微生态制剂对蛋雏鸡免疫性能的影响

微生态制剂对蛋雏鸡免疫性能的影响
徐海燕;王红;曹银生;崔诗法;谷巍
【摘要】Effects of microecological agent product added in feed on immune property of laying chicks were ying chick's immune organ index (the spleen and bursa), intestinal index number, HI antibody titer of ND in the serum, erythrocyte - C3b rosette rate ( E - C3bR), erythrocyte - immune complex rosette rate ( E - ICR), the sIgA in the intestinal fluid were detected. The results showed that: at the age of 33d, the spleen index and the bursa index of the experiment group were all higher than that of the control group, higher above 46.43％ and 88.55％respectively (P ＜0.01 ); at the age of 33d, the number of bacteroid and bacterium lacticum of the experiment group was all higher than that of the control group, higher above 23.40％ and 27.40％ respectively ( P ＜ 0.
01 ),the number of enterococcus faecalis and escherichia coli of the experiment group was all lower than that of the control group, lower above 0.30％ and 3.35％, respectively ( P ＜0.01 ); At the age of 33d, the E - C3bR and the E - ICR of the experiment group were higher 177.78％ ( P ＜0.05) and 56.52％ ( P ＜ 0.01 ) than that of the control group. However, at the age of 19d, there was no significant difference of the above indexes between the experiment group and the control group; At the age of 12, 19, 26, 33 d, the antibody titer of the experiment group increased 14.25％ (P＜0.05)、15.78％ (P＜0.05)、29.21％ (P＜0.01) and 36.75％ (P＜0.01), respectively, compared with that of the control group; Meanwhile, the sIgA
in the intestinal fluid of the experiment group were higher 43.01％、
18.69％、68.55 ％ and 42.31％ respectively ( P ＜ 0.05 ) than that of the control group.%为了观察微生态制剂产品倍利素对蛋雏鸡免疫性能的影响,将倍利素添加到蛋雏鸡的饮水中,观测蛋雏鸡的免疫器官指数(脾脏、法氏囊)、肠道菌群数、血清中ND血凝抑制效价、红细胞花环率和肠液中sIgA等指标的变化.结果表
明,33日龄时,试验组的脾脏指数、法氏囊指数分别高出对照组46.43%、88.55%,
差异均极显著(P＜0.01);33日龄时,试验组的拟杆菌数、乳杆菌数分别高出对照组23.40%、27.40%,差异均极显著(P＜0.01),试验组的粪肠球菌数、大肠杆菌数分别低于对照组0.30%、3.35%(P＜0.01);33日龄时,试验组的E-C3bR率和E-ICR率
分别高出对照组177.78%(P＜0.05)和56.52%(P＜0.01);而在19日龄时,试验组的上述指标与对照组相比差异均不显著;在12、19、26、33日龄,试验组血清中ND
血凝抑制抗体效价分别高出对照组14.25%(P＜0.05)、15.78%(P＜0.05)、
29.21%(P＜0.01)、36.75%(P＜0.01),试验组盲肠内容物中sIgA的含量分别高出
对照组43.01%、18.69%、68.55%、42.31%,均差异显著(P＜0.05).
【期刊名称】《青岛农业大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2011(028)001
【总页数】4页(P40-43)
【关键词】微生态制剂;蛋雏鸡;免疫性能
【作者】徐海燕;王红;曹银生;崔诗法;谷巍
【作者单位】山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000;山东宝来利
来生物工程股份有限公司,山东泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,
山东泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000;山东宝
来利来生物工程股份有限公司,山东泰安271000
【正文语种】中文
【中图分类】Q815;S831
随着我国养殖业的迅速发展，由细菌或病毒所引起的动物疾病日渐增多，但饲料药物添加剂及抗生素的使用，特别是滥用，不仅降低了畜产品的品质，而且残留在畜禽食品中经加热不能完全破坏，危害了人类健康，同时也影响了畜产品的国际竞争力。

随着经济与科技的发展，人们对生活质量和健康更加重视，消费者渴望更多更好的绿色食品供应市场。

鉴于此，研究人员一直致力于开发一些通过调整胃肠道平衡，达到促进生长和维持动物健康的饲料添加剂，此时具有天然、无任何毒副作用、安全可靠、无残留、无污染的益生菌制品就成为首选。

目前，畜牧生产中乳酸菌、双歧杆菌和芽孢杆菌类有益菌常作为微生态制剂的生产菌株。

微生态制剂是由活体微生物制成的生物活性制剂，它能有效补充畜禽消化道内的有益微生物，改善消化道菌群平衡［1］，迅速提高机体抗病能力、代谢能力和对饲料的消化吸收能力，达到防治消化道疾病、促进生长、改善畜产品品质、减少粪便恶臭、防治环境污染的作用。

目前市面上的微生态制剂绝大多数只是针对动物的生长性能，而针对免疫性能的微生态产品却很少，在这种情况下山东宝来利来生物工程股份有限公司于2010年推出了倍利素—细胞免疫与体液免疫之平衡调节剂，其生产菌株主要是乳酸菌、双歧杆菌和枯草芽孢杆菌。

本试验旨在研究倍利素对蛋雏鸡免疫性能的影响，为倍利素在蛋鸡生产中的推广应用提供试验依据。

1 材料与方法
1.1 试验材料
倍利素由鼠李糖乳杆菌6133、双歧杆菌和枯草芽孢杆菌B7348组成，其活菌总
数不低于2.0× 109cfu/g;供试鸡为1日龄健康海兰褐雏公鸡，购自泰安市东岳种
禽公司;全价饲料购自天普阳光;新城疫(ND)LaSota IV系疫苗，购自齐鲁动物保健
品厂;鸡分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒购自上海劲马实验设备有限公司。

1.2 试验设计及饲养管理
将大小和健康状况基本相同的120只1日龄海兰褐雏公鸡随机分成2组，即对照组、试验组，每组设2个重复，每个重复30只，以不含抗生素的全价饲料为基础日粮，其中试验组按倍利素的使用说明饮用产品稀释液，即:1次/周，1000羽/瓶;对照组自由饮水，两组皆自由采食，其它饲养管理条件相同。

按鸡场正常程序进行免疫接种，试验期为33d。

1.3 样品采集及检测指标
1.3.1 免疫器官指数的测定
分别于19、33日龄各组随机选取4只鸡，颈静脉放血处死，立即解剖并分离脾脏和法氏囊，称重后求其指数。

免疫器官指数的计算公式如下:
1.3.2 肠道菌群的测定
选择蛋雏鸡肠道菌群中具有代表性的乳酸杆菌、拟杆菌、大肠埃希氏菌及肠球菌进行培养和计数。

分别于19、33日龄各组随机选取4只鸡，颈静脉放血处死，立即解剖并分离盲肠，取盲肠内容物进行计数。

1.3.3 ND血凝抑制抗体效价的测定
在12、19、26、33日龄，每组随机取4只鸡采血，待血液凝固后常规方法离心，分离出血清，进行倍比稀释，用V型血凝板检测血清中的血凝抑制抗体效价。

HI
抗体效价用log2X表示。

1%鸡红细胞悬液的制备:采自养殖场饲养的健康成年鸡，按常规方法进行［2］;病毒的红细胞凝集试验(HA)和病毒的红细胞凝集抑制试验(HI)，按常规微量法进行［2］。

1.3.4 红细胞免疫功能的测定
在19、33日龄，每组随机取4只鸡，采血抗凝，离心取红细胞，并配成
1.25×107个/ml的红细胞悬液，检测红细胞C3b受体花环(E-C3bR)率和红细胞
免疫复合物花环(E-ICR)率。

1.3.5 肠液中分泌型IgA的测定
在12、19、26、33日龄，每组随机取4只鸡，解剖后立即采集盲肠，将每组鸡
的盲肠内容物混合在一起，采用鸡分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA试剂盒测定肠液中sIgA。

1.4 数据处理
试验数据采用SPSS13.0软件中的单因子方差分析，用LSD进行组间多重比较，
对试验数据进行统计分析，结果均以平均数±标准差表示。

2 结果与分析
2.1 倍利素对蛋雏鸡免疫器官指数的影响
由表1可知，19日龄时，试验组的脾脏指数、法氏囊指数分别高出对照组
10.63%、16.82%，差异均不显著;33日龄时，试验组的脾脏指数、法氏囊指数分别高出对照组46.43%、88.55%，差异均极显著(P＜0.01)。

试验组与对照组的脾
脏指数33日龄时比19日龄时分别增加了85.31%和40.00%;试验组与对照组的
法氏囊指数33日龄时比19日龄时分别降低了36.51%和60.66%。

试验结果表明，倍利素对蛋雏鸡免疫器官的发育有显著的促进作用。

表1 倍利素对蛋雏鸡免疫器官指数的影响 mg/g注:表中不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

下同。

鸡龄对照组试验
组19日龄脾脏指数1.66±0.26 A 3.13±0.24 B 1.60±0.22 a 1.77±0.25 a法氏囊指数4.22±0.36 a 4.93±0.41 a 33日龄脾脏指数2.24±0.30 A 3.28±0.20 B法氏囊指数
2.2 倍利素对蛋雏鸡肠道菌群的影响
由表2可以看出，19日龄时，试验组的拟杆菌数、乳杆菌数分别高出对照组
6.79%、6.51%，试验组的粪肠球菌数、大肠杆菌数分别比对照组低2.75%、1.35%，差异均不显著;33日龄时，试验组的拟杆菌数、乳杆菌数分别高出对照组23.40%、2
7.40%，差异均极显著(P＜0.01)，试验组的粪肠球菌数、大肠杆菌数分别比对照组低 0.30%、3.35%，其中大肠杆菌数差异极显著(P＜0.01)，粪肠球菌数差异不显著。

表2 倍利素对蛋雏鸡盲肠菌群的影响 lgcfu/g鸡龄菌群对照组试验组19日龄拟杆菌7.51±0.19 a 8.02±0.13 a乳杆菌7.68±0.34 a 8.18±0.19 a粪肠球菌
7.28±0.14 a 7.08±0.02 a大肠杆菌8.14±0.08 a 8.03±0.16 a 33日龄拟杆菌6.58±0.05 A 8.12±0.02 B乳杆菌6.97±0.41 A 8.88±0.01 B粪肠球菌
6.60±0.06 a 6.58±0.03 a大肠杆菌8.95±0.01 A 8.65±0.02 B
2.3 倍利素对蛋雏鸡血清ND抗体效价的影响
由表3可看出，在12、19、26、33日龄，试验组血清中新城疫血凝抑制抗体效价均高于对照组，分别高出对照组14.25%(P＜0.05)、15.78%(P＜0.05)、
29.21%(P＜0.01)、36.75%(P＜0.01)。

26日龄时鸡血清内抗体水平较高，且与对照组的差别也较大，33日龄时血清中抗体水平较低，但试验组仍高出对照组1个滴度以上。

表3 不同日龄ND血凝抑制抗体效价 log2X鸡龄对照组试验组12日龄
4.35±0.31 a 4.97±0.23 b 19日龄4.88±0.16 a
5.65±0.27 b 26日龄5.82±0.38
A 7.52±0.25
B 33日龄4.00±0.42 A 5.47±0.53 B
2.4 倍利素对蛋雏鸡红细胞免疫功能的影响
由表4可以看出，19日龄时，试验组的E-C3bR率、E-ICR率分别高出对照组35.29%、8.93%，差异均不显著;33日龄时，试验组的E-C3bR率、EICR率分别
高出对照组177.78%、56.52%，其中E -C3bR率差异显著(P＜0.05)，E-ICR率
差异极显著(P＜0.01)。

试验组33日龄时的E-C3bR率比19日龄增加了8.70%，对照组33日龄时的E-C3b R率比19日龄降低了47.06%;试验组与对照组的E-ICR率33日龄时比19日龄时分别降低了40.98%和58.93%。

表4 蛋雏鸡红细胞免疫花环结果 %鸡龄免疫花环对照组试验组19日龄 E-C3bR 8.5±3.75 a 11.5±1.15 a E-ICR 14.0±2.89 a 15.25±0.72 a 33日龄 E-C3bR
4.5±0.58 a 12.5±3.47 b E-ICR
5.75±0.14 A 9.0±1.15 B
2.5 倍利素对蛋雏鸡肠道内容物中sIgA含量的影响
由表5可以看出，在12、19、26、33日龄，试验组盲肠内容物中sIgA的含量分别高出对照组43.01%(P＜0.05)、18.69%(P＜0.05)、68.55% (P＜0.05)、
42.31%(P＜0.05)，均差异显著。

表5 倍利素对蛋雏鸡盲肠内容物中sIgA含量的影响 ng/L鸡龄对照组试验组12
日龄1085.15±53.90 a 1551.85±53.90 b 19日龄1061.75±33.69 a
1260.15±13.48 b 26日龄400.85±4.82 a 675.40±42.78 b 33日龄
434.25±12.04 a 618.00±2.42 b
3 讨论与结论
3.1 倍利素对蛋雏鸡免疫器官的影响
脾脏和法氏囊是禽类的主要免疫器官，参与机体的体液免疫和细胞免疫。

免疫器官的发育状态及机能强弱直接决定着禽类的免疫水平［3］。

免疫器官相对重量增加，说明机体细胞的免疫机能增强［4］。

本试验结束时倍利素组蛋雏鸡的脾脏和法氏囊指数均极显著高于对照组(P＜0.01)，说明倍利素对蛋雏鸡免疫器官的相对重量
有促进增加的作用，促进了蛋雏鸡免疫器官的成熟。

但33日龄与19日龄时相比，法氏囊指数有所下降，说明其中有一些已经开始萎缩。

3.2 倍利素对蛋雏鸡盲肠菌群的影响
乳杆菌、双歧杆菌是肠道中的优势菌种，它能在肠道中迅速生长繁殖，产生大量酸，使肠道的pH值和Eh下降，既可抑制病原微生物的生长繁殖，又能促进肠道中其它厌氧菌的生长繁殖。

肠道中的酸性环境，有利于营养物质的消化吸收，也有利于提高饲料利用率。

在蛋雏鸡出壳后尽早摄入乳酸菌等益生菌可以帮助其尽早形成优势乳酸菌、双歧杆菌等菌群，有助于动物提高抵抗力，避免外来有害细菌的感染。

本试验结果表明，倍利素能极显著地促进蛋雏鸡肠道内拟杆菌、乳杆菌的增殖(P＜0.01)，并且能极
显著抑制肠道内需氧菌大肠杆菌的繁殖(P＜0.01)。

3.3 倍利素对蛋雏鸡ND血凝抑制抗体效价的影响
多年来，ND一直为严重危害养鸡业的主要传染病之一。

动物体血清中HI抗体水
平的高低是评估其免疫状况的重要指标之一。

本试验中，26日龄测得的抗体水平
最高，主要原因可能是21日龄的二免起到了很好的强化作用。

33日龄时试验组
抗体效价与26日龄时相比降低27.26%，而对照组则下降31.27%，这说明试验
组新城疫抗体与对照组相比下降速度较慢。

倍利素中的益生菌作为抗原不断刺激机体免疫系统，机体的B细胞分泌特异性抗体的功能也得到不断刺激，从而使B细
胞抗体分泌能力得到延长，抗体滴度下降较慢。

3.4 倍利素对蛋雏鸡红细胞免疫功能的影响
本试验结果表明，试验组红细胞的E-C3bR花环率高于对照组，这表明试验组血
液中红细胞C3b受体(CR1)未被免疫复合物结合的数量多于对照组，这就意味着在相同的情况下，试验组鸡的红细胞可以与较多的免疫复合物相结合，即当机体受到外界病原感染时，试验组动物红细胞具有较强的清除免疫复合物的能力，这样，试
验组红细胞的免疫功能就高于对照组。

这可能是因为:红细胞是动物机体免疫细胞的一种，是由骨髓产生的，骨髓是动物的免疫器官［5］。

倍利素通过抗原刺激影响了骨髓的免疫功能，从而使骨髓在造血过程中也改变了红细胞的免疫功能。

研究表明，微生态制剂可以提高红细胞对抗原物质的吞噬能力［6］。

这说明倍利素的确可以影响红细胞的免疫功能。

试验组E-ICR率高于对照组说明:试验组鸡血液循环中免疫复合物的浓度高于对照组。

血液中免疫复合物浓度高有两种可能，其一是可能有抗原不断地进入机体，其二是可能机体自身具有免疫功能疾病［7］，使机体内免疫复合物清除功能降低。

从试验动物来看，本试验所用鸡均健康，可以排除机体具有疾病的可能，这样试验组机体血液循环中免疫复合物只能是来源于抗原的不断进人，抗原的不断进入也有两种可能，一种是机体正发生慢性疾病，疾病造成的抗原物质不断进入机体，这种可能从本试验看也是不可能的，这样机体血液循环中免疫复合物的来源只能有一种可能，那就是来源于机体消化道中的有益菌群。

这说明倍利素的抗原物质可以进入动物机体，增加循环血液中免疫复合物的数量。

3.5 倍利素对蛋雏鸡盲肠内容物中sIgA的影响
动物肠道与外界环境相通，长期与大量的病原微生物接触。

因此，为了抵抗病原体的感染，粘膜免疫系统构成了机体抵抗病原体入侵的第一道屏障，粘膜相关淋巴组织主要部位是肠道相关淋巴组织(GALT)，且GALT是构成这道屏障的主要物质基础，而黏膜免疫的主要效应因子是分泌型免疫球蛋白A(sIgA)。

消化道粘膜表面定植、生长的大量有益菌，则是粘膜免疫系统中的重要组成部分。

益生菌可维持健康的胃肠道微生态平衡，有助于粘膜免疫正确区分病原体和潜在过敏性抗原并加以清除，促进sIgA分泌。

本试验利用ELISA方法测定鸡盲肠内容物中sIgA浓度，试验结果显示，饮用倍利素组的蛋雏鸡盲肠中sIgA含量显著高于对照组。

本试验结果表明，在饲喂期间饮用倍利素能显著提高蛋雏鸡免疫器官指数，提高蛋雏鸡的细胞免疫与体液免疫水平，增强机体免疫力。

倍利素无毒、无害、无污染，是目前饲用抗生素类药物添加剂的理想替代物。

总之，本试验的研究结果为倍利素在蛋雏鸡上的实际应用提供了可靠的依据。

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