植物组织中可溶性糖含量的测定

植物组织中可溶性糖含量的测定九植物组织中可溶性糖含量的测定⼀．实验⽬的学习可溶性糖测定的蒽酮⽐⾊法⼆．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发⽣相应的变化，碳⽔化合物的代谢也不例外其含量也随之发⽣变化。

了解可溶性糖含量的变化，在⽣理上和实践上都有重要的意义。

本实验采⽤蒽酮⽐⾊法测定可溶性糖的含量。

糖在硫酸的作⽤下⽣成糠醛，糠醛再与蒽酮作⽤，形成⼀种绿⾊的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。

该实验⽅法简便，但没有专⼀性，对于绝⼤部分的碳⽔化合物都能与蒽酮反应，产⽣颜⾊。

三．实验⽤品721型分光光度计分析天平研钵恒温⽔浴锅烧杯刻度试管⼤试管活性炭移液管漏⽃酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘⾄恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200µg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（⽐重1.84）稀释成1000mL ⽽成。

四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶⽚，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒⼊离⼼管内，置于80℃⽔浴中不断搅拌30min，离⼼10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃⽔浴脱⾊30min,定容⾄10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显⾊及⽐⾊吸取上述糖提取液1mL，放⼊⼀⼲洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸⽔浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进⾏测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再⾏计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成⼀系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80µg。

植物组织中可溶性糖含量测定

实验报告课程：植物生理学实验题目：植物组织中可溶性糖含量的测定一.【实验原理】植物的代谢活动随着植物的发育过程而不断发生着变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，在种子萌发过程中，在光合作用受到影响时和受到外界环境的胁迫等情况下植物可溶性糖含量都会发生变化。

了解植物可溶性糖含量的变化，在生理上与实践上都有重要意义。

蒽酮比色法是常用的测定可溶性五碳糖和六碳糖的方法，糖在硫酸的作用下脱水生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物，在一定的浓度范围内颜色的深浅与糖含量成正比，可以用比色法测定。

该法简便，但没有专一性，绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。

二.【实验步骤】1、标准曲线的绘制2、可溶性糖的提取3、提取液的显色及比色三.【实验结果】实验中测得的数据如下所示：若以1号管调零，处理后数据如下：作出标准曲线如下：将y=0.261，0.269，0.247分别代入上述函数公式，得到：x=45.000，46.379，42.586；即三样品溶液中糖浓度分别为：45.000μg／mL，46.379μg／mL，42.586μg／mL。

样品中可溶性糖含量（m g·g-1）= A × c／(W × 103)式中，A——植物样品稀释后的体积（mL）；C——提取液的含糖量（μg／mL）；W——植物组织鲜重（g）。

四.【讨论】1、误差分析实验中的误差来源主要有：(1)植物材料称取的误差；(2)植物样品在转移过程中的损失；(3)最后过滤得到的提取液中尚有未除尽的醋酸铅；(4)移液管未润洗等等。

2、注意事项(1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步；(2)比色时以蒸馏水调零；(3)醋酸铅一定要除尽；(4)在样品转移过程中，尽量减少材料的损失；(5)进行第二次过滤时要更换滤纸，并将漏斗洗净。

3、植物组织中糖的测定方法还有很多种，举例说明它们的原理和优缺点。

(1)苯酚-硫酸法原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

植物中可溶性糖含量的测定

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖
一、原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
表24-2苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量
试剂
100μg/L蔗糖标准液
（mL）
蒸馏水（mL）
蔗糖量（μg）管号00
2.0
01、2
0.2
1.8
203、4
0.4
1.6
405、6
0.6
1.4
607、8
0.8
1.2
809、10
1.0
1.
01002．可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.1～0.3 g,共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min（提取2次），提取液过滤入25 mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

实验植物组织中可溶性糖含量的测定

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

植物体内可溶性糖含量的测定

植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。

蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。

其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。

溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。

蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。

四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。

样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。

eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。

置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。

）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。

编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法、分光光度法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。

显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。

本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。

蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。

三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。

2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；50ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

3.试剂及配制：蒽酮乙酸乙酯试剂：称取蒽酮2 g溶于100ml乙酸乙酯中，棕色瓶保存。

加热溶解。

每次用前检查，有结晶则微热溶解后使用。

100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖1 g于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。

再取1ml稀释定容100ml，即100μg/ml 蔗糖标准液。

四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液。

加入表中试剂后，按顺序加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液，沿壁缓慢加入5ml浓硫酸，并立即摇动使混合均匀，立即沸水浴，每管准确保温1min，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在630nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g，放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取30min，冷却后过滤入50ml容量瓶中，再次加水10ml，沸水浴30min，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。

残渣如需继续测定淀粉，则过滤前离心，防止残渣流失。

3.糖含量测定吸取待测液0.5ml，加入试管中，再加蒸馏水1.5 ml。

实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。

3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。

实验四___植物组织中可溶性糖含量的测定

实验四植物组织中可溶性糖含量的测定
一、实验目的：掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的使用程序。二、实验原理：（P48）三、实验材料：绿豆黄化苗四、实验步骤： 1.可溶性糖的提取：材料不需烘干（1 g鲜重）加入10 mL
纯水，80℃水浴30min，过滤后定容至50mL 。(不必脱色和离心）

按“SET”进行设置，按“↓翻页”可在标样间切换，设置完毕后。按“100T％”调零，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
参比测量后按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
输入标号后，出现：
请将样品拉入光路！ ENT确认
按“ENT”确认，拉动拉杆，进入下一比色皿的测量。测量结束后，得到标准曲线，按“ESC”退回上一层界面。

按“1”进入样品“测量”功能。（此功能是对样品的测量，需要有参比杯做对照。）按“ENT”，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
测量后，按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
依次测量。按“3”进入“置入曲线”，（此功能主要用于标准曲线做完后无法及时做样品测量，故记下曲线公式，在进行测量前直接输入曲线）页面如下：置入曲线当前曲线：C= A+ SET修改↓翻页

723G型分光光度计“标准曲线”建立方法
浓度测量 1 测量 2 AC建曲线 3 置入曲线 1-4选择 4 参数 PRN打印设置进行此功能操作流程如下：
Байду номын сангаас
在主界面下，按“2”进入“浓度测量”功能，出现如下界面：
按“2”进入“AC建曲线”功能，出现如下界面：比色皿：测建曲线波长：标样个数：标样A1： SET修改↓翻页

实验8植物组织中可溶性糖含量测定(蒽酮比色法)

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

植物组织中可溶性糖含量的测定

2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。

二、实验原理：（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。

（二）测定：蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。

该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。

三、实验材料：大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤：1．标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。

显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。

比色：测定A600nm的吸光度值。

浓度：ug/mL050100150200吸光度：a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线：．可溶性糖的提取：称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~ 40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。

植物可溶性糖含量的测定

植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。

因此，可溶性糖的定量讨论对果树的品质育种具有重要意义。

一、试材及用具1．试材新奇或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。

二、原理本试验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定肯定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖马上使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。

通过试验，学习并把握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。

三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO45H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。

2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H44H2O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。

3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。

在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。

测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。

4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。

5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)22H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL稀释至100mL。

植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法)

植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法) 实验15 植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法)植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以糖含量作为重要指标;植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。

一、原理苯酚法测定可溶性糖原理:植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛(分子式见蒽酮法)能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10,100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min以上。

二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:新鲜的植物叶片。

(二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 水浴锅;3. 刻度试管;4. 刻度吸管。

(三)试剂:1. 90,苯酚溶液称取90克苯酚(AR)，加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月;2. 9,苯酚溶液取3ml90,苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用;3. 浓硫酸(比重1.84);4. 1,蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80?下烘至恒重，精确称取1.000克。

加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度;5. 100μg/L 蔗糖标准液精确吸取1,蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。

三、实验步骤1. 标准曲线的制:向试管内加入1ml9,苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5,20S加入5ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。

然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

2. 可溶性糖的提取取:取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10,0.30g，共3份(或干材料)，分别放入3支刻度试管中，加入5,10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。

植物组织中可溶性糖含量测定方案

植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在630 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。

二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当日配置）(2) 浓硫酸3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。

加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。

取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。

1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

2、可溶性糖提取称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。

分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。

吸取上述1.0mL提取液至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容。

植物组织中可溶性糖含量的测定

实验15 植物组织中可溶性糖含量的测定一、目的学会植物组织中可溶性糖含量的测定方法，了解不同的植物组织可溶性糖含量的高低。

二、材料用具及仪器药品1.材料：水果或蔬菜2.仪器用具：分光光度计、天平、恒温水浴锅、研钵、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、试管、移液管、漏斗3.药品：乙醚、草酸钠、饱和醋酸铅标准葡萄糖母液：在电子天平上称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容至500ml，则得每ml 含糖量为200ug的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g蒽酮结晶粉末，溶解于1000ml稀硫酸溶液中即得。

[稀硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84）稀释成1000ml而成]三、原理植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。

H2SO4糖糠醛脱水糠醛+蒽酮蓝绿色的缩合物四、方法步骤1.标准曲线的制作。

取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液各10毫升，浓度分别为每毫升含糖0、25、50、75、100、120、150、200微克。

将试管编号，依次将每管中加入1毫升上述葡萄糖标准溶液及5毫升的蒽酮试剂，震荡使之完全混合，在沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后在分光光度计波长620纳米下比色，测定各溶液的光密度，以光密度为纵坐标，糖溶液浓度为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。

2.测定样品的可溶性糖含量称取重量5g的新鲜植物叶子，于研钵中仔细研磨，研磨时加乙醚少许，直至为止，倒入烧杯中，用热水（70o C）洗涤研钵，洗涤液并入烧杯中，再加入蒸馏水约30～40ml。

将烧杯放在水浴锅上加热，保持温度70～80o C半小时，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止，然后将此混合物连同残渣一并洗水100ml容量瓶中，加水至刻度，充分摇荡，用漏斗过滤到三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2——0.4g）的草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。

植物组织可溶性糖的测定

植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。

一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。

苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100Mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nM波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定时间在160Min以上。

【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20Ml刻度试管；刻度吸管5Ml 1支，1Ml 2支；记号笔；吸水纸适量。

【试剂】90％苯酚溶液：称取90g苯酚(AR)，加蒸馏水10Ml溶解，在室温下可保存数月；9％苯酚溶液：取3Ml 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30Ml，现配现用；浓硫酸(比重1.84)；1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。

加少量水溶解，移入100Ml容量瓶中，加入0.5Ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；100μg／L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1Ml加入100Ml容量瓶中，加水定容。

【方法】1.标准曲线的制作取20Ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表1－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1Ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20s时间加入5Ml浓硫酸，摇匀。

比色液总体积为8Ml，在恒温下放置30Min，显色。

然后以空白为对照，在485nM波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

表1-1各试管加入溶液和水的量试管 1 2 3 4 5 6100ug/L蔗糖液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0水（ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0苯酚（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0浓硫酸（ml） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0蔗糖量（μg）0 20 40 60 80 1002.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10Ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30Min(提取2次)，提取液过滤入25Ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

植物体内可溶性糖含量的测定

植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）2010-04-04 22:43:32 来源：易生物实验浏览次数：221 网友评论0 条糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

关键词：可溶性测定含量植物可溶性糖含量测定蒽酮法solublesugar新陈代谢一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。

此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。

三、实验材料、仪器及试剂1．材料：白菜叶、柑桔2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

2．样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。