DNA提取过程及原理(共18张PPT)
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第一部分
DNA 提取过程及原理
❖ 盐溶法（萃取）
1研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放 出来。
（从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖 核蛋白。）
2利用DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液而 RNA能溶于0.14mol/L 的NaCl溶液这一性质, 将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞 液中分开。
，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极 的缓冲液得到交换。
❖ TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并 且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于 琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作 用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的 回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。
用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。
上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
❖ TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过 程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
❖ ③ 用苯酚处理，然后离心分层。DNA溶于 ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离
得到白色纤维状DNA沉淀。 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
2利用DNA不溶于0. 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 （从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖核蛋白。 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。
❖ 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等 杂质除去。去除蛋白的方法有 3种：
❖ ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性 蛋白质。用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于 上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
❖ ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白 ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。
DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。
质变性，从而使其与核酸分离 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
第二部分
核酸电泳
❖ TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电 泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分 子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁 移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时 用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段 时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小
3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。 DNA 提取过程及原理 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 （从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖核蛋白。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0. ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离 TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。 2利用DNA不溶于0. 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0. 1研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。 ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离
去除蛋白的方法有 3种：
出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
TAE的缺点是缓冲量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0.
DNA 提取过程及原理
❖ 盐溶法（萃取）
1研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放 出来。
（从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖 核蛋白。）
2利用DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液而 RNA能溶于0.14mol/L 的NaCl溶液这一性质, 将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞 液中分开。
，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极 的缓冲液得到交换。
❖ TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并 且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。TBE用于 琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作 用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的 回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。
用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。
上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
❖ TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过 程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的电泳中使用。
14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
❖ ③ 用苯酚处理，然后离心分层。DNA溶于 ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离
得到白色纤维状DNA沉淀。 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
2利用DNA不溶于0. 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 （从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖核蛋白。 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。
❖ 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等 杂质除去。去除蛋白的方法有 3种：
❖ ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性 蛋白质。用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于 上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。
❖ ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白 ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。
DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 ① 用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除 去变性蛋白质。
质变性，从而使其与核酸分离 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。
第二部分
核酸电泳
❖ TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电 泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分 子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁 移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时 用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段 时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小
3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。 DNA 提取过程及原理 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 3 分离得到核蛋白后，还需进一步将蛋白等杂质除去。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。 DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内， 吸出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可得到白色纤维状DNA沉淀。 （从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA， 即核糖核蛋白。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0. ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离 TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段时分离效果更好。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。 2利用DNA不溶于0. 用这种方法处理时，蛋白质停留在水相和氯仿相中间，而 DNA则溶于上层水相，用两倍体积的95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0. 1研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。 其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中 的迁移率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲 系统进行电泳。 ② 用 十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，从而使其与核酸分离
去除蛋白的方法有 3种：
出上层水相，加入两倍体积的95%乙醇即可 14mol/L 的NaCl溶液这一性质,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品破碎细胞液中分开。
TAE的缺点是缓冲量小，长时间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 14mol/L 的NaCl溶液而RNA能溶于0.