL氯化铵缓冲液，加2.5mL 60％乙酸后立即加入5.0mL显色剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min，用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。

低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为：吸取0，0.4，0.8，
1.2，1.6，
2.0mL 亚硝酸钠标准使用液。

4.2.2.样品测定：吸取10.0mL 上述滤液(4.1)于25mL 带塞比色管中，自4.2.1“于标准管中分别加入4.5mL 氯化铵缓冲液”起依法操作。

同时做试剂空白。

5.结果计算 00010001＝12121×××V V m m X …………………………………………………………(1) 式中：X 1——样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg；
m 1——样品质量，g； m 2——测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg； V 1——样品处理液总体积，mL；
V 2——测定用样液体积，mL。

6.允许差
相对偏差≤10％。

(二).硝酸盐测定
7.原理概要
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，或加入镉粉，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N －1萘基乙二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。

8.主要试剂
氯化铵缓冲溶液(pH9.6～9.7)：同(3.1)。

硫酸镉溶液(0.14mol/L)：称取37g 硫酸镉(CdSO 4·8H 2O)，用水溶解，定容至1L。

盐酸溶液(0.1mol/L)：吸取8.4mL 盐酸，用水稀释至1L。

硝酸钠标准溶液(1mg/mL)：准确称取500.0mg 于110～120℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于500mL 容量瓶中，加50mL 氯化铵缓冲液后定容，在4℃冰箱中避光保存。

硝酸钠标准使用液(10μg/mL)：临用时吸取硝酸钠标准溶液1.0mL，置于100mL 容量瓶中定容，混匀，临用时现配。

亚硝酸钠标准使用液同(3.1.8)。

镉柱(镉粉)：①海绵状镉粉的制备：于500mL 硫酸镉溶液中，投入足够的锌棒经3～4h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾斜法多次洗涤，然后移入粉碎机中，加500mL 水，捣碎约2s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20～40目之间的部分，置试剂瓶中，用水封盖保存，备用。

②镉柱还原效率的测定：取25mL 酸式滴定管数支，向柱底压入1cm 高的玻璃棉作垫，上置一小漏斗，将新配制的镉粉带水加入柱内，边装边轻轻敲击柱，排除柱内空气，加镉粉至8～10cm 高，上面用1cm 高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗。

当镉柱填装好后，先用25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次25mL，调节柱流速至3～5mL/min。

镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。

镉柱每次使用完毕后，应先以25mL 盐酸(0.1mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次25mL，最后用水覆盖镉柱。

柱先加25mL 氯化铵缓冲液，至液面接近海绵镉时，吸取2.0mL 硝酸钠标准使用液(10μg/mL)，经柱还原，控制流速3～5mL/min，用50mL 容量瓶接收。

加入5mL 氯化铵缓冲溶液，液面接近海绵镉时，加入15mL 水洗柱，还原液和洗液一并流入50mL 容量瓶中。

加5mL60％乙酸，10mL 显色剂，加水稀释至刻度，混匀，暗处放置25min。

用1cm 比色杯，以标准零管调节零点，于波长550nm 处测吸光度，根据亚硝酸盐标准曲线计算还原效率(如镉柱还原率小于95％，应经盐酸浸泡活化处理)。

③镉粉还原效率的测定：镉粉使用前，经盐酸浸泡活化处理，再以水洗两次，用水浸没待用。

用牛角勺将镉粉加入25mL 带塞刻度试管中，至5mL 刻度；用少量水封住。

吸取2.0mL 硝酸钠标准使用液，加入5mL 氯化铵缓冲液。

盖上试管塞，振摇2min，静止
5min，用漏斗颈部塞有少量脱脂棉的小漏斗过滤，滤液定量收集于50mL 容量瓶中，用15mL 水少量多次地洗涤镉粉，洗液与滤液合并。

加5mL 乙酸(60％)后，立即加10mL 显色剂，加水稀释至刻度，混匀，暗处置25min。

用1cm 比色杯，以标准零管调节零点，于550nm 波长处测吸光度，根据亚硝酸盐标准曲线计算还原效率。

④计算 10020232.1＝32××m X ………………………………………(2) 式中：X 2——还原效率，％；
20——硝酸盐的质量，μg； m 3——20μg 硝酸盐还原后测得亚硝酸盐的质量，μg；
1.232——亚硝酸盐换算成硝酸盐的系数。

9.过程简述
9.1.样品制备
同（4.1）。

9.2.测定(用镉柱法或镉粉法还原硝酸盐为亚硝酸盐)
9.2.1.甲法(镉柱法)：经活化的镉柱先加25mL 氯化铵缓冲液，至液面接近海绵镉时，准确吸取（4.1）的样品滤液10.0mL，加入镉柱还原。

以下按8.7.2自“控制流速3～5mL/min”起依法操作。

9.2.2.乙法(镉粉法)：准确吸取4.1的样品滤液10.0mL，置于盛有高度5mL 镉粉的25mL 带塞刻度试管中。

自“加入5mL 氯化铵缓冲液…”按8.7.3依法操作。

注：蔬菜、腌菜类食品中硝酸盐含量较高，可根据样品中硝酸盐的实际含量，将样品溶液稀释至适当浓度。

10.结果计算 0001)/(0001232.1)(＝3
4465
3××××V V m m －m X ………………………………………(3) 式中：X 3——样品中硝酸盐的含量，mg/kg； m 4——样品的质量，g；
m 5——还原后测得亚硝酸钠的质量，μg；m 6——直接测得亚硝酸盐的质量，μg；
1.232——亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数。

` V 3——样品处理液总体积，mL；
V 4——测定用样液体积，mL。

11.允许差
相对偏差≤10％。

第二部分：示波极谱法(亚硝酸盐测定)
12.原理概要
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性的条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在弱碱性条件下再与8-羟基喹啉偶合形成橙色染料，该偶氮染料在汞电极上还原产生电流，电流与亚硝酸盐的浓度呈线性关系，可与标准曲线比较定量。

13.主要仪器和试剂
13.1. 主要试剂
亚铁氰化钾溶液：称取106.0g 亚铁氰化钾晶体，用水溶解，并稀释至1000mL。

乙酸锌溶液：称取220.0g 乙酸锌晶体，加30mL 冰乙酸溶于水，并稀释至1000mL。

饱和硼砂溶液：称取5.0g 硼酸钠晶体，溶于100mL 热水中，冷却后备用。

对氨基苯磺酸溶液(8g/L)：称取2g 对氨基苯磺酸，用热水溶解，再加25mL 盐酸(1.0mol/L)，移至250mL 容量瓶定容。

8-羟基喹啉溶液(1g/L)：称取0.250g8-羟基喹啉，加4mL 盐酸(0.1mol/L)和少量水溶解，移至250mL 容量瓶稀释至刻度。

EDTA 溶液(0.10mol/L)：称取3.722g EDTA(C 10H 14N 2O 8Na·2H 2O)，加水30mL 溶解，转入
100mL 容量瓶中用水稀释至刻度。

氨水(5％)：吸取28％的浓氨水5.00mL 于100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.1000g 亚硝酸钠于硅胶干燥器中24h，加水溶解移入500mL 容量瓶中定容，此溶液每毫升相当于200μg 亚硝酸钠。

亚硝酸钠标准使用液：准确吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL 于200mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg 亚硝酸钠。

再取10.00mL 该稀释液于100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.5μg 的亚硝酸钠。

13.2.仪器
小型绞肉机、JP-2A 或JP-1A 示波极谱仪。

14.过程简述
14.1.样品处理
称取5.000g 经绞碎混匀的样品(午餐肉，火腿肠可称10.00～20.00g)，置于50mL 烧杯中，加12.5mL 硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃的水300mL 将样品洗入500mL 容量瓶中，于沸水浴中加热15min 取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入5mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL 乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液50mL，滤液备用。

14.2.测定
吸取3mL 上述滤液于10mL 容量瓶(或比色管)中，另取0，0.50，1.00，1.50，2.00，
2.50，
3.00mL 亚硝酸钠标准溶液于10mL 容量瓶(或比色管)中。

于标准与样品管中分别加入0.20mLEDTA 溶液(0.10mol/L)，1.50mL 对氨基苯磺酸溶液(8g/L)，混匀，静止3～4min 后各加入1.00mL8－羟基喹啉溶液(1g/L)和0.5mL 氨水(5％)，用水稀释至刻度，混匀，静止10～15min，将试液全部转入电解池中(10mL 小烧杯)。

在示波极谱仪上采用三电极体系进行测定。

测定参考条件：原点电位调节在－0.2V；倍率为0.1(含量高，倍率高，倍率选择在0.1以上；反之，倍率选择在0.1以下)；电极开关拨至三电极、导数档；测量开关拨至阴极。

将三电极插入电解池中，每隔7s 仪器自行扫描一次，在荧光屏上记录－0.56V 左右(允许电位波动10～20mV)的极谱波高，绘制标准曲线比较。

15.结果计算 00010001)/(0001＝5
6784××××V V m m X (4)
式中：X 4——样品中亚硝酸盐的含量，g/kg；
V 5——样品溶液的总体积，mL； m 8——测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg；
V 6——测定用样液的体积，mL； m 7——样品质量，g。

16.允许差
相对偏差≤10％。

17.来源：
中国国家标准：GB/T5009.33—1996。