生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
生化实验二 还原糖的测定(,-二硝基水杨酸法)
（3,5-二硝基水杨酸法）
目的
• 掌握还原糖和总糖的测定原理 • 学习还原糖和总糖的3,5-二硝基水 杨酸(DNS)测定法。
原理
单糖和某些寡糖含有游离的醛基或 酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖 和蔗糖等属于非还原性糖。
原理
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸 及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为 棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的 NaOH碱性溶液中此化合物在540nm处有最 大吸收，在一定的浓度范围内还原糖的量 与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测 定样品中还原糖的含量。
原理
黄色
棕红色
实验器材
1、红薯 2、试管1.5cm × 15cm(×10)、试管1.8cm × 18cm(×2) 3、吸管 1mL(×2)、10mL(×2) 4、水浴锅。 5、电炉。 6、722型分光光度计 7、pH试纸（1~14） 8、容量瓶100mL(× 3)。 9、量筒、研钵、三角烧瓶、玻璃漏斗。 10、电子天平
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
蒸馏水/mL
沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温
7.0
7.0
7.0
7.0
7.0
7.0
葡萄糖浓度/mg/mL
0
0.2
0.4
0..6
0.8
1.0
A540nm
用EXCEL作图、求R2和公式
1.6
y = 1.3727x - 0.0192
1.4
R2 = 0.9987
3、样品中总糖提取：
准确称取0.5g面粉（或藕粉），加蒸馏水约3ml， 在研钵中磨成匀浆，转入100ml三角锥瓶瓶中，并用 15mL的蒸馏水冲洗研钵，洗出液也转入三角锥瓶中 。再向三角锥瓶中加入6mol/LHCl溶液10ml搅拌均匀 后在沸水浴总水解0.5小时，取出1~2滴置于白瓷板上 ，加1滴I2-KI溶液检查水解是否完成，如已水解完成 则不显蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酞指 示剂，以6mol/LNaOH溶液中和至溶液呈微红色，并 定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中， 定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液 ，取1mL进行用于总糖测定。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
糖的定量实验报告
实验目的：1. 掌握糖类物质的定量分析方法。
2. 熟悉3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的原理和操作步骤。
3. 了解糖类物质在食品、医药等领域的应用。
实验原理：还原糖是一类具有游离醛基或酮基的单糖和二糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
它们在碱性条件下能与3,5-二硝基水杨酸反应，生成棕红色的复合物。
在一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，通过比色法可以测定样品中的还原糖含量。
实验材料：1. 样品：不同浓度和种类的糖溶液。
2. 试剂：3,5-二硝基水杨酸、氢氧化钠、硫酸铜、苯酚、亚硫酸钠、酒石酸钾钠、葡萄糖、蒸馏水等。
3. 器材：可见分光光度计、电子天平、水浴锅、移液器、试管、容量瓶等。
实验步骤：1. 标准曲线的制作：- 配制一系列已知浓度的葡萄糖标准溶液。
- 按照实验方法测定各标准溶液的光吸收值。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 配制样品溶液，按照实验方法测定其光吸收值。
- 根据标准曲线，计算样品中还原糖的含量。
3. 实验方法：- 准确移取一定量的样品溶液和3,5-二硝基水杨酸试剂，混合均匀。
- 将混合液置于水浴锅中加热煮沸5分钟。
- 冷却后，用比色法测定光吸收值。
实验结果：1. 标准曲线的制作：- 通过实验得到的标准曲线，线性关系良好，相关系数R²>0.99。
2. 样品测定：- 根据标准曲线，计算出样品中还原糖的含量。
实验讨论：1. 影响还原糖测定结果的因素：- 样品溶液的浓度：样品溶液浓度越高，光吸收值越大，但过高的浓度会导致吸光值超出仪器的测量范围。
- 实验操作：实验操作过程中，需严格控制温度、时间等条件，以保证实验结果的准确性。
2. 糖类物质的应用：- 糖类物质在食品、医药、化工等领域具有广泛的应用，如：食品添加剂、药物辅料、化工原料等。
结论：通过本实验，掌握了糖类物质的定量分析方法，熟悉了3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的原理和操作步骤。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法实验_百替生物
碳水化合物
实验一 还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原
糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶
解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸
水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄
糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨
基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，
（3）显色和比色
取 4 支 20mL 具塞刻度试管，编号，按表 2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作 标准曲线的 0 号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表 2 样品还原糖测定
管号
还原糖待测液 （mL）
总糖待测液 （mL）
蒸馏水 （mL）
DNS
光密度值
（mL） （OD540nm）
提取液总体积 查曲线所得葡萄糖毫克数×
测定时取用体积 还原糖（%）=
样品毫克数
×100
查曲线所得水解后还原糖毫克数×稀释倍数
总糖（%）=
×0.9×100
样品毫克数
六、附 注
1． 离心
时对称位置的离心管必须配平。
2． 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告
35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告35二硝基水杨酸比色定糖法实验报告引言：糖是生命活动中必不可少的营养物质，它在人体内起着能量供应和维持正常生理功能的重要作用。
因此，糖的检测方法备受关注。
本实验旨在通过35二硝基水杨酸比色定糖法，对不同浓度的葡萄糖溶液进行定量测定，并探讨该方法的可行性和准确性。
材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、比色皿、移液管等。
2. 实验试剂：35二硝基水杨酸溶液、葡萄糖溶液、硫酸、去离子水等。
3. 实验操作：首先，准备一系列不同浓度的葡萄糖溶液，分别称取5 mL，加入比色皿中。
然后，加入相应体积的35二硝基水杨酸溶液，混匀后静置15分钟。
最后，使用分光光度计在波长540 nm处测定吸光度。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列不同浓度的葡萄糖溶液的吸光度数据，如下表所示：浓度（mg/mL）吸光度0.1 0.2340.2 0.4650.3 0.6980.4 0.9320.5 1.165根据实验数据，我们可以绘制出葡萄糖溶液浓度与吸光度之间的标准曲线。
通过对标准曲线的拟合，我们可以得到未知浓度的葡萄糖溶液的浓度。
该实验方法的原理是35二硝基水杨酸与葡萄糖在酸性条件下发生反应，生成红色化合物。
这种化合物的吸光度与葡萄糖的浓度成正比，因此可以通过测定吸光度来间接测定葡萄糖的浓度。
该方法的优点是简单、快速、准确，适用于大批量样品的测定。
然而，该方法也存在一些局限性。
首先，该方法只适用于葡萄糖的测定，对其他糖类的测定不适用。
其次，该方法对于溶液中存在的其他物质具有较强的选择性，因此在实际应用中需要注意样品的预处理。
结论：通过35二硝基水杨酸比色定糖法，我们成功地对不同浓度的葡萄糖溶液进行了定量测定，并得到了标准曲线。
该方法具有简单、快速、准确的特点，适用于大批量样品的测定。
然而，该方法的适用范围有限，对于其他糖类的测定不适用。
在实际应用中，还需要注意样品的预处理和选择合适的测定条件。
总糖和还原糖的测定及葡萄糖标准曲线的绘制-3,5-二硝基水杨酸法
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100
可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、
吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100%
m1 C2V2 ω(总糖)=——×0.9×100%
m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用 2、移液器的使用 3、离心机的使用
注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用
比色皿
V-1100可见分光光度计 Nhomakorabea开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm）
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色，
即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl 沸水浴，30min (不时搅拌)
冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸）
MODE键切换到T，将黑体放入光路中
合上盖，0键校零
MODE键切换到A，参比液放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及 其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为 棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
NaOH 加热
3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖含量
3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用于测定糖含量的方法。
该方法基于糖的还原性，利用糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成一个特定的有色产物，通过测量这个有色产物的吸光度，可以确定糖的含量。
下面是该方法的步骤：
1. 准备一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。
可以将一定量的3,5-二硝基水杨酸粉末溶解在适量的溶剂（如醇）中，制备出一定浓度的3,5-二硝基水杨酸溶液。
2. 准备样品溶液。
将待测糖溶解在适量的溶剂中，制备出合适浓度的糖溶液。
3. 反应。
将一定量的样品溶液与一定量的3,5-二硝基水杨酸溶液混合，在适当的温度下进行反应。
4. 吸收测量。
将反应后的溶液用比色皿装入分光光度计中，设置波长（通常为540 nm），测量吸光度。
5. 构建标准曲线。
根据已知浓度的糖溶液，按照上述步骤测量吸光度，并绘制出吸光度与糖浓度之间的关系图。
可以根据标准曲线来确定未知样品中糖的含量。
需要注意的是，该方法只适用于对还原性糖进行测定，不适用
于非还原性糖的测定。
同时，实验过程中要注意操作规范和安全，避免接触有毒物质。
实验一,3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
生物化学实验实验报告
生物化学实验实验报告基础生物化学实验论文——马铃薯的成分分析课程名称：基础生物化学实验班级：学号：姓名：摘要根据在基础生物化学实验的六堂课上，根据介绍相关的技术与方法对土豆成分的含量进行了分析与研究，主要研究其蛋白质含量、还原糖含量与VC含量，运用相应的数据统计方法，结合相关的文献资料进行整理，对马铃薯进行初步的品质分析，作为本文的基础数据基础。
关键词：马铃薯蛋白质含量还原糖含量VC含量前言、洋山芋，属茄科马铃薯，又称地蛋、土豆是全球第三大多年生草本植物，块茎可供食用，重要的粮食作物，仅次于小麦和玉米。
与小麦、玉米、稻谷、高粱并成为世界五大作物。
人工栽培历史马铃薯原产于南美洲安第斯山区，年的秘年到5000最早可追溯到大约公元前8000 鲁南部地区。
马铃薯主要生产国有中国、俄罗斯、印度、乌中国是世界马铃薯总产最多的国美国等。
克兰、家。
年，中国将启动马铃薯主粮化战略，推2015进把马铃薯加工成馒头、面条、米粉等主食，马、玉米外的又一主粮。
铃薯将成稻米、小麦在联合国粮食及农业组织大会,112005年月秘鲁常驻代表提出一项寻求将世界关注重重,上点转移到马铃薯对粮食安全以及增强发展中国此提议在家对于马铃薯种植的重要性的提议,年为国际2008,当年获得通过联合国宣布认定年，马铃薯的世界产量已经2010马铃薯年。
在中华人民共和国是吨，188924183达到了亿万万吨。
中国马铃7500世界第一产量大国，将近．内蒙古和东北地薯的主产区是西南山区、西北、约占全国其中以西南山区的播种面积最大，区。
黑龙江省是中国最大的马铃总面积的三分之一。
薯种植基地。
一、实验过程及各自分析1.1实验一马铃薯的VC含量分析以及分析结果一、实验过程（1）取新鲜的黄瓜约2g加入少量2％草酸溶液少许研碎，注入50ml容量瓶中，加2％草酸溶液稀释至刻度线，取滤液十毫升于三角瓶中，用已标定过得2,6-二氯酚靛酚钠盐溶液滴定至出现桃红色，15秒不褪色，再吸收2%草酸溶液10ml，用染料作空白滴定，记下用量。
生物化学实验报告 2010
孝感学院生命科学技术学院实验报告专业：学号：姓名：分数：实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉(1000 g)2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2（4）三角瓶：100 mL×1 （5）容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2；10 mL×1 （7）恒温水浴锅（8）煤气炉（9）漏斗（10）天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000 mL 容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL。
实验一-3--5--二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖
实验一3, 5 -二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖1、实验目的：掌握还原糖和总糖测定的基本原理掌握比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
2、实验原理：在NaOH和丙三醇存在下，3,5-二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
3、实验步骤：（一）葡萄糖标准曲线制作1. 取6个试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水2. 向各试管中分别加入DNS试剂1 ml，充分混合，放入沸水浴中加热煮沸2 min 进行显色，取出试管放入盛有冷水的烧杯中迅速冷却。
3.向各管中分别加入8 ml蒸馏水，充分混合。
4.以空白管（0号管）做对照，于540nm 波长下调0，然后测定各管的OD 值。
5.以光吸收值作为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。
如果该直线不通过零点，必须重做。
（二）还原糖的制备1. 称取2g玉米粉，把它放入一个100ml的三角瓶中，然后加入20~30ml蒸馏水，搅拌均匀。
2. 把三角瓶放于一个50℃水浴中保温30 min，不时搅拌。
3. 拿出三角瓶，将三角瓶内含物转入50ml的容量瓶中：过滤，定溶，充分混合，滤出液即为还原糖提取液。
(三) 样品总糖的水解和提取1. 取1g玉米粉，放在100ml三角瓶中，加15ml水溶解，再加10ml 6mol/L 盐酸，混匀。
2. 将三角瓶置于沸水浴中加热煮沸30 min。
3.取出1~2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
4.拿出三角瓶，冷却，过滤，滤出液即为总糖提取液。
5.加入3-5滴酚酞指示剂，混匀，用6mol/L的NaOH中和至溶液呈微红色。
将中和后的溶液转入100 ml的容量瓶中定容。
（四）样品中含糖量的测定1. 取5支试管，编号，按下表向每支试管中加入试剂。
3,5-二硝基水杨酸比色定糖法
实验一 3，5-二硝基水杨酸比色定糖法目的要求1.掌握 3，5-二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。
2.用 3，5-二硝基水杨酸定糖法测定山芋份中的总糖度及还原糖。
3.熟悉 721型分光光度计的原理及使用方法实验原理3， 5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作方法一、葡萄糖标准曲线的制定取9支大试管，分别按下表顺序加入各种试剂：将上述各管溶液混匀后，在721分光光度计上用520纳米进行比色测定，用空白管溶液调零点。
记录光吸收值。
以葡萄糖浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制出标准曲线。
二、山芋粉中总糖和还原糖含量的测定1.样品中还原糖的提取：准确称取2克山芋粉，放入100毫升烧杯内，加入85%乙醇50毫升，混匀，在50℃恒温水浴中保温30分钟，过滤，滤渣再用85%乙醇提取二次。
将滤液合并，蒸去乙醇，加少量水，移入100毫升容量瓶中，用水稀释到刻度，备用。
2.样品中总糖的水解及提取：准确称取山芋粉1克，放入大试管中，加入10毫升6N盐酸和15毫升蒸馏水。
混均，在沸水浴中加热半小时后，用碘化钾-碘溶液检查水解程度。
若已水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后加入酚酞指示剂1滴，以10%氢氧化钠中和至溶液呈微红色。
过滤并定容至100毫升。
再精确吸取上述溶液10毫升，放人100毫升容量瓶中，稀释刻刻度，备用。
3.样品中含糖量的测定：取7支大试管，分别按下表加入各种试剂：将各管混匀后，按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度，在标准曲线上查出相应的还原糖含量，按下述公式计算出山芋粉内还原糖与总糖的百分含量。
试剂和器材一 、试剂（1）3，5-二硝基水杨酸试剂 （又称DNS 试剂）：甲液：溶解6.9克结晶酚于15.2毫升IO%氢氧化钠中，并稀释至69毫升，在此溶液中加入6.9克亚硫酸氢钠。
总糖和还原糖的测定及葡萄糖标准曲线的绘制-3,5-二硝基水杨酸法
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
实验一、总糖和还原糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸法
一、实验目的
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理；
2、学习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原
糖的方法。
二、实验原理
还原糖是指含有自由醛基或者酮基的糖类， 单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还
原糖；利用糖的溶解度不同，可将植物样
品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；
滤纸过滤，取10ml滤液用蒸馏水定容至 100ml，成稀释1000倍的总糖水解液，混匀, 取1ml总糖水解液，测定其还原糖的含量
3、制作葡萄糖标准曲线及还原糖、总糖 含量的测定。
取8支洁净的试管，分别用记号笔标上0～ 7号，按照下表进行操作。其中0～5管，用于 标准曲线的制作,以吸光度为纵坐标，各标准 液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线 （用Excel表制作）。
试管容量瓶三角烧瓶量筒吸管移液管洗耳球玻棒洗瓶漏斗离心管六凹反应盘ph试纸114四实验试剂1标准葡萄糖溶液10mgml2dns试剂36mollhcl46mollnaohki溶液五操作1样品中还原糖的提取准确称取05g山芋粉置于100ml三角烧瓶中加3ml蒸馏水调成糊状再加30ml蒸馏水50水浴30min不时搅拌转移至50ml离心管中4000rpm5min上清液1沉淀加20ml蒸馏水洗涤沉淀4000rpm5min上清液2沉淀弃置于容量瓶中蒸馏水定容至100ml混匀取1ml即可进行还原糖的测定
生化实验一 还原糖的测定
五、操作
1. 葡萄糖标准曲线的制作 取干净试管6支，按下表进行操作。以吸光度作为纵坐标，各标准液浓度
（mg/ml）作为横坐标，作图得标准曲线。（用蒸馏水调零点）
管号 试剂
标准葡萄糖溶液/ml 蒸馏水/ml DNS试剂/ml
蒸馏水/ml 葡萄糖浓度/mg/ml
A540nm
0 1 2 345
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
1
1.2
2. 样品中还原糖提取和测定 准确称取2g红薯，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，
转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出 液也转入三角烧瓶中，于50℃水浴中保温0.5h，不时搅拌，使 还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到50ml离心管中，于 4000r/min下离心5min，上清转入100ml容量瓶中，沉淀用 20ml蒸馏水洗一次，再离心，将两次离心的上清液合并，用蒸 馏水定容至100ml，混匀，作为还原糖待测液。取1ml进行还 原糖的测定。
四、实验试剂 1. 标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取 干燥恒重的葡萄糖200mg，溶于蒸馏水并定容 至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 2. 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：将2.5g DNS和150ml 2mol/L NaOH溶液，加到250ml含 有90g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加2.5g结晶 酚和2.5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水 定容至1000ml，存储于棕色瓶中备用。
（用蒸馏水调零点）
试剂 待测溶液/ml
还原糖溶液 1.0
蒸馏水/ml
0
DNS试剂/ml
2.0
血糖标准曲线实验报告
一、实验目的1. 理解血糖测定的原理和方法。
2. 学习并掌握3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖的原理。
3. 建立血糖标准曲线，用于未知血糖样品的定量分析。
二、实验原理本实验采用3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖。
该法基于葡萄糖的还原性，在碱性条件下，3,5-二硝基水杨酸与葡萄糖反应生成棕红色化合物。
通过测定该化合物的吸光度，可以计算出葡萄糖的浓度。
三、实验器材1. 实验室天平2. 100ml容量瓶3. 移液管4. 烧杯5. 恒温水浴锅6. 分光光度计7. 3,5-二硝基水杨酸试剂8. 氢氧化钠溶液9. 标准葡萄糖溶液10. 未知血糖样品四、实验步骤1. 配制标准葡萄糖溶液：- 准确称取1.0g无水葡萄糖，溶解于100ml蒸馏水中，配制成10mg/ml的标准葡萄糖溶液。
- 分别取0.0、0.5、1.0、1.5、2.0ml标准葡萄糖溶液，加入9.5ml蒸馏水，配制成浓度为0、0.5、1.0、1.5、2.0mg/ml的系列标准溶液。
2. 显色反应：- 向每个标准溶液中加入1.5ml 3,5-二硝基水杨酸试剂和1.5ml氢氧化钠溶液。
- 将混合液置于沸水浴中加热5分钟。
3. 吸光度测定：- 冷却后，用分光光度计在540nm波长下测定各溶液的吸光度。
4. 绘制标准曲线：- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
5. 未知血糖样品测定：- 按照步骤2和3对未知血糖样品进行显色反应和吸光度测定。
- 根据标准曲线，计算未知血糖样品的葡萄糖浓度。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 通过实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程为：A = 0.0568C + 0.0031（R² = 0.9986）。
2. 未知血糖样品测定：- 对未知血糖样品进行测定，得到吸光度为0.85。
- 根据标准曲线，计算未知血糖样品的葡萄糖浓度为1.7mg/ml。
六、实验讨论1. 3,5-二硝基水杨酸法是一种简单、快速、灵敏的血糖测定方法，适用于临床和科研领域。
生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线
实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线马铃薯总糖含量测定实验目的1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。
实验原理1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。
3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量
实验五 3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量一：目的了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理 掌握总糖定量测定的操作方法 二：原理还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖（如葡萄糖）和某些具有还原性的双糖（如麦芽糖）。
它们在碱性条件下，可变成非常活泼的烯二醇。
遇氧化剂时，具有还原能力，烯二醇本身则被氧化成糖酸及其他产物。
黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm 处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。
对于非还原性的双糖（如蔗糖）以及还原性很小的多糖（如淀粉），应先用酸水解法将它们彻底水解成单糖。
再借助于测定还原糖的方法，可推算出总糖的含量。
由于多糖水解时，在每个单糖残基上加了一分子水，因而在计算时，须扣除加入的水量，当样品里多糖含量远大于单糖含量时，则比色测定所得总糖含量应乘以COOHOHNO 2O 2N 还原糖COOHOHO 2N NH 23,5-二硝基水杨酸（黄色）3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色）C C H O OH OH C H C H 2OH OH( )n ( )n C H C OH OHC H H 2OH OH糖酸折算系数（1-18018= 0.9），即得比较接近实际的样品中总糖含量。
三：实验材料及设备 1、材料：面粉2、仪器：分光光度计 电子天平 沸水浴3、器材：刻度试管： 25mL ×8 容 量 瓶： 100mL ×2 锥 形 瓶： 100mL ×1移 液 管： 1mL ×2 2mL ×2 10mL ×2 烧 杯： 250mL ×1 50mL ×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 滤 纸： 11cm 坐 标 纸漏斗、洗瓶、白瓷板、试管架、移液管架、试管夹、玻棒：各1 四：试剂的配制1、葡萄糖标准液（1mg/mL ）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。
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实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线
马铃薯总糖含量测定
实验目的
1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法；
2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法；
3．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的原理及方法；
4．掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。
实验原理
1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖（葡萄糖）的及标准曲线定制原理
3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物，该有色物质在540nm 处有最大吸光度，且在一定浓度范围内（一般OD值在0.2～0.8范围内线性较好），还原糖的量与反应液的颜色强度（吸光度OD值）呈线性关系，利用分光光度仪，以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品，在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度（OD值）大小，通过微机处理数据，定制葡萄糖标准曲线，确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程；
2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理
先将马铃薯去皮，经机械粉碎，过滤和清水漂洗，烘干制成马铃薯淀粉；再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖，经中和定容，配制成马铃薯总糖含量测定的待测液（即样品液）；再以标准曲线测定的加样操作方法，测定出样品待测液的吸光度大小，将测定的吸光度大小代入其回归方程，即可计算出样品待测液的显色浓度，根据稀释倍数关系，计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量，并测定出马铃薯总糖百分含量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验操作
1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线
（1）葡萄糖标准溶液的配制：（2mg/mL）准确称取2000mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL，冰箱保存备用
（2）葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录（详见表1）
按表1进行实验操作，在沸水浴中准确反应20min，取出后立即用冷水冷却，加蒸馏水定容至25mL，摇匀，用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。
并记录A540nm处测得的各浓度及样品对应的OD值。
（3）葡萄糖标准曲线定制微机数据处理和回归方程（详见表2）及标准曲线的绘制见图1
2. 马铃薯总糖含量测定操作
（1）马铃薯淀粉的制备（此处略，学生实验报告需补充完整）
（2）马铃薯淀粉水解待测液配制（2mg/mL）准确称取干燥恒重后的自制淀粉250mg，加入100mL 蒸馏水和2mL20%硫酸，在沸水浴中加热水解，直到水解彻底后，用20%氢氧化钠溶液中和，至pH = 6.8～7.0后，将反应液转入250mL 容量瓶中，补加蒸馏水定容至250mL，配制成浓度为2mg/mL的淀粉水解后，即总糖测定的样品液，冰箱保存备用。
（3）马铃薯淀粉水解待测液还原糖测定（操作方法详见表1）
表1 3,5-二硝基水杨酸法定制葡萄糖标准曲线实验加样操作记录表 试管编号
012345678样1样22000ug/mL 葡萄糖标准溶液/ mL 0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00 1.20
1.40
1.60
1.00
1.00
3,5-二硝基水杨酸（mL ）蒸馏水（mL ）
2.00
1.80
1.60
1.40
1.20
1.00
0.80
0.60
0.4
2.0mL 立即摇匀放入沸水浴中准确反应10min
取出后用自来水冷却，用蒸馏水定容至25mL 后，以0号试管为空白对照，在540nm 处比色测定OD 值。
表2 3,5-二硝基水杨酸法定制葡萄糖标准曲线数据处理统计表
01234567
8
0.016.0
32.0
48.0
64.0
80.0
96.0
112.0128.0
0.000.0840.1700.2510.3140.3900.4640.5260.5980.01
0.0890.1630.2370.3110.3850.4590.5330.607
样1
样2
0.3630.372
实验数据的相关性因素( r )
线性回归方程斜率 (b)线性回归方程截距 (a)线性回归方程
试管编号
标准葡萄糖显色浓度 ( ug / mL )回归方程对应浓度下的吸光度A 540nm 实验测试的吸光度0.004630.01444
y = 0.00463x + 0.01444
0.9990
3. 马铃薯总糖的测定
（1）待测淀粉水解液显色浓度的计算：将样品水解液与DNS试剂反应后测得的吸光度大小，代入葡萄糖（还原糖）标准曲线对应的回归方程中，计算出水解液的显色浓度x显色（ug/mL）。
（0.372 + 0.363）/2 = 0.00463 x显色+ 0.01444
x显色= [（0.372 + 0.363）/（2×0.00463）－0.01444 ]= 1983.5（ug/mL）
（2）待测淀粉水解液中还原糖浓度x水解的计算：
x水解= [（0.372 + 0.363）/（2×0.00463）－0.01444 ]×25 = 1983.5（ug/mL）
（3）马铃薯总糖百分含量（以还原糖表示，马铃薯淀粉提取率若为8.33%）
则马铃薯总糖百分含量w为：
w =(x水解/x样品) ×8.33% =（1983.5 / 2000 ）×8.33% = 8.26%
以下报告内容此处略（学生实验报告需补充完整）。
实验结果分析
思考题
1. 测定物质含量，定制标准曲线的目的是什么？绘制标准曲线需在图中标示出哪些要素？
2、定制标准曲线时如何确定标准品及标准品的浓度使用范围？为什么必需设定空白（参比）管？
在一定波长范围内，分别测定物质的吸光度，选择吸光度最大的波长就是物质的特质吸收波长。