干细胞治疗骨关节炎的用途[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911159876.X
(22)申请日 2019.11.23
(71)申请人 博雅干细胞科技有限公司
地址 214092 江苏省无锡市滨湖区马山梅
梁路88号博雅干细胞公司
(72)发明人 肖海蓉　王正　刘冰　
(51)Int.Cl.
A61K 35/28(2015.01)
A61K 31/728(2006.01)
A61K 9/10(2006.01)
A61K 47/02(2006.01)
A61K 47/18(2006.01)
A61K 47/26(2006.01)
A61P 19/02(2006.01)
A61P 19/08(2006.01)
A61P 19/04(2006.01)
A61P 29/00(2006.01)C12N 5/073(2010.01)C12N 5/0775(2010.01) (54)发明名称
干细胞治疗骨关节炎的用途
(57)摘要
本发明涉及干细胞治疗骨关节炎的用途。

具
体的，本发明一方面涉及用于治疗骨关节炎和软
骨缺损的细胞治疗组合物，该组合物中包括：胎
盘间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、氯化钠、
和水，该细胞治疗组合物是按照包括如下步骤的
方法制备得到的：将透明质酸或其药用盐和氯化
钠加入水中溶解，任选地对该溶液进行除菌，获
得制剂的基质；将预先制得的间充质干细胞混悬
于该基质中，分装，即得；本发明还涉及所述细胞
治疗组合物的制备方法，以及它们的医学用途。

本发明方法呈现如说明书所述优异技术效果，例
如，本发明所得组合物在细胞复苏时呈现优良的
细胞复苏性能，细胞经历复苏过程的活力以及复
苏后细胞的存活稳定性方面，显著高于现有技术
方案。

权利要求书2页 说明书18页CN 110755452 A 2020.02.07
C N 110755452
A
1.用于治疗骨关节炎和软骨缺损的细胞治疗组合物，该组合物中包括：胎盘间充质干细胞、透明质酸或其药用盐、氯化钠、和水。

2.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其特征在于：
所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％～5％、3～4％或3％；
所述间充质干细胞的密度为2×107个/mL～5×107个/mL或3×107个/mL；
所述氯化钠的质量体积百分数为0.8％～1.0％或0.9％；
其中还包含氯化镁，例如其质量体积百分数为0.05％～0.1％或0.08％；和/或
还包含乙二胺四乙酸钙钠，例如其质量体积百分数为0.02％～0.05％或0.03％。

3.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其特征在于：
其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％、间充质干细胞的密度为3×107个/ mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％；
其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为4％、间充质干细胞的密度为5×107个/ mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％；和/或
其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为5％、间充质干细胞的密度为5×107个/ mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％。

4.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其特征在于：
(1)其中包含：胎盘间充质干细胞4×107个/mL、透明质酸钠4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.03％、麦芽糖醇0.4％、和注射用水；或者，
(2)其中包含：胎盘间充质干细胞2×107个/mL、透明质酸钠5％、氯化钠0.8％、氯化镁0.1％、乙二胺四乙酸钙钠0.02％、麦芽糖醇0.3％、和注射用水；或者，
(3)其中包含：胎盘间充质干细胞5×107个/mL、透明质酸钠3％、氯化钠1.0％、氯化镁0.05％、乙二胺四乙酸钙钠0.05％、麦芽糖醇0.5％、和注射用水；或者，
(4)其中包含：胎盘间充质干细胞3×107个/mL、透明质酸4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.04％、麦芽糖醇0.2％、和注射用水。

5.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其中所述透明质酸或其药用盐的分子量为400000～1000000。

6.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其中所述间充质干细胞为原代～第十代的间充质干细胞。

7.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其中所述的(胎盘来源)间充质干细胞的获取方法包括如下步骤：
(a)用PBS缓冲液充分冲洗胎盘小叶，以去除胎盘中残留的血液；
(b)将胎盘小叶剪成块状，加入含有组织消化酶的PBS缓冲液，再在37℃孵育消化；
(c)将组织块用铜网过滤，必要时研磨以促使过滤；
(d)将收集的过滤液离心，分离单个核细胞，再用MSC培养基悬浮所获得的细胞，然后在37℃、5％的CO2培养箱中培养；
(e)待散在细胞形成克隆后，挑取各克隆细胞，用MSC培养基分别培养，待细胞融合后，用胰酶消化传代，即得胎盘间充质干细胞。

8.根据权利要求1的细胞治疗组合物，其是按照包括如下步骤的方法制备得到的：
将透明质酸或其药用盐和氯化钠(以及任选的氯化镁和/或任选的乙二胺四乙酸钙钠)
加入水中溶解，任选地对该溶液进行除菌，获得制剂的基质；
将预先制得的间充质干细胞混悬于该基质中，分装，即得；
进一步的，
其制备过程是在无菌条件下进行的；
其制备过程中，在与间充质干细胞混和前所述基质的温度低于25℃；
其制备过程中，在温度低于25℃条件下将所述基质与间充质干细胞混和；
所述分装是将配制得到的细胞治疗组合物分装到预充注射器中，尤其是分装到一次性使用的预充注射器中；和/或
所述预充式注射器的针筒材质为高分子聚合物(例如聚丙烯)、活塞材质为橡胶。

9.制备权利要求1-8任一项所述细胞治疗组合物的方法，包括以下步骤：
将透明质酸或其药用盐和氯化钠(以及任选的氯化镁和/或任选的乙二胺四乙酸钙钠)加入水中溶解，任选地对该溶液进行除菌，获得制剂的基质；
将预先制得的间充质干细胞混悬于该基质中，分装，即得。

10.根据权利要求9的方法，其特征在于：
其制备过程是在无菌条件下进行的；
其制备过程中，在与间充质干细胞混和前所述基质的温度低于25℃；
其制备过程中，在温度低于25℃条件下将所述基质与间充质干细胞混和；
所述分装是将配制得到的细胞治疗组合物分装到预充注射器中，尤其是分装到一次性使用的预充注射器中；和/或
所述预充式注射器的针筒材质为高分子聚合物(例如聚丙烯)、活塞材质为橡胶。

干细胞治疗骨关节炎的用途
技术领域
[0001]本发明属于医药生物技术领域，其涉及用于治疗和/或预防急性和/或慢性骨关节病方法，该方法中使用的药物组合物，以及该组合物用于治疗骨关节炎的用途。

特别是涉及使用干细胞治疗骨关节炎的方法和组合物。

背景技术
[0002]骨关节炎是最常见的关节炎形式，其特征在于关节软骨、软骨下骨的缓慢退行性过程，并伴有边缘骨赘形成和低程度的炎症。

据信，慢性形式的骨关节炎影响到15％的人口。

其中，四分之一为严重残疾。

大多数骨关节炎病例的原因不明，并被称为“原发性骨关节炎”。

当骨关节炎的原因已知时，其被称为“继发性骨关节炎”。

继发性骨关节炎由其它疾病或情形引起。

可导致继发性骨关节炎的情形包括关节结构的反复性损伤或手术、出生时关节异常(先天性异常)、痛风、糖尿病和其它激素紊乱。

其它形式的关节炎包括系统性疾病，例如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)。

[0003]骨关节炎主要涉及髋部、膝部、脊柱和指/趾间关节。

骨关节炎的最常见症状是受影响关节在反复使用后产生疼痛。

关节疼痛通常在日间的晚些时候更加严重。

受影响关节可发生肿胀、发热以及发出咯吱声。

关节在长期不活动后也会发生疼痛和僵硬。

在严重的骨关节炎中，软骨垫的完全丧失导致骨间发生摩擦，造成静止时的疼痛或在有限运动时的疼痛。

[0004]骨关节炎的特征在于在数年间软骨发生缓慢的降解。

在正常软骨中，在基质的合成与降解之间存在微妙的平衡；但是在骨关节炎中，软骨的降解超过了合成。

合成与降解之间的平衡受年龄影响，并由滑膜和软骨细胞产生的几种因子(包括细胞因子、生长因子、聚集蛋白聚糖酶(aggrecanase)和基质金属蛋白酶)所调控。

除了水以外，胞外基质还含有蛋白聚糖，其由连接到透明质酸或其药用盐所形成之骨架上的糖胺聚糖形成，并包封(entrap)于胶原框架或纤丝基质(fibrillary matrix)中。

关节软骨中的一种重要蛋白聚糖是聚集蛋白聚糖(aggrecan)，其与透明质酸或其药用盐结合并有助于赋予软骨以可压缩性和弹性。

聚集蛋白聚糖被聚集蛋白聚糖酶所切割，这导致其降解以及随后的软骨侵蚀。

软骨基质中聚集蛋白聚糖的损失是骨关节炎(OA)中观察到的最初病理生理变化之一。

[0005]透明质酸或其药用盐为作为润滑剂和减震器的滑液提供粘弹性。

在滑液中，透明质酸或其药用盐覆盖关节软骨的表面并与胶原纤丝(collagen fibril)和硫酸蛋白聚糖共用软骨中的深部空间。

它保护软骨并阻止蛋白聚糖从软骨基质流失到滑液中，维持正常的软骨基质。

在患骨关节炎的膝关节滑液中，透明质酸或其药用盐、糖胺聚糖和硫酸角质素的浓度比正常膝关节滑液中要低。

此外，使用兔滑膜细胞的实验显示，促炎细胞因子IL-1β和TNF-α刺激透明质酸或其药用盐合成酶的表达，其可导致透明质酸或其药用盐在炎性条件下发生片段化。

外源透明质酸或其药用盐可有利于产生新合成的透明质酸或其药用盐。

透明质酸或其药用盐及衍生物已被用作骨关节炎治疗中的治疗性辅助物，用以提高关节连接表面的润滑度进而减少关节疼痛。

几个体外培养研究也表明，透明质酸或其药用盐通过抑
制由纤连蛋白片段介导之软骨溶解而具有有益的作用。

透明质酸或其药用盐还显示具有抗炎作用，以及对前列腺素合成以及蛋白聚糖释放和降解的抑制作用。

[0006]透明质酸或其药用盐(一种糖胺聚糖)被广泛地用于治疗膝部骨关节炎。

英国的两项一般性调查显示，约有15％患有骨关节炎的患者接受过透明质酸或其药用盐制备物的关节内治疗。

由于它具有粘弹性，因此可以取代滑液。

此外，它还可以减轻对疼痛的感知。

还报道了有益的分子作用和细胞作用。

透明质酸或其药用盐常常通过关节内注射来施用，然而有关其临床相关性的证据却存在矛盾。

现有技术中最近出版了系统性综述和统合分析(meta-analysis)，其作者得出的结论是，关节内的透明质酸或其药用盐充其量具有很小的作用，而具有临床意义的作用是指疼痛的视觉模拟评分提高至少15mm。

这些数据成为对骨关节炎患者关节内施用透明质酸或其药用盐的基础。

有时，在注射一年后才能观察到效用，并且在一些实验中必须每周进行3～5次注射。

[0007]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。

大量实验研究显示，间充质干细胞具有表皮细胞分化潜能，可促进受创皮肤的愈合。

骨髓源性间充质干细胞由于存在病毒污染的隐患，且随着供者年龄增长，其细胞数量和扩增、分化能力出现明显下降趋势，不适合批量制备。

而来源于人脐带、胎盘或羊膜的间充质干细胞，成功避开了胚胎干细胞来源缺乏、异体排斥、道德伦理等诸多限制，成为了骨髓源间充质干细胞的很好的替代物；它们具有自我更新、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞、血管内皮细胞分化；而且细胞在体外易于扩增，扩增后分化能力、增殖能力保持稳定，适合大规模制备。

[0008]已知有将间充质干细胞或透明质酸或其药用盐用于治疗骨关节炎的文献报道。

然而在将二者组合并且成功地应用于临床时，却需要面临诸多技术性问题。

因此，提供一种包含间充质干细胞和透明质酸或其药用盐并且可用于治疗骨关节炎的方法和组合物，仍然是本领域技术人员迫切期待的。

发明内容
[0009]本发明的另一目在于提供一种使用干细胞治疗骨关节炎的方法和组合物，特别是该细胞治疗组合物可以用于关节腔注射治疗骨关节炎和软骨缺损。

已经出人意料地发现本发明组合物具有优异的性能。

[0010]本发明是通过如下方案实现的。

[0011]在本发明的第一方面，提供了一种用于治疗骨关节炎和软骨缺损的细胞治疗组合物，该组合物中包括：间充质干细胞(可简称为MSC，其来源例如可以是脐带或胎盘)、透明质酸或其药用盐、氯化钠、和水。

[0012]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％～5％。

[0013]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3～4％。

[0014]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％。

[0015]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述间充质干细胞的密度为2×107个/mL～5×107个/mL。

[0016]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述间充质干细胞的密度为3×107个/mL。

[0017]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述氯化钠的质量体积百分数为0.8％～1.0％。

[0018]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述氯化钠的质量体积百分数为0.9％。

[0019]根据本发明的细胞治疗组合物，其中还包含氯化镁。

[0020]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述氯化镁的质量体积百分数为0.05％～0.1％。

[0021]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述氯化镁的质量体积百分数为0.08％。

[0022]根据本发明的细胞治疗组合物，其中还包含乙二胺四乙酸钙钠。

[0023]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述乙二胺四乙酸钙钠的质量体积百分数为0.02％～0.05％。

[0024]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述乙二胺四乙酸钙钠的质量体积百分数为0.03％。

[0025]根据本发明的细胞治疗组合物，其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％、间充质干细胞的密度为3×107个/mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％。

[0026]根据本发明的细胞治疗组合物，其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为4％、间充质干细胞的密度为5×107个/mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％。

[0027]根据本发明的细胞治疗组合物，其中透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为5％、间充质干细胞的密度为5×107个/mL、氯化钠的质量体积百分数为0.9％。

[0028]根据本发明的细胞治疗组合物，其特征在于：
[0029](1)其中包含：胎盘间充质干细胞4×107个/mL、透明质酸钠4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.03％、麦芽糖醇0.4％、和注射用水；或者，
[0030](2)其中包含：胎盘间充质干细胞2×107个/mL、透明质酸钠5％、氯化钠0.8％、氯化镁0.1％、乙二胺四乙酸钙钠0.02％、麦芽糖醇0.3％、和注射用水；或者，
[0031](3)其中包含：胎盘间充质干细胞5×107个/mL、透明质酸钠3％、氯化钠1.0％、氯化镁0.05％、乙二胺四乙酸钙钠0.05％、麦芽糖醇0.5％、和注射用水；或者，
[0032](4)其中包含：胎盘间充质干细胞3×107个/mL、透明质酸4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.04％、麦芽糖醇0.2％、和注射用水；或者，
[0033](5)其中包含：脐带间充质干细胞4×107个/mL、透明质酸钠4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.03％、麦芽糖醇0.4％、和注射用水；或者，
[0034](6)其中包含：脐带间充质干细胞2×107个/mL、透明质酸钠5％、氯化钠0.8％、氯化镁0.1％、乙二胺四乙酸钙钠0.02％、麦芽糖醇0.3％、和注射用水；或者，
[0035](7)其中包含：脐带间充质干细胞5×107个/mL、透明质酸钠3％、氯化钠1.0％、氯化镁0.05％、乙二胺四乙酸钙钠0.05％、麦芽糖醇0.5％、和注射用水；或者，
[0036](8)其中包含：脐带间充质干细胞4×107个/mL、透明质酸4％、氯化钠0.9％、氯化镁0.08％、乙二胺四乙酸钙钠0.04％、麦芽糖醇0.2％、和注射用水。

[0037]本发明的细胞治疗组合物中，干细胞密度过大则存活率会因营养不足而大幅降
低，而干细胞密度过小也不利于存活率的保持，且过小的干细胞密度会导致用所需制剂量的增大。

本发明通过实验证实，干细胞密度为2×107个/mL～5×107个/mL时，干细胞存活率最高。

[0038]本发明组合物为水混悬液，其中包含氯化钠，其浓度基本上与生理盐水相当。

生理盐水是指生理学实验或临床上常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压相等的氯化钠溶液。

因此，本发明细胞治疗组合物中的间充质干细胞基本上是分散于生理盐水即质量体积百分数为0.9％的氯化钠溶液中，其与人体组织的渗透压一致，以此生理盐水作为溶剂，不会对间充质干细胞产生损伤。

[0039]透明质酸或其药用盐又称玻尿酸、玻璃酸，是一种高分子的聚合物。

是由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级多糖。

透明质酸或其药用盐是构成人体细胞间质、眼玻璃体、关节滑液等结缔组织的主要成分，在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复的重要生理功能。

按照分子量的大小，透明质酸或其药用盐可分为：大分子量透明质酸或其药用盐、中分子量透明质酸或其药用盐、小分子量透明质酸或其药用盐三类。

其中：大分子量透明质酸或其药用盐的分子量为1800000～2200000，主要用于防止脱水，组织细胞再生，紧致肌肤；中分子量透明质酸或其药用盐的分子量为1000000～1800000，主要用于紧致肌肤,长久保湿；小分子量透明质酸或其药用盐的分子量为400000～1000000，主要用于快速与细胞发生水合作用，保持细胞的水分。

在间充质干细胞制剂中添加透明质酸或其药用盐可以为脂肪干细胞提供合适的基质环境，维持间充质干细胞的存活率，且利于间充质干细胞在治疗关节疾病的过程中，分化为软骨组织。

[0040]本发明使用的乙二胺四乙酸钙钠，其分子式为C10H12N2O8CaNa2.2H2O，是一种白色结晶颗粒或白色至灰白色粉末，其1％水溶液的pH值＝6.0-7.0。

乙二胺四乙酸钙钠无臭，微带咸味，稍吸湿，空气中稳定，易溶于水，几乎不溶于乙醇，乙二胺四乙酸钙钠通常作为螯合剂、防腐剂、抗氧化剂，具有对游离金属结合而使产品质量稳定的作用，通常用于消除因痕量重金属引起的对酶催化反应的抑制。

根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述透明质酸或其药用盐的分子量为400000～1000000。

[0041]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述间充质干细胞为原代～第十代的间充质干细胞。

[0042]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述的间充质干细胞可以来自已知的各种途径，例如其可以是来自于骨髓、脐带或胎盘。

[0043]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述的间充质干细胞的获取方法是众所周知的，例如CN102586184A(2012100446386)中所记载的方法从胎盘中获取间充质干细胞的方法。

[0044]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述的间充质干细胞的获取方法是众所周知的，例如CN102660497A(2012101599162)中所记载的方法从脐带中获取间充质干细胞的方法。

[0045]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述的间充质干细胞的获取方法包括如下步骤(胎盘来源)：
[0046](a)用PBS缓冲液充分冲洗胎盘小叶，以去除胎盘中残留的血液；
[0047](b)将胎盘小叶剪成块状，加入含有组织消化酶的PBS缓冲液，再在37℃孵育消化；
[0048](c)将组织块用铜网过滤，必要时研磨以促使过滤；
[0049](d)将收集的过滤液离心，分离单个核细胞，再用MSC培养基悬浮所获得的细胞，然后在37℃、5％的CO2培养箱中培养；
[0050](e)待散在细胞形成克隆后，挑取各克隆细胞，用MSC培养基分别培养，待细胞融合后，用胰酶消化传代，即得胎盘间充质干细胞。

必要时进行传代和/或在液氮中冻存以备用。

[0051]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述的间充质干细胞的获取方法包括如下步骤(脐带来源)：
[0052](1)脐带组织贴壁处理：取细胞培养平皿，将组织块平铺于平皿中，每个平皿中的组织块数量维持在5-20块，使组织块风干2-50分钟直至组织贴在平皿上；
[0053](2)脐带组织培养：沿平皿边缘慢慢加入间充质干细胞培养基至组织淹没即可；将平皿放进CO2浓度为5％的37℃培养箱进行培养，培养至第3-7天时将平皿从培养箱取出，补加适量间充质干细胞培养基；在第9-11天时将平皿中的培养基移出，加入适量新鲜的间充质干细胞培养基，继续培养；在第11-13天时清除所有脐带组织块并继续培养；此后每1-3天进行一次全换液；
[0054](3)细胞传代：当平皿内的贴壁细胞融合率达到50-70％时，使用消化酶TrypLE Express使贴壁细胞脱离平皿底部；离心，去除上清液，加入间充质干细胞培养基重新悬浮细胞，再接种于T25细胞培养瓶进行传代并进行扩增培养；此后每1-3天换液一次，直至融合率达到70-90％后，即得脐带间充质干细胞。

必要时进行传代和/或在液氮中冻存以备用。

必要时对所得间充质干细胞的以下项目中的一项或多项进行检测：细胞活性、细胞污染、遗传病、HLA-ABC/DR配型。

[0055]根据本发明的细胞治疗组合物，其是按照包括如下步骤的方法制备得到的：[0056]将透明质酸或其药用盐和氯化钠(以及任选的氯化镁和/或任选的乙二胺四乙酸钙钠)加入水中溶解，任选地对该溶液进行除菌，获得制剂的基质；
[0057]将预先制得的间充质干细胞混悬于该基质中，分装，即得。

[0058]根据本发明的细胞治疗组合物，其制备过程是在无菌条件下进行的。

[0059]根据本发明的细胞治疗组合物，其制备过程中，在与间充质干细胞混和前所述基质的温度低于25℃。

[0060]根据本发明的细胞治疗组合物，其制备过程中，在温度低于25℃条件下将所述基质与间充质干细胞混和。

[0061]本发明提供的间充质干细胞的细胞治疗组合物的制备方法简单温和，不会损伤干细胞的活性，从而提高间充质干细胞制剂中干细胞的存活率。

[0062]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述分装是将配制得到的细胞治疗组合物分装到预充注射器中，尤其是分装到一次性使用的预充注射器中。

[0063]根据本发明的细胞治疗组合物，其中所述预充式注射器的针筒材质为高分子聚合物(例如聚丙烯)、活塞材质为橡胶，本发明具体实例中如未特别说明，所用预充式注射器的针筒材质为高分子聚合物(例如聚丙烯)、活塞材质为橡胶。

[0064]预充式注射器首次出现于第二次世界大战期间，目的是为了满足战地医院对现场无菌医疗的需要。

预充式注射器再度被强力推向市场是在上世纪50年代初，当时Becton Dickinson公司为Jonas Salks博士的脊髓灰质炎疫苗项目提供玻璃预充式注射器。

此后，
预充式注射器继续得到应用，大多是在胰岛素和人生长素给药领域。

不过，预充式注射器真正盛行起来是在过去5年中，它几乎成为注射剂供应商必需提供的一种产品。

而多数创新性的液体药品，如果适合的话，将装在预充式注射器中上市。

预充式注射器之所以走俏主要由于产品本身具有的优势，尤其是使用简便。

医药市场正在发生变化，生物技术疗法以及仅能通过注射途径给药的候选药物数量增多，它们涉及的治疗领域非常广泛，如多发性硬化、不孕、骨质疏松、肝炎、类风湿性关节炎、癌症、贫血及血友病等。

一些生物技术药物需要患者本人频繁注射给药，他们从预充式注射器的便利中受益最深，因为预充式注射器省却了一些操作步骤，让使用更快捷、更简便。

患者的需要是推动预充式注射器发展的真正动力。

从小瓶中量出药品装入注射器中是一件费时的工作，缺乏充分训练的人很容易出错。

此外，一些疾病如类风湿性关节炎患者常常难以，甚至不能拿稳小瓶并量出准确剂量。

制药厂家已经将一些药品由冻干剂型改为液体剂型，以便于装入预充式注射器中，例如Berlex的治疗多发性硬化药物Betaseron、诺和诺德的人生长素Norditropin以及基因泰克的人生长素Nutropin都已由冻干剂型改为液体剂型，装在预充式注射器中出售。

注射器元件生产商加快步伐以满足对即用性元件不断增长的需求。

法国Stelmi公司的即用型柱塞以及Becton Dickinson公司的Hypak SCF预充式注射器使得灌装现场无需进行清洗、除热原以及消毒操作。

即用性元件经过清洗、环氧乙烷或γ射线消毒、验证后可以直接使用。

预充式注射器的另一优势是可以显著减少产品过度充填量。

使用预充式注射器，可以节省10％、15％，有时甚至是20％的原料药。

有些将小瓶改为预充式注射器的厂家还降低了原料药产量，因为新剂型不再需要那么多原料药。

Becton Dickinson公司的一项研究显示，与小瓶相比，预充式注射器中的剂量可以高出23％，因为在从小瓶向注射器转移过程中药品损失更少。

[0065]根据本发明的第二方面，提供了一种制备细胞治疗组合物的方法，该细胞治疗组合物可用于治疗骨关节炎和软骨缺损的细胞治疗组合物，该组合物中包括：间充质干细胞(其来源例如可以是脐带或胎盘)、透明质酸或其药用盐、氯化钠、和水。

[0066]根据本发明的方法，其中所述细胞治疗组合物中还包含氯化镁和/或乙二胺四乙酸钙钠。

[0067]根据本发明的方法，其包括以下步骤：
[0068]将透明质酸或其药用盐和氯化钠(以及任选的氯化镁和/或任选的乙二胺四乙酸钙钠)加入水中溶解，任选地对该溶液进行除菌，获得制剂的基质；
[0069]将预先制得的间充质干细胞混悬于该基质中，分装，即得。

[0070]根据本发明的方法，所述细胞治疗组合物中，所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％～5％。

[0071]根据本发明的方法，所述细胞治疗组合物中，所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3～4％。

[0072]根据本发明的方法，所述细胞治疗组合物中，所述透明质酸或其药用盐的质量体积百分数为3％。

[0073]根据本发明的方法，所述细胞治疗组合物中，所述间充质干细胞的密度为2×107个/mL～5×107个/mL。

[0074]根据本发明的方法，所述细胞治疗组合物中，所述间充质干细胞的密度为3×107个/mL。