芪板青颗粒对雏鸡免疫功能的作用研究

芪板青颗粒对雏鸡免疫功能的作用研究
张传津,尹玲玲,张志民,陆庆泉
(山东省兽药质量检验所,山东济南２５００２２)
摘㊀要:用芪板青颗粒对疫苗免疫后的鸡进行试验,以分析其功能作用.结果表明,芪板青颗粒药
物高㊁中剂量组㊁散剂对照组和药物对照组在多数时间点的血清N D和I B D抗体效价㊁淋巴细胞增
殖㊁血清I F N－γ和I L－２含量及免疫器官指数高于或显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P?０．０５),药物高㊁中剂量组和散剂对照组的增重效果显著优于免疫对照组㊁药物对照组和药物低剂量
组(P?０．０５).表明芪板青颗粒高㊁中剂量具有较好增强免疫作用.
关键词:芪板青颗粒;抗体效价;淋巴细胞增殖;I F N－γ和I L－２含量;雏鸡
[中图分类号]㊀S８５２．４＋３㊀[文献标识码]㊀A㊀[文章编号]㊀１００４Ｇ６７０４(２０１９)０３Ｇ００１８Ｇ０４S t u d y o nE f f e c t o f Q i b a n q i n g G r a n u l e o n I m m u n eF u n c t i o n
E n h a n c e m e n t o fC h i c k s
Z HA N GC h u a nＧj i n,Y I N L i n gＧl i n g,Z HA N GZ h iＧm i n,L U Q i n gＧq u a n
(I n s t i t u t e o f V e t e r i n a r y D r u g C o n t r o l o f S h a n d o n gp r o v i n c e,J i n a n S h a n d o n g２５００２２,C h i n a)
A b s t r a c t:T h e c h i c k e n s i m m u n i z e dw i t h t h e v a c c i n ew e r e t e s t e dw i t hQ i b a n q i n gg r a n u l e t o a n a l y z e t h e i r f u n c t i o n a l e f f e c t s．T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t s e r u m N Da n d I
B Da n t i b o d y t i t e r s,l y m p h o c y t e p r o l i f e r a t i o n,s e r u mI F N－γa n d I L－２l e v e l s a n d i mＧm u n eo r g a n i n d e xh i g h e r o r s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h e i m m u n e c o n t r o l g r o u p a n d t h e l o wd o s e g r o u p(P＜０．０５)．T h ew e i g h t g a i ne f f e c t o f t h eh i g h－d o s e a n dm e d i u m－d o s e g r o u p s a n d t h e p o w d e r c o n t r o l g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y b e t t e r t h a n t h a t o f t h e i m m u n e c o n t r o l g r o u p,t h e d r u g c o n t r o l g r o u p,a n d t h e l o w－d o s e g r o u p(P＜０．０５)．T h e r e s u l t s i n d i c a t e s t h a t t h eh i g ha n d m e d i u md o s e s o f t h eQ i b a n q i n gg r a n u l eh a v e a g o o d i m m u n e－e n h a n c i n g e f f e c t．
K e y w o r d s:Q i b a n q i n gg r a n u l e;a n t i b o d y t i t e r;L y m p h o c y t e p r o l i f e r a t i o n;I F N－γa n d I L－２l e v e l s;C h i c k s
㊀㊀免疫抑制性疾病广泛存在于畜禽养殖业中,鸡群免疫抑制病的发生常导致疫苗免疫失败,从而造成各种疾病多发,因此正确认识㊁研究和控制免疫抑制类疾病将成为我国养鸡业面临的一个重要问题.免疫增强剂是防治鸡群免疫抑制性病的有效措施之一.中兽药具有调节机体免疫功能㊁毒副作用小㊁无抗药性等特点.在大力提倡绿色健康养殖的今天,研发防治鸡群免疫抑制性疾病的中兽药免疫增强剂迫在眉睫.
芪板青颗粒是采用现代中药制剂工艺制成颗粒剂,由黄芪㊁蒲公英㊁大青叶㊁板蓝根㊁金银花㊁甘草等组方而成,具有扶正固本㊁益气固表的功效.本试验测定了芪板青颗粒对鸡新城疫苗免疫效果的影响,旨在验证芪板青颗粒的免疫增强作用,为临床应用提供理论依据.
[收稿日期]㊀２０１８Ｇ１０Ｇ２０
[作者简介]㊀张传津(１９６７Ｇ),男,山东莒南人,本科,研究员,主
要从事兽药畜产品检验㊁兽医药理毒理学研究及
新兽药研制开发工作.EＧm a i l:１１５３７０２１３７＠
q q．c o m １㊀材料与方法
１．１㊀试验药物
试验药物:芪板青颗粒,山东亚康药业股份有限公司制备,规格:每袋１k g;批号:１５１０４０２.
对照药物:芪芍增免散,山东亚康药业股份有限公司制备,规格:每袋２００g;批号:１５１０４０１;芪蓝囊病饮口服液,河北冀中药业有限公司产品,规格:２５０m L;批号:２０１５０３００９.
１．２㊀疫苗和检测材料
鸡新城疫Ⅳ系疫苗,山东易邦生物工程有限公司产品,规格:１０００羽/瓶;批号:２０１５１０１６;鸡传染性法氏囊中等毒力活疫苗,山东滨州沃华生物工程有限公司产品,规格:１０００羽/瓶;批号:１５１１１８.
新城疫标准抗原㊁阴性和阳性血清,购自中国兽药监察所,抗原H A效价１ʒ２５６.法氏囊标准抗原㊁阴性和阳性血清,购自中国兽药监察所,阳性血清A G P效价１ʒ１２８.E L I S A法I F N－γ和I L－２
含量检测试剂,北京三源生物科技有限公司,批号为
１５－０１.
１．３㊀主要仪器C O ２培养箱,
倒置显微镜,酶标仪,离心机,分析天平等.
１．４㊀试验动物及分组处理
１日龄罗曼蛋公鸡,购自南京汤泉农垦种鸡场.饲养至１０日龄选取４２０羽,均分为７组,每组６０只,设３个重复.１４日龄时(新城疫母源抗体效价降至２．１ʃ０．９),除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系疫苗免疫,１羽份/羽,２８日龄二免;２１龄除空白对照组外均用法氏囊疫苗免疫,１羽份/羽,３５日龄二免.在每次免疫新城疫苗的同时,３个药物剂量组分别在饮水中添加１％㊁０．５％㊁０．２５％的芪板青颗粒,散剂对照组添加２％的芪芍增免散,药物对照组按说明书(２５０m L /瓶兑水３００k g )在饮水中添加玉屏风口服液,连续３d ;免疫对照组和空白对照组不给药(表１
).表１㊀试验动物分组处理
组别处理
药物高剂量免疫,芪板青颗粒１％混饮
药物中剂量免疫,芪板青颗粒０．５％混饮药物低剂量免疫,芪板青颗粒０．２５％混饮
散剂对照免疫,芪芍增免散２％混饮
药物对照免疫,芪蓝囊混饮免疫对照免疫,不给药
空白对照
不免疫,不给药,与免疫组隔离饲养
１．５㊀测定指标及方法
１．５．１㊀抗体效价㊀于两种疫苗免疫前从全群随机抽取１０羽,采血测定N D 和I B D 特异性抗体作为初始效价,于两种疫苗首次免疫后第７(D ７)㊁１４(D １４)
㊁２１(D ２１)㊁２８(D ２８)㊁３５(D ３５)㊁４２(D ４２)
天,每组随机取６只鸡翅静脉采血,分别用β－微量法和琼扩法检测
血清N D 和I B D 特异性抗体效价.１．５．２㊀外周血淋巴细胞转化㊀于新城疫首次免疫
后第７(D ７)㊁２１(D ２１)㊁３５(D ３５)天,每组随机抽取６只鸡心脏采血用MT T 法检测外周血淋巴细胞增殖.
１．５．３㊀血清细胞因子㊀于新城疫首次免疫后第７(D ７)㊁２１(D ２１)㊁３５(D ３５)天,每组随机抽取６只鸡翅静脉采血用E L I S A 法按照说明书检测血清中I F N
－γ和I L －２含量.１．５．４㊀免疫器官指数㊀于新城疫首次免疫后第７(D ７)㊁２１(D ２１)㊁３５(D ３５)
天,每组随机抽取６只鸡称重,剖杀,取脾脏和法氏囊称重,计算其器官指数.
免疫器官指数＝免疫器官/体重.
１．５．５㊀体重变化㊀于新城疫首次免疫前从全群随机抽取２０羽称重,计算平均体重,作为各组的初始体重,于试验结束(法氏囊首次免疫后４２d )每组按重复称重,计算平均体重.
１．６㊀数据处理
数据以M e a n s ʃS D 表示,用S P S S 软件进行
D u n c a n s 多重分析.
２㊀结果与分析
２．１㊀血清N D －H I 效价的变化
在首免后第７天(D ７)
,３个药物剂量组和散剂对照组的抗体效价高于免疫对照组,但无显著差异(P
＞０．０５);在D １４和D ２８,
药物高㊁中剂量组和散剂对照组显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P ＜０．０５);在D ２１,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组显著高于免疫对照组(P ＜０．０５);在D ３５,
药物高㊁中剂量组和药物对照组高于免疫对照组,但差异不显著
(P ＞０．０５);在D ４２,
药物高㊁中剂量组和散剂对照组显著高于免疫对照组(P ＜０．０５
)(表２).表２㊀N D－H I 效价的变化(l o g
２)组别D ７
D １４
D ２１
D ２８
D ３５
D ４２
药物高剂量３．８ʃ０．７a
５．２ʃ０．４a
７．６ʃ０．５a
７．８ʃ０．４a
７．３ʃ０．５a
７．０ʃ０．４a b
药物中剂量３．５ʃ０．５a ５．２ʃ０．５
a ７．５ʃ０．５
a ７．７ʃ０．５
a ７．２ʃ０．５
a ７．０ʃ０．５a
b 药物低剂量３．５ʃ０．５a ４．３ʃ０．５b ６．７ʃ０．５b
c ７．０ʃ０．８b ６．７ʃ０．８a b ６．３ʃ０．８b c 散剂对照３．５ʃ０．５a ５．３ʃ０．５a ７．７ʃ０．５a ７．７ʃ０．５a ６．５ʃ０．５a b ７．１ʃ０．４a 药物对照３．３ʃ０．５a ５．０ʃ０．４a b ７．３ʃ０．５a b ７．５ʃ０．５a b ６．８ʃ０．８a b ６．４ʃ０．５b c 免疫对照３．３ʃ０．５
a ４．３ʃ０．５
b ６．５ʃ０．５
c ７．０ʃ０．６b ６．７ʃ０．５a b ６．０ʃ０．５c 空白对照
２．０ʃ０．５b ２．０ʃ０．８c １．７ʃ０．７d １．５ʃ０．５c １．０ʃ０．０c ０．７ʃ０．５
d ㊀㊀注:同列数据上标不同小写字母者差异显著(P ＜０．０５
).下同.２．２㊀血清I B D 抗体效价的变化
在D ７,各组未测出I B D 抗体效价.在D １４,散剂对照组的I B D 效价显著高于免疫对照组(P ＜
０．０５
),药物高㊁中剂量组和药物对照组高于免疫对照组和药物低剂量组,但差异不显著(P ＞０．０５);在D ２１㊁D ２８和D ３５,
药物高㊁中剂量组㊁散剂对照组和药
物对照组显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P ＜０．０５);在D４２,药物高剂量组和散剂对照组显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P＜０．０５);药物中剂量组和药物对照组高于免疫对照组和药物低剂量组,但差异不显著(P＞０．０５)(表３).
表３㊀I B D效价的变化(l o g２)
组别D７D１４D２１D２８D３５D４２药物高剂量－１．０ʃ０．０a b３．２ʃ０．４a b４．７ʃ０．５a５．０ʃ０．０a５．３ʃ０．５a 药物中剂量－１．０ʃ０．０a b３．２ʃ０．４a b４．７ʃ０．５a４．９ʃ０．４a b５．２ʃ０．４a b 药物低剂量－０．７ʃ０．５b２．６ʃ０．５c４．２ʃ０．４c４．４ʃ０．５c５．０ʃ０．０b 散剂对照－１．２ʃ０．４a３．３ʃ０．５a４．７ʃ０．５a５．０ʃ０．０a５．３ʃ０．５a 药物对照－１．０ʃ０．０a b３．２ʃ０．４a b４．６ʃ０．５a b４．９ʃ０．５a b５．２ʃ０．４a b 免疫对照－０．７ʃ０．５b２．５ʃ０．５c４．０ʃ０．０c４．３ʃ０．５c４．８ʃ０．４b 空白对照－－－－－－
㊀㊀注: － 表示A G P效价阴性.
２．３㊀外周血淋巴细胞增殖的变化
在D７㊁D２１㊁D３５,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组的A５７０值均显著高于免疫对照组㊁药物低剂量组和空白对照组(P＜０．０５),药物高㊁中剂量之间差异不显著(P＞０．０５)(表４).
表４㊀外周血淋巴细胞增殖的变化(A５７０)
组别D７D２１D３５药物高剂量０．４０ʃ０．０３a０．３９ʃ０．０２a０．３４ʃ０．０１a 药物中剂量０．３９ʃ０．０１a０．３９ʃ０．０１a０．３４ʃ０．０３a 药物低剂量０．３４ʃ０．０２b０．３２ʃ０．０２b０．２９ʃ０．０２b 散剂对照０．４０ʃ０．０３a０．４０ʃ０．０１a０．３５ʃ０．０１a 药物对照０．３９ʃ０．０２a０．３９ʃ０．０２a０．３５ʃ０．０２a 免疫对照０．３３ʃ０．０１b０．３１ʃ０．０３b０．２９ʃ０．０１b 空白对照０．２７ʃ０．０２c０．２６ʃ０．０２c０．２８ʃ０．０１b ２．４㊀血清I F N－γ含量的变化
在D７㊁D２１,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组的I F N－γ含量显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P＜０．０５);在D３５,药物高剂量组和散剂对照组显著高于免疫对照组(P＜０．０５),药物中剂量组和药物对照组高于免疫对照组和药物低剂量组但差异不显著(P＞０．０５)(表５).
表５㊀血清I F N－γ含量的变化p g/m L 组别D７D２１D３５药物高剂量１５１ʃ９a b１４７ʃ１０a１１６ʃ１１a 药物中剂量１５０ʃ１０a b１４５ʃ１２a１１０ʃ１０b 药物低剂量１３５ʃ９c１３０ʃ９b９８ʃ９b 散剂对照１５３ʃ１２a１４５ʃ１１a１１５ʃ１１a 药物对照１５１ʃ９a b１４６ʃ９a１０７ʃ１０a b 免疫对照１３２ʃ１１c１３０ʃ１２b１０１ʃ９b 空白对照１０５ʃ１０d１０１ʃ９c９９ʃ８b ２．５㊀I L－２含量的变化
在D７㊁D２１,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组的I L－２含量显著高于免疫对照组和药物低剂量组(P＜０．０５);在D３５,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组高于免疫对照和药物低剂量组但差异不显著(P＞０．０５)(表６).
表６㊀血清I L－２含量的变化p g/m L 组别D７D２１D３５药物高剂量１６０ʃ１１a１５５ʃ１２V a１３１ʃ１０a 药物中剂量１５８ʃ９a１５０ʃ１１a b１３０ʃ１２a 药物低剂量１４５ʃ８b１３０ʃ１２c１２５ʃ１１a b 散剂对照１６４ʃ１３a１５０ʃ１３a b１３０ʃ９a 药物对照１６４ʃ１１a１４８ʃ９a b１３２ʃ１２a 免疫对照１４２ʃ１２b１２９ʃ１１c１２５ʃ１０a b 空白对照１２５ʃ９c１１５ʃ１０d１２０ʃ９b c ２．６㊀脾脏指数的变化
在D７和D２１,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组的脾脏指数显著大于免疫对照组和药物低剂量组(P＜０．０５);在D３５,各免疫组显著大于空白对照组(P＜０．０５)(表７).
表７㊀脾脏指数的变化m g/g 组别D７D２１D３５药物高剂量２．４ʃ０．２a２．４ʃ０．１a２．０ʃ０．１a 药物中剂量２．３ʃ０．１a２．４ʃ０．２a２．０ʃ０．２a 药物低剂量１．８ʃ０．２b１．９ʃ０．１b１．９ʃ０．１a 散剂对照２．４ʃ０．１a２．５ʃ０．１a２．１ʃ０．２a 药物对照２．３ʃ０．２a２．０ʃ０．２b２．０ʃ０．１a 免疫对照１．７ʃ０．１b１．９ʃ０．１b２．０ʃ０．２a 空白对照１．５ʃ０．１c１．４ʃ０．２c１．３ʃ０．１b
２．７㊀法氏囊指数的变化
在D７㊁D２１,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照和药物对照组的法氏囊器官指数显著大于免疫对照组㊁药物低剂量组和空白对照组(P＜０．０５);在D３５,各组间的差异不显著(P＞０．０５)(表８).
表８㊀法氏囊器官指数的变化m g/g 组别D７D２１D３５药物高剂量４．４ʃ０．２a３．５ʃ０．３a３．０ʃ０．３a 药物中剂量４．４ʃ０．３a３．４ʃ０．２a３．１ʃ０．２a 药物低剂量３．６ʃ０．２b３．０ʃ０．２b３．０ʃ０．３a 散剂对照４．３ʃ０．２a３．６ʃ０．３a３．０ʃ０．３a 药物对照４．４ʃ０．３a３．４ʃ０．２a２．９ʃ０．２a b 免疫对照３．６ʃ０．２b３．０ʃ０．２b２．９ʃ０．３a b 空白对照３．２ʃ０．３c２．９ʃ０．２b２．８ʃ０．３a b ２．８㊀体重变化
在D４２,药物高㊁中剂量组和散剂对照组的平均体重显著重于免疫对照组㊁药物对照组㊁药物低剂量组和空白对照组(P＜０．０５),高㊁中剂量和散剂对照组之间的差异不显著(P＞０．０５)(表９).
表９㊀体重的变化g 组别D０D４２
药物高剂量１６７ʃ８a８０１ʃ２５a b
药物中剂量１６７ʃ８a７９５ʃ２４a b
药物低剂量１６７ʃ８a７６０ʃ２８c
散剂对照１６７ʃ８a８１０ʃ２９a
药物对照１６７ʃ８a７６１ʃ２３c
免疫对照１６７ʃ８a７５０ʃ２７c d
空白对照１６７ʃ８a７５５ʃ２８c d ３㊀讨论
抗体效价是反映体液免疫的指标,T淋巴细胞增殖及其细胞因子分泌功能是反映细胞免疫的指标之一.本试验结果表明,药物高㊁中剂量组㊁散剂对照组和药物对照组在多数时间点的血清N D和I B D 抗体效价㊁淋巴细胞增殖㊁血清I F N－γ和I L－２含量及免疫器官指数多高于或显著高于免疫对照组和药物低剂量组,药物高㊁中剂量组和散剂对照组的增重效果显著优于免疫对照组㊁药物对照组和药物低剂量组.表明芪板青颗粒高㊁中剂量具有较好增强免疫作用,鉴于高㊁中剂量组之间多无显著差异,推荐中剂量(０．５％混饮)为临床应用剂量.
本方按照扶正祛邪的原则拟方,同时重视改善和提高机体非特异性免疫力,方中黄芪益气固表,蒲公英㊁大青叶㊁板蓝根㊁金银花等不仅有较强的抗菌作用,它们还具有增强机体免疫㊁抗病毒的的功效.诸药相合,达到益气固表㊁滋阴清热㊁扶正祛邪之效.
近年来,由于超强毒和病毒血清亚型(或变异株)的出现,疫苗本身的缺陷或机体免疫功能低下等原因,致使疫苗的免疫效果不理想,甚至导致免疫失败.因此,免疫增强剂的研究已引起国内外学者的广泛重视.
４㊀结论
本试验结果表明,在饮水中添加１％㊁０．５％的芪板青颗粒能够增强新城疫苗的免疫效果,并有一定的促增重的作用,可以作为免疫增强剂推广应用,推荐中剂量(０．５％混饮)为临床应用剂量.
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