实验一 叶绿体色素的分离及理化性质测定

实验一叶绿体色素的分离及理化性质测定实验目的：
1.了解叶绿体的组成及结构特点；
2.掌握分离叶绿体的实验方法；
3.测定叶绿体色素的吸收光谱，了解叶绿体色素的化学结构；
4.学习色素溶液的制备及测定吸收光谱的方法。

实验原理：
叶绿体是植物细胞中的一种特殊细胞器，它的主要功能是光合作用，能够吸收光能并
将其转化为有机物质。

叶绿体中含有一系列的叶绿素和其他色素，这些色素的共同作用是
吸收不同波长的光能，并将其转化为化学能。

为了分离叶绿体的色素，我们需要将植物细胞破碎，并利用离心力将叶绿体分离出来。

离心力的大小决定了离心上清液中所包含的叶绿体数量，因此，离心参数的选择非常重
要。

得到叶绿体后，我们可以使用乙醇或其他溶剂将其色素提取出来。

叶绿素a是叶绿体
中最主要的色素，其化学结构为卟啉结构，含有一个镁原子。

叶绿体中还含有其他种类的
叶绿素和类胡萝卜素等色素，它们的化学结构虽然不同，但都具有吸收光谱。

实验步骤：
1.取适量新鲜菠菜叶子，用冰冷的磷酸盐缓冲液冲洗干净，去除表面的灰尘和其他杂质。

将菠菜叶子放入离心管中，加入等体积的砂糖缓冲液，用玻璃棒捣碎成细胞浆状，避
免破坏叶绿体。

将离心管置于离心机中，先进行低速离心（2000g）10min，离心后得到上
清液，然后进行高速离心（10000g）15min，此时在离心管中可见下沉的绿色沉淀。

用吸管小心地将上清液吸走，然后将叶绿体沉淀用1ml冷洗涤液溶解。

2.将叶绿体溶液转移到玻璃细胞中，在可见分光光度计上分别测定叶绿体吸收光谱。

用叶绿体洗涤液作为空白对照。

记录各波长下吸光度值，绘制出叶绿体色素的吸收光谱曲线。

3.将等量的叶绿素a和β-胡萝卜素分别溶解于乙醇中，测定它们的吸收光谱，并绘
制出吸收光谱曲线。

将这些谱线与叶绿体谱线进行比较，确定叶绿体中含有的其他色素种类。

实验结果：
叶绿体色素的吸收光谱曲线如下图所示，其中叶绿素a的吸收峰位于675nm和450nm 处，其它叶绿色素和类胡萝卜素的吸收峰位于不同波长处。

比较叶绿体谱线和其他色素的吸收曲线后，发现叶绿体中还含有叶绿素b和类胡萝卜素。

结论：
本实验通过分离叶绿体，测定其色素的吸收光谱，进一步了解叶绿体的组成及结构特点，深入了解叶绿体中的色素种类和化学结构。

此外，掌握了色素溶液的制备及测定吸收光谱的方法，为今后相关实验打下了坚实的基础。