一株甜瓜枯萎病拮抗菌的筛选、鉴定及生防效果

中国瓜菜
2023，36（12）：
26-32
收稿日期：2023-08-08；修回日期：2023-10-26
基金项目：宁波市公益性科技计划项目（2022S114）；浙江省西甜瓜良种育繁推科技创新平台（ZJ2019-80）；国家西甜瓜产业技术体系（nycytx-36）
作者简介：郝芳敏，女，助理研究员，研究方向为甜瓜抗病育种。

E-mail ：******************通信作者：王毓洪，男，研究员，研究方向为瓜菜育种与栽培推广。

E-mail ：****************
甜瓜是世界十大水果之一，也是我国广泛栽种的经济作物之一。

在甜瓜种植面积不断扩大、产量和经济效益稳步上升的同时，甜瓜病害却日益严重，特别是甜瓜枯萎病、根腐病、蔓枯病等病害，极大地影响了甜瓜的产量和品质，限制甜瓜产业的可
持续发展。

其中，甜瓜枯萎病由尖孢镰刀菌甜瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp.melonis ）引起，是一种土传病害，在甜瓜全生育期均可发生，通常造成瓜田植株大片死亡[1]。

甜瓜根腐病和黑点根腐病分
别是由腐皮镰刀菌（F .solani ）
[2]
和坎诺单孢菌一株甜瓜枯萎病拮抗菌的筛选、鉴定及生防效果
郝芳敏1，董文杰2，臧全宇1，马二磊1，丁伟红1，王毓洪1
（1.宁波市特色园艺作物品质调控和抗性育种重点实验室·宁波市农业科学研究院
浙江宁波
315040；
2.浙江万里学院
浙江宁波
315040）
摘要：为获得对甜瓜病原菌具有生防潜力的菌株，采用稀释涂平板和分子鉴定的方法，从连续多年种植甜瓜大棚
的土壤中分离获得菌株Bc1-20，鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）。

为筛选到对甜瓜多种病害的病原菌具有拮抗作用和对甜瓜具有促生作用的菌株，采用平板对峙法、苗期灌根和盆栽接种试验。

结果表明，Bc1-20对甜瓜多种真菌病害的病原菌均有抑制作用，例如，尖孢镰刀菌甜瓜专化型（Fusarium oxysporum f.sp.melonis ）、黑点根腐病菌（Monosporascus cannonballus ）、蔓枯病菌（Stagonosporopsis cucurbitacearum ）、腐皮镰刀菌（F .solani ）和亚洲镰刀菌（F .asiaticum ）；Bc1-20处理甜瓜幼苗的茎粗、茎长、鲜质量、子叶长宽及最大真叶的长和宽方面都极显著高于空白对照，表明铜绿假单胞菌Bc1-20对甜瓜幼苗有促生作用；Bc1-20处理的甜瓜幼苗枯萎病的病情指数为40.80，空白对照组的病情指数为85.65，Bc1-20处理的相对防治效果为52.34%。

综上，铜绿假单胞菌Bc1-20具有生防潜力，可很好地防治甜瓜枯萎病。

关键词：甜瓜；铜绿假单胞菌；Bc1-20；甜瓜枯萎病；生防潜力中图分类号：S652
文献标志码：A
文章编号：1673-2871（2023）12-026-07
Screening,identification and biocontrol effect of antagonistic bacteria against melon Fusarium wilt
HAO Fangmin 1,DONG Wenjie 2,ZANG Quanyu 1,MA Erlei 1,DING Weihong 1,WANG Yuhong 1
（1.Ningbo Key Laboratory of Characteristic Horticultural Crops in Quality Adjustment and Resistance Breeding/Ningbo Academy of Agricultural Sciences,Ningbo 315040,Zhejiang,China;2.Zhejiang Wanli University,Ningbo 315040,Zhejiang,China ）
Abstract:To obtain effective biocontrol fungi against melon pathogens,dilute coated plates and molecular identification methods were used,strain Bc1-20was isolated from the melon greenhouse planted for many years,and was identified as Pseudomonas aeruginosa .In order to screen the strains that have antagonistic and growth promoting effects,the experi-ments of plate confrontation,root irrigation and pot inoculation method were carried out.The result showed that Bc1-20had good inhibitory effect on the pathogen of various fungal diseases of melon,such as Fusarium oxysporum ,Monos-porascus cannonballus ,Stagonosporopsis cucurbitacearum ,F .solani and F .asiaticum ,and showed strong antagonistic activity on the plate.Furthermore,P .aeruginosa Bc1-20could promote the growth of melon seedlings,and significantly increased the stem diameter,fresh weight,length and width of cotyledon and the length and width of the largest true leaf of melon seedlings compared with the control.In addition,pot experiment also showed that it had biocontrol potential to control the melon fusarium wilt and the relative control effect was 52.34%.P .aeruginosa Bc1-20has the potential of biocontrol and can effectively control muskmelon wilt.
Key words:Melon;Pseudomonas aeruginosa ;Bc1-20;Fusarium wilt;Biocontrol potential
·
·26
第12
（Monosporascus cannonballus）[3]引起的土传病害，均可引起根腐病，造成甜瓜藤蔓急性凋萎，严重时甚至绝收。

甜瓜蔓枯病是由Stagonosporopsis cucurbitacearum引起的病害，主要危害茎蔓和叶片，该病发病极快，一旦发生蔓延很难控制[4]。

由亚洲镰刀菌（ticum）引起的甜瓜果腐病，多危害半成熟和成熟的果实，发病初期果实呈水渍状病斑，后期内部开始腐烂，该病害初期不易发现，不能够及时进行防治，一旦发生，严重影响果实的品质和产量[5-6]。

目前针对上述病害主要使用传统的化学防治方法，但是会造成环境污染和农药残留超标等问题，对人们的健康及生态环境造成严重的危害，甚至可能导致社会普遍关注的食品安全问题。

因此，急需采用高效、无公害的生物技术防治甜瓜病害，生物防治具有安全、绿色、高效等优点，对甜瓜产业的可持续发展具有重要意义。

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种革兰氏阴性菌，是植物根际微生态和土壤中的优势微生物种群之一，该菌能分泌多种拮抗植物病原菌的代谢产物[7]，对维持其生态适应性和在复杂的根际环境中繁殖生存有重要意义，可以防治多种植物真菌或细菌类病害，作为新型生物农药已在防治植物病害中广泛应用[8]。

而同时对甜瓜枯萎病菌、黑点根腐病菌、蔓枯病菌、腐皮镰刀菌和亚洲镰刀菌同时有效的生防菌较少，因此，筛选对甜瓜不同病原菌同时有效的生防菌株具有重要的理论和实践意义。

笔者的研究在连续多年种植甜瓜大棚的土壤中分离到一株铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）Bc1-20，对甜瓜多种病原菌均有抑制作用，平板拮抗活性很强，于是进一步测定了Bc1-20对甜瓜幼苗的促生作用及甜瓜枯萎病的防治效果，以期为甜瓜病害生防菌剂的开发应用奠定基础，为甜瓜病害的绿色防控提供技术保障。

1材料与方法
1.1材料
供试病原菌：尖孢镰刀菌甜瓜专化型（F.oxys-porum）TG-5、黑点根腐病菌（M.cannonballus）Mc-30、蔓枯病菌（S.cucurbitacearum）MF-17[9]、腐皮镰刀菌（F.solani）NG-3[10]和亚洲镰刀菌（ti-cum）Fa-25[11]等5种，均由笔者实验室分离获得，在PDA培养基上进行活化，作为供试菌株。

供试甜瓜品种为厚皮甜瓜材料48号，由宁波市农业科学研究院提供，所有试验在宁波市特色园艺作物品质调控和抗性育种重点实验室、宁波市高新农业技术实验园区完成，时间是2023年4—7月。

NA培养基：牛肉浸膏10g、蛋白胨5g、葡萄糖20g、琼脂15g、水1000mL，pH7.0。

NB培养基：牛肉浸膏10g、蛋白胨5g、葡萄糖20g、水1000mL，pH7.0。

PDA培养基：马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂15g、水1000mL。

1.2方法
1.2.1铜绿假单胞菌Bc1-20的分离和鉴定铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）Bc1-20是从宁波市高新农业技术实验园区的连续多年种植甜瓜大棚的土壤中分离得到的，具体做法为：取甜瓜大棚的土壤1g 放到1.5mL的无菌水中，混匀，然后稀释涂平板，挑取单菌落在NB培养基中，温度28℃、转速150r·min-1条件下进行摇培，再次对单菌落进行划线纯化。

利用在NB培养基中28℃摇培24h的菌液分别对病原菌进行对峙培养，将具有拮抗作用的细菌采用甘油保存在-70℃的冰箱内，铜绿假单胞菌Bc1-20于2023年2月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26547。

1.2.2铜绿假单胞菌Bc1-20的分子鉴定铜绿假单胞菌Bc1-20的分子鉴定过程包括：采用50μL的PCR反应体系进行16S rDNA的扩增、测序及系统发育进化分析。

拮抗细菌的基因组DNA用全式金细菌基因组试剂盒提取。

扩增菌株的16S rDNA采用细菌通用引物（27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCT-CAG-3’；1492R：5’-GGTTACCTTGTTAC-GACTT-3’）进行扩增[12]，扩增的PCR产物采用1%的琼脂糖凝胶电泳法检测，对阳性PCR产物进行纯化、克隆和测序[13]。

将测得的16S rDNA序列在NCBI数据库（https：///）进行核酸比对，利用软件MEGA7.0[14]构建系统进化树，明确拮抗菌的分类地位。

1.2.3铜绿假单胞菌Bc1-20的生长曲线和活菌数测定将铜绿假单胞菌Bc1-20菌株取出，在NA平板上划线活化，转代1次后挑取单菌落接种于NB液体培养基（100mL）摇培，在温度28℃、转速150r·min-1条件下摇培，每间隔4h取样，直至56h结束，取样测量OD600值和活菌数等数据。

1.2.4铜绿假单胞菌Bc1-20的防病拮抗效果试验采用平板对峙法进行防病拮抗菌株的筛选，在
·
·27
中国瓜菜第36卷
PDA培养基上活化尖孢镰刀菌甜瓜专化型菌、蔓枯病菌、黑点根腐病菌、腐皮镰刀菌和亚洲镰刀菌等病原菌，用直径5mm的打孔器在新鲜的菌落边缘打孔，挑取新鲜菌丝块接种在新的PDA平板中心，用接种环挑取少量新鲜绿假单胞菌Bc1-20菌液于PDA培养基的两端划线，划线处距PDA端部距离为1cm，封口膜封好后置于25℃培养箱中黑暗培养，10d之后统计试验结果，每个菌株3个皿。

对照组只接种病原菌，不接种绿假单胞菌Bc1-20[15]。

1.2.5铜绿假单胞菌Bc1-20的促生试验在温室大棚中，利用盆栽试验进行拮抗细菌对甜瓜幼苗的促生试验，在甜瓜种子播种3、7、10d后，用拮抗细菌配置的108cfu·mL-1悬浮菌液对甜瓜幼苗进行灌根：用移液器将悬浮菌液沿甜瓜幼苗根部灌入，每棵幼苗用1mL菌液处理，共计150棵，同时以NB 培养基处理的甜瓜幼苗作为对照。

17d后，拔出完整的甜瓜幼苗，每个处理取生长一致的30棵幼苗，只保留地上部分，测量幼苗的茎粗、茎长、子叶长和宽、每株幼苗中最大真叶的长和宽及地上部分鲜质量，统计分析数据。

1.2.6甜瓜枯萎病的盆栽生防试验在甜瓜播种后的3、7、10d，用108cfu·mL-1的铜绿假单胞菌Bc1-20悬浮菌液对甜瓜幼苗进行灌根，每棵幼苗用1mL菌液处理。

每个处理对应1个穴盘，每个穴盘50株，设置3次重复。

同时用NB培养基处理的甜瓜幼苗作为CK组。

甜瓜枯萎病接种：选用的甜瓜品种为对甜瓜枯萎病感病品种甬148（由宁波市农业科学研究院培育），在2叶1心时，以50株幼苗为1组，3次重复，左边一半不接种，右边一半接种。

将幼苗从穴盘中取出，轻度损伤根系，洗净根部，在4×106个·mL-1的枯萎病菌孢子液中浸根15min，根系全部浸入，中间摇动2次，不接种的在清水中浸根15min。

再移栽至营养土中，接种前3d遮阴，温度保持在25℃，3d缓苗后撤掉遮阳网，在温室正常管理，15d后调查发病情况，统计分析病情指数和相对防治效果[16]。

鉴定标准：整株无病症为0级；晴天中午子叶萎蔫或部分子叶、真叶轻微萎蔫为1级；1片真叶萎蔫或子叶较重萎蔫为2级；子叶及真叶萎蔫，阻碍发育为3级；整株萎蔫，60%以上枯死，心叶成活为4级；整株严重萎蔫并枯死为5级[17]。

病情指数＝
∑（级数×该级株数）/（总株数×最高级数）×100；相对防治效果/%＝（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100。

2结果与分析
2.1Bc1-20的分子鉴定及系统发育树分析
从连续多年种植甜瓜大棚的土壤中分离获得1株对甜瓜病原菌具有拮抗作用的细菌，编号为Bc1-20，其在NA培养基上可见边缘光滑的圆形、淡绿色菌落，在NB培养基中进行摇培24h后的菌液明显为绿色（图1）。

注：B中左边为Bc1-20的摇培菌液呈绿色，右边是作为对照的NB培养基。

图1Bc1-20在NA培养基上的菌落形态（A）和在NB培养基中的摇培情况（B）
Fig.1Colony morphology of strain Bc1-20on NA medium（A）and was shaken in NB medium（B）
以菌株Bc1-20的基因组DNA为模板，用细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增，经连接、转化、测序，获得铜绿假单胞菌Bc1-20的16S rDNA序列为1500bp。

将测序结果在NCBI上进行BLAST 比对，结果表明其与菌株铜绿假单胞菌（P.aerugino-sa）SI1（16S，GenBankAcc.OQ615324.1）的同源性最高，为100%。

利用MEGA7对测序获得的序列和其他相近的序列进行系统发育树的构建，系统发育B
··28
第12
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
0102030405060
O
D
值
1
2
3
4
5
6
7
8
9
菌
落
数
/
（
×
1
8
c
f
u
·
m
L
-
1
）
时间/h
结果表明，铜绿假单胞菌Bc1-20在NB液体培养
基中摇培4~20h为对数生长期，24h后进入稳定期，
Bc1-20在24h时的菌落数有7.8×108cfu·mL-1（图3）。

2.3铜绿假单胞菌Bc1-20的防病拮抗效果
将铜绿假单胞菌Bc1-20与甜瓜多种病原菌进行
对峙培养，在对峙培养10d后，Bc1-20对尖孢镰刀
图2基于16S-rRNA构建的拮抗菌株Bc1-20系统进化树
Fig.2Phylogenetic tree of antagonistic strain Bc1-20based on16S-rRNA
树结果表明，菌株Bc1-20与铜绿假单胞菌（P.aeru-
ginosa）的菌株聚为一支，所以认为Bc1-20属于铜
绿假单胞菌（P.aeruginosa）（图2）。

2.2铜绿假单胞菌Bc1-20的生长曲线和活菌数测定
将Bc1-20按照2%的接种量接种于100mL的
NB液体培养基中，每间隔4h取样测量OD600值，
图3Bc1-20在NB中的生长情况（A）和在28℃下随时间变化的菌落数（B）
Fig.3Growth curve of Bc1-20in NB medium over time（A）and change
of colony number of Bc1-20with time at28℃（B）
菌甜瓜专化型（F.oxysporum）、蔓枯病菌（S.cucurbita-
cearum）、黑点根腐病菌（M.cannonballus）、腐皮镰刀
菌（F.solani）和亚洲镰刀菌（ticum）的生长均
有抑制作用，在对峙培养过程中，培养皿中均出现了
明显的拮抗带，后期对峙的病原菌也无法再生长。

试验
结果证明，铜绿假单胞菌Bc1-20菌株对甜瓜多种病原
菌抑制作用明显，具有潜在的生防效果（图4）。

2.4铜绿假单胞菌Bc1-20的促生试验
用铜绿假单胞菌Bc1-20的菌悬液处理甜瓜幼
苗，17d后进行数据测量，结果表明，其在茎粗、茎
长、地上部鲜质量、子叶长和宽及最大真叶的长和
宽方面都极显著高于CK，表明铜绿假单胞菌
Bc1-20对甜瓜幼苗有促生作用（图5，表1）。

2.5甜瓜枯萎病的盆栽生防试验
用铜绿假单胞菌Bc1-20处理甜瓜幼苗后，进
行甜瓜枯萎病的接种试验，接种15d后调查统
计，结果表明，铜绿假单胞菌Bc1-20处理的甜瓜
幼苗枯萎病的病情指数为40.80，CK的病情指数
Bc1-20
KF746957.1Pseudomonas aeruginosa
MZ648186.1Pseudomonas aeruginosa
JQ773431.1Pseudomonas aeruginosa
HQ288928.1Pseudomonas aeruginosa
JF708942.1Pseudomonas aeruginosa
GU269267.1Pseudomonas aeruginosa
GU447238.1Pseudomonas aeruginosa
100
99
KP641168.1Pseudomonas fluorescens
MT066068.1Pseudomonasfluorescens
MT712234.1Pseudomonasfluorescens
NR115715.1Pseudomonas fluorescens
FR682931.1Stenotrophomonas sp.
HQ877451.1Stenotrophomonas sp.
EF198252.1Stenotrophomonas sp.
EF474078.1Paenibacillus polymyxa
KM087339.1Paenibacillus polymyxa
EF656457.1Paenibacillus polymyxa
MT163461.1Paenibacilluspolymyxa
LT223607.1Paenibacillus polymyxa
100
100
95
100
58
45
99
铜绿假单胞菌
荧光假单胞菌
寡养单胞菌属
多粘类芽孢杆菌
0.020
时间/h时间/h
·
·29
中国瓜菜第36卷
为85.65，用铜绿假单胞菌Bc1-20处理的相对防治效果为52.34%。

由此可见，铜绿假单胞菌
Bc1-20对甜瓜枯萎病具有一定的生防作用（图6、表2）。

注：A 为Bc1-20对甜瓜幼苗的促生效果对比图；B 为10棵离体甜瓜幼苗的促生效果对比图。

图5菌株Bc1-20对甜瓜幼苗的促生试验
Fig.5
Growth promotion test results of Bc1-20strain on melon seedlings
表1菌株Bc1-20对甜瓜幼苗生长的影响
Table 1
Effects of strain Bc1-20on the growth of melon seedlings
处理CK Bc1-20
茎粗/mm 2.52±0.223.24±0.31**
茎长/cm 5.02±0.437.73±0.49**
子叶长/cm 4.28±0.205.13±0.27**
子叶宽/cm 2.13±0.112.48±0.13**
最大真叶长/cm 3.81±0.306.88±0.69**
最大真叶宽/cm 3.60±0.496.92±0.67**
地上部鲜质量/g 1.48±0.123.17±0.10**
注：**表示在0.01水平与CK
差异极显著。

注：穴盘的左边25株为对照，右边25株为接种。

图6菌株Bc1-20对甜瓜枯萎病生防试验
Fig.6
Biological control of strain Bc1-20against melon Fusarium wilt
图4菌株Bc1-20对甜瓜不同病原菌的平板拮抗试验结果
Fig.4
Strain Bc1-20conducted plate antagonism tests against different pathogens in melon
对照
处理
蔓枯病菌尖孢镰刀菌腐皮镰刀菌黑点根腐病菌亚洲镰刀菌
CK
Bcl-20
CK
Bcl-20
A
B
CK
Bcl-20
·
·30
第12
表2Bc1-20处理相对防治效果
Table2Relative control effect of Bc1-20treatment
处理CK Bc1-20病情指数
85.65
40.80
相对防治效果/%
52.34
3讨论与结论
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是动物和人类的条件性致病菌[18]，但是，近年来，一些用于促生和防治植物病原菌的铜绿假单胞菌陆续被分离和鉴定，由于显著的抑菌活性而引起了研究者的极大关注。

例如铜绿假单胞菌31-2对烟草青枯病菌拮抗活性稳定，可在烟草根、茎和叶表面及内部定殖，对烟草青枯病具有很好的防治作用，菌液和活性物质粗提物分别具有39.50%和20.90%的防治效果[19]。

铜绿假单胞菌FJAT-346-PA对香蕉枯萎病病原菌具有良好的抑制作用，在香蕉组培苗、盆栽苗及大田植株体内定殖，对香蕉有明显的促生长作用，对香蕉枯萎病具有较好的防治效果，盆栽防效和田间防效分别为83.67%和82.00%[20]。

铜绿假单胞菌F13不仅对豆角白粉病具有良好的防治效果，而且具有很好的促生效果，株高、叶片数和茎粗均高于对照组，且产量高于对照组39.68%[21]。

在笔者的研究中，铜绿假单胞菌Bc1-20处理的甜瓜幼苗茎粗、茎长、地上部鲜质量、子叶及最大真叶大小都极显著高于对照，具有一定的促生作用，由于根系在拔出穴盘时容易断根，并没有进行根系强弱的比较。

此外，铜绿假单胞菌还对昆虫和线虫具有一定的抑制效果，例如对松墨天牛幼虫具有杀虫活性[22]，铜绿假单胞菌NZM13-11能够高效地杀死马尾松内的松材线虫，具有防控松材线虫病的可能性[23]。

目前，铜绿假单胞菌在葫芦科作物上的应用比较少，1996年分离于上海郊区甜瓜根际的铜绿假单胞菌M18可抑制甜瓜蔓枯菌生长[24]，分泌的抗真菌物质PCA可以有效防治瓜类枯萎病[25]，使用M18活菌浸种处理黄瓜种子以及在大棚根基土壤浇灌的试验中，黄瓜枯萎病相对于对照降低70%~ 80%[26]，霜霉病的发病率和病情指数均下降70%左右[27]。

笔者研究的铜绿假单胞菌Bc1-20对尖孢镰刀菌引起的甜瓜枯萎病的相对防治效果为52.34%，但未做对蔓枯病菌、腐皮镰刀菌、黑点根腐病菌、亚洲镰刀菌等病菌引起的其他病害的盆栽防效试验，仍需进一步验证完善。

笔者研究分离获得的铜绿假单胞菌Bc1-20对甜瓜多种病害病原菌具有抑制作用，包括尖孢镰刀菌甜瓜专化型病菌、黑点根腐病菌、蔓枯病菌、亚洲镰刀菌和腐皮镰刀菌等病原菌；Bc1-20对甜瓜幼苗有促生作用，包括甜瓜幼苗的茎粗、茎长、鲜质量、子叶长和宽及最大真叶的长和宽方面都极显著高于对照；Bc1-20对甜瓜枯萎病具有良好的生防潜力，Bc1-20处理的甜瓜幼苗枯萎病的病情指数为40.80，对照组的病情指数85.65，相对防治效果为52.34%，可很好地防治甜瓜枯萎病。

参考文献
[1]刘春艳，王万立，郝永娟，等．大棚甜瓜枯萎病的发生及综合防
治[J]．农业科技通讯，2010（1）：171-172．
[2]杨颖，耿丽华，王建设，等．甜瓜根腐病病原分离与抗源鉴定[J]．
华北农学报，2010，25（4）：218-220．
[3]严蕾艳，王迎儿，邢乃林，等．浙江多地发现坎诺单孢菌引起的
甜瓜急性凋萎[J]．浙江农业科学，2021，62（11）：2251-2252．[4]高天一，郝芳敏，臧全宇，等．瓜类蔓枯病研究进展[J]．中国瓜
菜，2020，33（6）：1-5．
[5]王燕，王春伟，王琳，等．甜瓜镰刀菌果腐病新病原菌Fusarium
incarnatum的鉴定及生物学特性[J]．园艺学报，2019，46（3）：529-539．
[6]肖敏，吉训聪，王运勤，等．海南岛甜瓜镰刀菌果腐病药剂防治
研究[J]．长江蔬菜，2011（2）：63-65．
[7]GROSS H，LOPER J E．Genomics of secondary metabolite pro-
duction by Pseudomonas spp．[J]．Natural Products Report，2009，26（11）：1408-1446．
[8]何延静，胡洪波，许煜泉，等．新型生物农药藤黄绿脓菌素[J]．
农药，2006，45（3）：155-157．
[9]郝芳敏，臧全宇，马二磊，等．甜瓜多种真菌病害拮抗细菌NB-
melon-1的鉴定及其促生和生防效果[J]．中国瓜菜，2021，34（7）：14-19．
[10]郝芳敏，严蕾艳，臧全宇，等．浙江省甜瓜根、叶部镰孢菌种类
的分离与鉴定[J]．中国瓜菜，2020，33（11）：13-17．
[11]HAO F M，ZANG Q Y，DING W H，et al．First report of fruit
rot of melon caused by Fusarium asiaticum in China[J]．Plant
Disease，2021，105（4）：1225．
[12]林玲，金中时，马长文，等．棉花黄萎病生防内生细菌Jaascd的
鉴定及田间防效[J]．江苏农业学报，2010，26（1）：65-69．[13]WU M D，ZHANG L，LI G Q．Genome characterization of a
debilitation-associated mitovirus infecting the phytopathogenic
fungus Botrytis cinerea[J]．Virology，2010，406（1）：117-126．[14]KUMAR S，STECHER G，TAMURA K．MEGA7：Molecular
evolutionary genetics analysis version7．0for bigger datasets[J]．Molecular Biology and Evolution，2016，33（7）：1870-1874．[15]王梅菊．生防细菌的分离、筛选及生防潜能评估[D]．武汉：华
中农业大学，2018．
[16]闫闻，王喜庆，贾云鹤，等．西瓜枯萎病抗性鉴定技术方案[J]．
中国瓜菜，2020，33（1）：76-78．
[17]宋英，张国芹，刘凤军．不同黄瓜品种对枯萎病、白粉病及霜霉
病的抗性鉴定[J]．江苏农业科学，2012，40（7）：121-122．
·
·31
中国瓜菜第36卷
[18]BREIDENSTEIN E B M，DE LA FUENTE-NUNEZ C，HAN-
COCK R E W．Pseudomonas aeruginosa：All roads lead to resis-
tance[J]．Trends in Microbiology，2011，19（8）：419-426．[19]胡军华，张伏军，蓝希钳，等．烟草根际细菌铜绿假单胞菌
swu31-2的定殖能力及其对烟草青枯病的防治作用[J]．植物
保护，2009，35（5）：89-94．
[20]余超，肖荣凤，刘波，等．生防菌FJAT-346-PA的内生定殖特性
及对香蕉枯萎病的防治效果[J]．植物保护学报，2010，37（6）：493-498．
[21]牟亚妮，徐卓吟，翁小倩，等．铜绿假单胞菌BRC-CXG5菌株
的分离鉴定及其对松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）幼虫的杀虫活性[J]．生物技术进展，2016，6（1）：41-46．[22]梁卫驱，胡珊，黄皓，等．植物根际促生菌F13的筛选、鉴定及
对豆角促生、抗病的效果[J]．中山大学学报，[2023-10-23]，https://link．cnki．net/urlid/44．1752．N．20231023．0845．004．[23]贺丽娜，冯源，石慧敏，等．具有杀线活性马尾松内生细菌的筛
选与鉴定[J]．生物技术通报，2022，38（8）：159-166．
[24]WU D Q，YE J，OU H Y，et al．Genomic analysis and tempera-
ture-dependent transcriptome profiles of the rhizosphere origi-nating strain Pseudomonas aeruginosa M18[J]．BMC Genom-ics，2011，12：438．
[25]GE Y H，HUANG X Q，WANG S L，et al．Phenazine-1-carbox-
ylic acid is negatively regulated and pyoluteorin positively regu-lated by gacA in Pseudomonas sp．M18[J]．FEMS Microbiology Letters，2004，237（1）：41-47．
[26]许煜泉，唐玮宁，郑有丽，等．筛选假单胞菌株M18防治大棚
黄瓜枯萎病害[J]．上海交通大学学报，1999，33（2）：210-213．
[27]HU H B，XU Y，CHEN F，et al．Isolation and characterization of
a new Fluorescent pseudomonas strain that produces both phen-
azine1-carboxylic acid and pyoluteorin[J]．Journal of Microbiol-ogy and Biotechnology，2005，15（1）：86-90．
166（6）：1661-1669．
[16]古勤生，范在丰，PIERO R，等．小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白
基因的克隆及序列分析[J]．植物病理学报，2003，33（6）：498-502．
[17]HALL T A．BioEdit：A user-friendly biological sequence align-
ment editor and analysis program for Windows95/98/NT[J]．Nu-
cleic Acids Symposium Series，1999，41，（41）：95-98．
[18]KUMAR S，STECHER G，LI M，et al．MEGA X：Molecular
evolutionary genetics analysis across computing platforms[J]．Molecular Biology and Evolution，2018，35（6）：1547-1549．[19]刘莉铭，康保珊，彭斌，等．携带eGFP的ZYMV侵染性克隆
的构建及其侵染性[J]．植物病理学报，2021，51（5）：734-740．[20]邹文超，沈林林，沈建国，等．马铃薯Y病毒多基因系统发育
分析及其在株系鉴定中的应用[J]．遗传，2017（10）：918-929．[21]DESBIEZ C，LECOQ H．Evidence for multiple intraspecific re-
combinants in natural populations of Watermelon mosaic virus
（WMV，Potyvirus）[J]．Archives of Virology，2008，153（9）：1749-1754．
[22]王德富，崔丽艳，王舒婷，等．基于全基因组序列分析小西葫芦
黄花叶病毒的基因组特征和进化关系[J]．中国生物化学与分
子生物学报，2021，37（6）：811-821．
[23]GAL-ON A，ANTIGNUS Y，ROSNER A，et al．Infectious in vi-
tro RNA transcripts derived from cloned cDNA of the cucurbit
potyvirus，zucchini yellow mosaic virus[J]．Journal of General
Virology，1991，72（11）：2639-2643．
[24]GAL-ON A，MEIRI E，HUET H，et al．Particle bombardment
drastically increases the infectivity of cloned DNA of zucchini
yellow mosaic potyvirus[J]．Journal of General Virology，1995，76（12）：3223-3227．
[25]KANG M H，SEO J K，CHOI H，et al．Establishment of a sim-
ple and rapid gene delivery system for cucurbits by using engi-
neered of zucchini yellow mosaic virus[J]．Plant Pathology Jour-
nal，2016，32（1）：70-76．
（上接第15页）
·
·32。