pH对酶活性的影响

缓 冲 液pH
5.0 5.8 6.2 6.6 6.8 7.0 7.4 8.0
2、由8个锥形瓶中，各取缓冲液 3ml，分别注入8支 带有编号的试管中，随后于每个试管中，添加 0.5% 淀粉溶液 2 ml 和稀释 200 倍的唾液 2 ml 。 ( 增 加 1 个和 5号内容相同的试管，作为检验淀粉的水 解程度 )向各试管加入稀释唾液的时间间隔各为 1 分钟。将各试管内容物混匀，并依次置于 37℃恒 温容物呈现的颜色，可以看出 pH对唾液 淀粉酶活性的影响。指出其最适pH值。 注意事项 掌握第5号试管的水解程度是本实验成败的关键。
五、思考题
1.pH对酶活性有何影响？ 2.如何测定一个酶的最适pH?
二、实验用品
1、材料 新鲜并稀释200倍的唾液 2、试剂 （ 1 ） 0.5% 淀粉溶液 : 称取 0.5g 淀粉溶于 0.3%NaCl 溶 液中。 （2）0.2M磷酸氢二钠溶液 （3）0.1M柠檬酸溶液 （ 4 ）碘化钾 —碘液 : 将KI 20g 及碘 10g ，溶于100ml 蒸馏水中，使用前，稀释10倍。 3、仪器设备 试管及试管架、 2ml和 5 ml吸量管、恒温水浴锅、 滴定管、50 ml锥形瓶
三、方法和步骤
1、取8个50毫升锥形瓶，编号。 按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氢 二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备 pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液。
表1.pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液的制备
锥形瓶号
1 2 3 4 5 6 7 8 0.2M磷酸氢 二钠/ml 5.15 6.05 6.61 7.28 7.72 8.24 9.08 9.72 0.1M柠檬 酸/ml 4.85 3.95 3.39 2.72 2.28 1.76 0.92 0.28
3、5分钟后（视酶的活性而定，一般5～10分钟）， 每隔1分钟由第5号试管之一吸取1滴混合液，置于 白磁板上，加一小滴碘化钾 — 碘溶液，检查淀粉 的水解程度，使实验结果成为橙黄色时，向所有 试管依次添加1～2滴碘化钾-碘溶液，充分混匀。 加碘化钾溶液时间间隔，由第一管起，也均为1分 钟，摇匀，观察各试管内容物的颜色。
实验十二
pH对酶活性的影响
Exp. 12 Effect of Changes in pH on Enzyme Activity
一、实验原理
酶的活性，受环境pH的影响极为显著，通常只 在一定的pH范围内，酶才表现出活性，当酶活性达 到最高时的pH值称为该酶的最适pH(optimum pH )， 低于或高于最适pH时，酶的活性依次降低，酶的最 适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。 不同酶的最适pH不同。但与该酶在生物体内存 在的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适pH为 1.5～2.5，而胃液的pH与此相近，胰蛋白酶的最适 pH为8左右，而十二指肠附近肠道的pH值近乎中性。 本实验使用唾液淀粉酶(salivary amylase )来 说明pH对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适pH为 6.8，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适pH为 6.4～6.6。