食品中食品中山梨酸的测定

食品中山梨酸的测定
第一法气相色谱法
5 原理
样品酸化后,山梨酸用乙醚提取浓缩后,用附氢火焰离子化检测器的气相色
谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量。

6 试剂
6.1 乙醚。

6.2 石油醚：沸程30～60℃。

6.3 盐酸。

6.4 无水硫酸钠。

6.5 山梨酸标准溶液: 精密称取山梨酸0.2000g,置于100ml容量瓶中,用石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于2mg山梨酸。

6.6 山梨酸标准使用液：吸取适量的山梨酸标准溶液,以石油醚-乙醚
(3：1)混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、25Oμg山梨酸。

7 仪器
气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器。

8 操作方法
8.1 样品提取
按4.1自“称取2.5g”至“加乙醚至刻度”依法操作。

准确吸取5mL乙醚提取液于5mL
带塞刻度试管中,置40℃水浴上挥干,加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解残渣,备
用。

8.2 色谱条件
8.2.1 色谱柱：玻璃柱,内径3mm,长2m,内装涂以5%DEGS+1%H3PO4固定液的60～80目
Chromosorb W AW。

8.2.2 气流速度: 载气,氮气,50ml/min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择
各自的最佳比例条件。

)
8.2.3 温度：进样口 230℃;检测器230℃;柱温170℃。

8.3 测定
进样2μL标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中,可测得不同浓度山梨酸,苯
甲酸的峰高,以浓度为横坐标,相应的峰高值为纵坐标,绘制标准曲线。

同时进样2μL样
品溶液,测得峰高与标准曲线比较定量。

8.4 计算
式中：X2──样品中山梨酸的含量,g/kg;
A3——测定用样品液中山梨酸的含量,μg;
V3——加入石油醚—乙醚(3：1)混合溶剂的体积,mL；
V4─—测定时进样的体积,μL；
m2──样品的质量,g;
5─—测定时吸取乙醚提取液的体积,mL;
25──样品乙醚提取液的总体积,mL。

由测得山梨酸的量乘以1.18,即为样品中山梨酸钠的含量。

第二法高效液相色谱法
原理：
试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

试剂：
1.甲醇:经滤膜(0.45um)过滤。

2.稀氨水(1+1):氨水加水等体积混合。

3.乙酸按溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸按，加水至1000mL,溶解，经0.45um滤膜过滤。

4.碳酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。

5.山梨酸标准储备溶液:准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20 g/L)5mL，加热溶解，移人100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

6.山梨酸标准混合使用溶液:取山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放人100mL容量瓶中，加水至刻度。

此溶液含山梨酸各0.1mg/mL。

经0.45um 滤膜过滤(同时测定糖精钠时可加GB/T 5009. 28-2003中3.4糖精钠标准储备溶液)。

分析步骤：
1 试样处理
1.1 汽水:称取5.00g-10.0g试样，放人小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH约7。

加水定容至10mL-20mL，经滤膜(HA
0.45um)过滤。

1.2 果汁类:称取5.00g --10.0g 试样，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0.45um滤膜过滤。

1.3 配制酒类:称取10.0g试样，放人小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45um滤膜过滤。

2 高效液相色谱参考条件
2.1 柱:YWG-C18，4.6 mmX250mm,10um不锈钢柱。

2.2 流动相:甲醇，乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5：95),
2.3 流速:1mL/min,
2.4 进样量:10uL,
2.5 检测器:紫外检测器，230nm波长，0.2AUFS,
根据保留时间定性，外标峰面积法定量
3 结果计算试样中山梨酸的含量按式(2)进行计算。

式中 :
X—试样中山梨酸的含量，单位为克每千克(g/kg);
A—进样体积中山梨酸的质量，单位为毫克(mg);
V2—进样体积，单位为毫升(mL);
V1—试样稀释液总体积，单位为毫升(mL); m—试样质量，单位为克(9)。

计算结果保留两位有效数字。

第三法薄层色谱法
1 原理
样品酸化后,用乙醚提取山梨酸。

将样品提取液浓缩,点于聚酰胺薄层板上,
展开。

显色后,根据薄层板上山梨酸的比移值,与标准比较定性,并可进行概略
定量。

2 试剂
2.1 异丙醇。

2.2 正丁醇。

2.3 石油醚：沸程：30～60℃。

2.4 乙醚: 不含过氧化物。

2.5 氨水。

2.6 6N盐酸: 取100mL盐酸,加水稀释至200mL。

2.7 无水乙醇。

2.8 聚酰胺粉：200目。

2.9 山梨酸标准溶液：精密称取0.2000g山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中
并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg山梨酸。

2.10 展开剂
2.10.1 正丁醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。

2.10.2 异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。

2.11 显色剂：0.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH=8。

2.12 4％氯化钠酸性溶液：于4％氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。

3 仪器
3.1 吹风机。

3.2 层析缸。

3.3 玻璃板：10×18cm。

3.4 微量注射器：10μL,100μL。

3.5 喷雾器。

4 操作方法
4.1 样品提取:
称取2.5g事先混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中,加0.5ml 6N盐酸酸化,用15、
10ml乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另一个25ml 带塞量筒中,合并乙
醚提取液。

用3ml4％氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫
酸钠滤入25ml容量瓶中。

加乙醚至刻度,混匀。

吸取10.0ml乙醚提取液分两次置于10ml带
塞离心管中,在约40℃的水浴上挥干, 加入0.10ml乙醇溶解残渣,备用。

4.2 测定
4.2.1 聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉,加0.4g可溶性淀粉,加约15ml水,研磨
3～5min,立即倒入涂布器内制成10×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块,于室温干燥后,于
80℃干燥1h,取出,置于干燥器中保存。

4.2.2 点样：在薄层板下端2cm的基线上,用微量注射器点1μL、2μl样品液,同时各点
1μl、2μl山梨酸标准溶液。

4.2.3 展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(2.11.1或2.11.2)的展开槽
内,展开槽周围贴有滤纸,待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干,喷显色剂,斑点成黄色,
背景为蓝色。

样品中所含山梨酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸的比移值为0.82)。

4.2.4 计算：
式中：X1—─样品中山梨酸的含量,g/kg;
A1—─测定用样品液中山梨酸的含量,mg;
m1——样品质量,g;
V1——加入乙醇的体积,mL;
V2──测定时点样的体积,mL;
10——测定时吸取乙醚提取液的体积,mL;
25——样品乙醚提取液总体积,mL。

注：本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。

[文档可能无法思考全面，请浏览后下载，另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意!]。