脉动中维生素C的检测

3 实验步骤
3.1 标准液的制备 维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超
声波振荡5min， 再用0.1%醋酸定容至50mL， 为标准溶液。 分别吸取标准溶液0.05， 0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样 测定。 3.2样品的前处理 试样处理试样为液体时，吸取适量体积试样原液用20mL0.5%醋酸溶液作为 稀释液， 再用水定容至100mL;试样为固体时， 称取试样1g用0.1%醋酸溶液溶解(按 照试样液中维生素C含量0.5~700mg/L换算)，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定 容至100mL，过滤，用0.45m滤膜过滤，进样。 3.3 实验条件的选择 (1)色谱柱C18(250mm*4.6mm) (2)流动相含甲醇：含0.1%醋酸的水（10：90），流量1mL· min-1 (3)检测器紫外检测器，262nm (4)进样量20µL 3.4 测定 (1)将配制好的流动相甲醇、0.1%醋酸的水置于超声波发生器上脱气20min。 (2)根据实验条件，将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪 器液路和电路系统达到平衡时即可进样。 (3)依次分别吸取20µL的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图。
浓度（ug/ml）
4.3 样品色谱图
450 400 350 300 250 200 150 100 50 0 -50 0.0
峰面积
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.156/2535692
3.5
500
mV
4.0
4.5
min
根据色谱图，我们得知峰面积为 2535692， 代入标准曲线：y = 22028x + 31017， 得 x1=113.704μg/mL， 因此 1ml 脉动的维 C 含量为 C1=113.704 × 5=568.52μg/mL 所以 100mL 脉动中含有 56852μg/100mL 即 56.852mg/100mL
5 实验结果分析
本次实验测得脉动中维生素 C 含量约为 57mg/100mL，比脉动营养声称上的 20mg/100mL 高出了近三倍，如果先不考虑仪器、操作误差，那极大的可能是商
家为了预防储藏中损失，额外添加了比标签上多的维生素 C。例如资料显示一个 标明每 100mL 中维生素 C 含量在 25～50mg 之间的产品，部分产品的实测数值和 标注数值可能相差 2～3 倍之多，实测维生素 C 含量为 62 毫克。因此我们消费者 在购买这类维生素 C 饮料时也要多留个心眼，警惕吸收量超标。因此我们测得 57mg/100mL 的维生素 C 含量也不是没有道理。 通过本次实验，我了解到，液相色谱法具有许多优点，比如分离效率高，选 择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广； 与气相色谱法相比不受试 样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；且流动相种类多，可通过流动相的优 化达到高的分离效率；一般在室温下分析即可，不需高柱温。 但它的分析成本 高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长。 在实际操作中， 也会有不少因素影响液相色谱仪实验结果的准确性。如手动进样 的使用方法不当，就会引起色谱图问题，标准曲线无线性，重复性差等问题。通 过师兄介绍，手动进样的方法应该是要缓慢地将样品打入，再快速地抽出。此外 还应定期对进样阀清洗和保养，避免由进样阀引起的污染和堵塞，排除干扰峰， 提高准确性。 进样量要大于定量环的 3 倍以上，这样才能防止部分样品由溢流管 溢出从而导致定量分析的误差。 另外，液相色谱仪给我最大的感受就是，它对于样品、泵中的流动相都有着 非常高的要求，流动相是不能有杂质的，都是要通过抽滤才能使用，否则一些尘 埃、垃圾等污染物会堵塞泵，且会进入输液流道内，引起配管堵塞，单向阀污染 引起压力不稳，密封垫损坏导致系统漏液，柱塞干损坏引起无流动相流出，压力 波动。 因此保证输液泵的稳定和正常运行对分析结果的准确性、降低误差是非常 重要的。 此外如果色谱柱上没有恒温装置，通常会因温度引起保留时间的变化，应使 用柱温箱，另外保持室内最小温差。实验中我们并没有使用柱温箱，因此温度可 能会对实验结果造成影响。
4 实验结果
4.1 维生素 C 标品色谱图
3.162/2706922
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 500 450 400 350 300 250 2004.0
4.5
min
4.2 维 C 标准曲线
10660924 12000000 10000000 y = 22028x + 31017 R²= 0.9984 8000000 6000000 2961349 5508531 4000000 449694 2000000 0 165626 0 100 200 300 400 500 600
脉动中维生素 C 的检测
1 实验仪器与试剂
1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机 1.2 试剂 维生素 C 标准品、醋酸、超纯水、脉动
2 实验方法与原理
维生素 C 是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健 食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素 C 含量测定方 法的研究也较多。目前常规的维生素 C 含量测定方法有紫外分光光度法、碘量 法等，但是维生素 C 具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅 速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时 等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。 高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，且适用范围广， 特别对高沸点、 热不稳定有机及生化试样的高效分离分析具有极大的优势。能在 较短时间内完成对维生素 C 含量的测定。 在以维生素 C 标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素 C 含量。 （1）标准曲线方程式为：Y=aX+b （2）根据标准曲线方程得到计算公式：X1=(Y1-b)/a （X1 为样品中维 C 浓度，Y1 为样品峰面积） （3）最后求出：C1=X1×N （C1 为 1ml 脉动的维 C 含量，N 为所取脉动稀释倍数=100ml/所取脉动体积）