基因工程考试重点淮师

一、名词解释
1.星号活性：在非标准条件下，有些内切酶可在与其识别序列相似但不完全相同的位点发生切割反应。

这
种非特异性的切割即所谓的“星号活性”。

2.质粒的不相容性：在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳
定地共存，这一现象称为质粒的不亲和性，也称不相容性。

3.SD序列：存在于原核生物起始密码子AUG上游7-12个核苷酸处的一种4-7个核苷酸的保守序列，它与
16SrRNA3’端反向互补，所以可将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译。

4.启动子：是RNA聚合酶能够识别并与之结合，从而确保转录精确而有效地起始的DNA序列，通常位于基
因上游。

能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。

5.转录终止子：在一个基因的3′端或是一个操纵子的3′端往往还有一特定的核苷酸序列，是为转录提供
终止信号的一段DNA序列，是基因表达的顺式作用负调控元件。

6.多克隆位点：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段，以方便
外源DNA片段的插入。

现在几乎所有的载体都含有一个人工合成的密集排列的系列克隆位点，称为多克隆位点。

7.Southern杂交：通过毛细管作用、电转移、真空转膜等方法，使在凝胶电泳中已分离的DNA片段转移
并结合到适当的滤膜上，然后通过同已标记的单链DNA或RNA探针进行杂交，以检测被转移DNA片段，称为DNA印迹杂交技术。

又称为Southern杂交。

8.northern杂交：又称为RNA印迹法，是将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸纤
维素滤膜上，用同位素或生物素标记的DNA或RNA特异探针针对固定于膜上的mRNA进行杂交，洗脱除去非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表达组织。

9.western杂交：Western杂交亦称蛋白质免疫印迹，即通过将SDS-PAGE分离后的蛋白质组分转移到固定
化基质上，再以免疫学方法用特异性抗体分析靶蛋白的存在及其含量，是将蛋白质电泳、印记、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。

10.转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型的过程。

11.转化率：是每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数，是衡量转化效率的重要指标。

12.感受态细胞：作为受体细胞的细菌经一定处理(如冰冷的CaCl2溶液）后处于易于接受外源DNA的状态。

13.转化子：将导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞即通过转化方式而形成的杂种后代称为转化子。

14.重组子：经转化获得外源遗传物质的细胞，即含有重组DNA分子的转化子被称为重组子，是向有功能缺
陷的细胞补充相应功能。

15.OD600：OD600指的是某种溶液在600nm波长处的吸光值。

吸光值正比于溶液中的吸光物质的浓度，相应
地与样品的透过率T值成反比，在数值上来说，它们之间是对数关系。

16.粘性末端：是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构，它们能够通过
互补碱基间的配对而重新环化起来。

17.平末端：限制性内切核酸酶在识别序列的对称轴上切割形成的片段末端，切口是平整的，所以被称为平
末端。

18.限制性核酸内切酶：简称限制酶，是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并切割DNA
双链结构的内切核酸水解酶。

19.限制修饰系统：大多数限制性内切酶常常伴随有1-2种修饰酶，后者能保护细胞自身的DNA不被限制性
内切酶破坏，修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相同，它们的作用是甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开DNA链。

甲基化所形成的甲基基团能伸入到限制性内切酶识别位点的双螺旋大沟中，阻碍限制性内切酶发挥作用。

20.同裂酶：又称同切点酶，是一类来源于不同的微生物、能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶。

21.同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们虽然来源不同，识别的靶序列也各不相同,但都能产生
相同的粘性末端。

22.DNA连接酶：是能催化双链DNA片段靠在一起的3’羟基末端与5’端磷酸基团末端之间通过形成磷酸二
酯键，使两末端连接的一种核酸酶。

23.DNA聚合酶：能在引物和模板存在下，把单个脱氧核糖核苷酸连续加到双链DNA分子引物链的3，-OH
末端，催化核苷酸聚合作用的酶。

因为它以DNA为模板，所以又被称为依赖于DNA的DNA聚合酶。

不同种类的DNA聚合酶可能参与DNA的复制或修复。

24.反转录酶：是依赖于RNA的DNA聚合酶，或称为RNA指导的DNA聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之
一。

产物DNA又称cDNA，即互补DNA。

25.人工染色体：染色体具有复制功能，利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体称为人工染
色体载体，其装载外源DNA的容量比质粒、噬菌体和噬菌体-质粒杂合载体等有很大的拓展，甚至可以跟染色体媲美。

应用最广的有细菌人工染色体（BACs）和酵母人工染色体（YACs）。

26.PCR：又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术。

是一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。

前提条
件是已知待扩增目的基因的序列，合成反应必需的双引物。

27.引物：指一段较短的单链RNA或DNA，它能与DNA的一条链配对提供游离的3，-羟基末端以作为DNA聚
合酶合成脱氧核苷酸链的起始点。

其本质是单链DNA。

28.简并引物：由于一个氨基酸可以对应一个到多个密码子，因此一段氨基酸序列可以有多个可能的编码序
列，称之为简并序列。

相应合成这一段序列作PCR扩增体系的引物即为简并引物。

29.引物步移：在待测DNA片段中，如果知道部分核苷酸序列，可以根据该已知序列设计引物来测定其相邻
部位的序列，并依此类推，这种测序策略称为引物步移。

30.基因库：（天然存在的）特定生物体全基因组的集合。

31.基因文库：某种特定的生物所含有的能够包含所有基因的足够数目的克隆的集合。

将生物材料的基因组
DNA或cDNA片段化，然后与特定的载体连接导入宿主菌形成包含目的基因在内的DNA片段的克隆群。

32.基因组文库：是将某一生物基因组DNA片段全部克隆后所获得的重组子群体的总称。

33.cDNA文库：是将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，并全部克隆成重组子，
在该重组子群集中包含了其全部表达基因的转录本。

34.DNA体外重组：将外源DNA用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA上形成重组DNA。

35.感受态细胞：是指处于能够吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。

36.亲和层析：亲和层析是利用蛋白质分子对其配体分子特有的识别和结合能力建立起来的分离纯化方法，
把带纯化蛋白质的特异配体公共价连接到载体上，将此载体装入层析柱，对蛋白质混合物进行柱层析时，待纯化的蛋白质与配体特异结合，吸附在层析柱上，而其他的杂蛋白必能被吸附，通过洗脱可以除去。

最后用含游离配体的溶液，或用改变了pH或离子强度的溶液将与配体结合的蛋白质洗脱下来。

37. 互补：质粒DNA编码β-半乳糖苷酶的α亚基，在这一编码区中插入有一个多克隆位点，它并不破坏读
框，但可使少数几个氨基酸插入到LacZ酶的氨基端，而不影响功能；宿主细胞可编码LacZ酶C端的β亚基。

虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可以融为一体，形成具有酶学活性的蛋白质，这种互补现象叫α-互补
宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可以融为一体，形成具有酶学活性的蛋白质，这种互补现象叫α-互补。

在质粒载体上带有一个大肠杆菌DNA的短区段，其中含有B－半乳糖苷酶基因（LacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码序列；在这一编码区中插入有一个多克隆位点，它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到LacZ酶的氨基端，而不影响功能；宿主细胞可编码LacZ酶C端部分序列。

虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但它们可以融为一体，形成具有酶学活性的蛋白质，这种互补现象叫α互补。

由α互补而产生的活性蛋白质在诱导物IPTG的存在下可与生色底物X-gal反应，因此Lac＋细菌在含X-gal和IPTG的培养基上可形成蓝色菌落，易于识别。

当外源片段插入到质粒的多克隆位点后，产生无α互补能力的氨基端片段，因此，带有重组质粒的细菌形成白色菌落。

二、填空题
1、基因工程的三大基本条件包括目的基因、载体和受体细胞。

2、分子克隆中，把识别序列相同的核酸内切酶称为同裂酶，把识别序列不同但切割后产生相同的末端结构
的酶称为同尾酶。

3、连接酶（ligase）是一类用于核酸分子连接形成磷酸二酯键的核酸合成酶。

4、就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分：复制子（复制起始位点）、
筛选标记（抗性基因）、克隆位点（MCS便于外源DNA插入）。

5、PCR实验中一般包括高温变性、低温退火和适温延伸三个核心步骤。

6、DNA连接酶是基因克隆的分子黏合剂，而限制性核酸内切酶被誉为分子克隆的剪刀。

7、Ti质粒是自然界存在的植物基因工程的天然载体。

8、按照人们的意愿，改变基因中特定碱基的组成，以达到基因突变的技术称为定点突变。

9、核酸杂交探针可分为两大类：DNA探针和RNA探针。

其中DNA探针又分为基因组DNA探针和cDNA探针。

10、根据构建方法和操作对象的不同，基因文库主要包括基因组文库和cDNA文库两类。

11、限制性内切核酸酶通常保存在50%浓度的甘油溶液中。

12、基因工程中有三种主要类型的载体：质粒载体、噬菌体载体、质粒和噬菌体杂合载体，其中天然载体
主要有质粒载体和噬菌体载体两大类。

13、Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端A的双链DNA
分子。

根据这一发现设计了克隆PCR产物的T载体。

14、含有多种限制性内切核酸酶识别序列的DNA片段称为多克隆位点MCS。

15、一个完整的DNA克隆过程应包括目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的拼接、重组
体导入受体细胞、筛选与鉴定出重组子。

三、判断题
1、DNA聚合酶I的Klenow片段是丧失了聚合酶3’→5’的外切酶活性。

F
2、密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。

T
3、若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入X-gal。

T
4、限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。

F
5、DNA分子电泳过程中移动速度的大小只与其分子量相关，与构象无关。

F
6、用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后，为防止它们自身环化，要用CIP将它们脱磷酸。

F
7、迄今发现的质粒DNA都是环状的。

F
8、所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。

T
9、大量制备已被克隆基因编码蛋白质产物的常用方法是体外转录和翻译。

F
10、由于基因工程菌中重组质粒不稳定，常常加入抗生素等物质维持筛选压力。

F
11、迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。

F
12、所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA或DNA分子。

F
13、基因工程中使用的II类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。

F
14、甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，这是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止
的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5％以下。

T
15、Northern印迹和Southern印迹的基本原理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。

F
16、PCR既能用于扩增任何天然存在的核苷酸序列，又能重新设计任何天然核苷酸序列的两个末端。

因此，
任意两个天然存在的DNA序列都能快速有效的扩增，并拼接在一起。

T
17、用不同的产生黏性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA，得到的黏性末端是不亲和的黏性
末端。

F
18、根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性以及配基结合性质制备探针，可从DNA文库中筛选到相应的基
因。

T
四、问答题
1.克隆载体与表达载体有哪些异同点？
答：同：1）具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)，可以携带外源基因进入受体细胞；
2）能在宿主细胞中自主复制，并实现外源基因的增殖；
3）具有多种单一的限制性核酸内切酶识别切割位点；
4）具有合适的筛选标记。

异：1）表达载体在克隆载体的基础上又增加了基因表达的调控元件：即启动子—核糖体结合位点—克隆位点—转录终止信号（区分二者的标志）
2）克隆载体在菌体中一般是多拷贝的，而表达载体一般是低拷贝的。

2.什么是限制性内切酶，怎么命名？
答：限制性内切酶是能够识别双链DNA分子中的某一段特定核苷酸序列，并在此切割DNA双链的核酸内切酶。

限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号。

⑴基本原则:3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号。

⑵首字母:取属名的第一个字母,且斜体大写;
⑶第二字母:取种名的第一个字母,斜体小写;
⑷第三字母:①取种名的第二个字母,斜体小写;②若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.
⑸第四字母:若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体.
顺序号:若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.
3.简述PCR的反应步骤及原理？
原理：PCR技术是以DNA互补链的聚合反应为基础，通过DNA变性、引物与模板DNA一侧的互补序列复性杂交，由DNA聚合酶催化引物延伸,最终获得特异DNA片段的体外扩增方法。

PCR反应体系：
①模板：待拷贝的DNA称为模板，它可以是双链DNA也可是单链DNA。

②引物：是DNA复制的先锋，就象结晶过程中的晶核，引导DNA的合成。

在PCR扩增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。

③DNA聚合酶：DNA复制的动力，在dNTP等底物存在时在引物的引导下沿着模板DNA合成互补的DNA链。

④dNTP：DNA合成的底物。

步骤：
①变性：系统加热至92℃-96℃，使dsDNA解链成为ssDNA，且热变性不改变其化学性质；
②退火：降温至37℃-72℃，使引物与模板的互补区相结合；
③延伸：在72℃条件下，DNA聚合酶将dNTP连续加到引物的3‘-OH端，合成DNA；
④这三个热反应过程的重复称为一个循环，经过20-40个循环可扩增得到大量位于两条引物之间序列的DNA 片段。

4.什么是cDNA文库，同基因组文库有何差别？
cDNA文库是将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，并全部克隆成重组子，在该重组子群集中包含了其全部表达基因的转录本。

差别：
①生物的cDNA文库有其组织和发育时期的特异性。

在某一特定发育阶段和特定组织中，并非所有的基因都
能表达，通常得以表达的基因仅占基因总数的少部分。

②在指定cDNA文库时往往要指定其来源的组织和时期。

③cDNA文库是从mRNA出发分离目的基因，大大地缩小了搜寻分离功能基因的范围，同时分离的cDNA克隆
由于不含内含子，其序列可以给出蛋白质序列信息，对于功能基因研究更为方便。

5.什么是western杂交，它与southern杂交有什么不同？
Western杂交：亦称蛋白质免疫印迹，即通过将SDS-PAGE分离后的蛋白质组分转移到固定化基质上，再以免疫学方法用特异性抗体分析靶蛋白的存在及其含量，是将蛋白质电泳、印记、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。

Southern杂交：通过毛细管作用、电转移、真空转膜等方法，使在凝胶电泳中已分离的DNA片段转移并结合到适当的滤膜上，然后通过同已标记的单链DNA或RNA探针进行杂交，以检测被转移DNA片段，称为DNA 印迹杂交技术
由上述内容可知，Western杂交的总体过程与Southern杂交相似，只不过在Blotting过程中转移的是蛋白质而不是DNA。

6.简述基因工程的主要研究内容。

1)目的基因或含有目的基因的DNA片段的分离
利用限制性核酸内切酶切割获得特定的目的基因。

获得目的基因的方法：PCR、构建基因组文库与基因分离、构建cDNA文库、根据基因差异表达获得、基因的化学合成。

2)体外DNA的重组(载体分子+DNA片段+标记基因)
将外源DNA用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA上形成重组DNA，重组DNA包括载体分子、DNA 片段和标记基因这几部分。

3)转化(体外重组DNA对寄主细胞的转化)
将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型，这种通过转化方式而形成的杂种后代称为转化子。

4)重组体克隆的筛选：载体表型选择法、根据插入基因的表型选择法、DNA电泳、PCR、核酸杂交、免疫
化学检测法、DNA序列分析、
5)重组克隆中的目的基因的鉴定：Southern杂交和northern杂交
6)目的基因的功能鉴定：western杂交，以及根据外源基因在受体细胞中的表达来鉴定。

7.质粒载体具有哪些基本特性？
（1）自主复制
质粒DNA上都含有一个复制起始区，控制着质粒在宿主细胞内的复制，这一复制起始区称为“复制子”。

（2）不相容性
在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一寄主细胞系中稳定地共存的现象，又称为不亲和性。

这样的两种质粒称为不亲和质粒。

（3）转移性
接合型质粒:能在自然条件下自发地从一个细胞转移到另一个细胞（接合作用），如F、Col、R质粒等；
非接合型质粒:不能在自然条件下独立地发生接合作用如Col、R的其它成员。

（4）编码性状
野生型的质粒DNA上往往携带一个或多个遗传标记基因，这使得寄主生物产生正常生长非必需的附加性状。

载体的基本特性：
①具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)；
②具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点；
③具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点；
④具有较高的外源DNA的载装能力；
⑤具有合适的筛选标记。

8.什么是蓝白斑筛选法？
当外源DNA插入到载体lacZ标记基因上，导致β—半乳糖苷酶基因失活，可通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-ITPG培养基中的颜色变化来直接观察出来。

β—半乳糖苷酶可把乳糖水解成半乳糖和葡萄糖，由于基因的互补作用形成的有功能的半乳糖苷酶，在含有5-溴-4-氯-3-引哚-β-D-半乳糖苷(X-gal)和IPTG的平板上形成浅蓝色的噬菌斑。

而当外源DNA插入到载体lacZ标记基因内部的多克隆位点上，可阻断该基因的读码结构，使其编码的α肽失去活性，结果产生出白色的噬菌斑。

因此，根据这种半乳糖苷酶的显色反应，便可检测出含有外源DNA插入序列的重组体克隆。

9.什么是限制与修饰系统，有什么意义？
限制修饰系统：大多数限制性内切酶常常伴随有1-2种修饰酶，后者能保护细胞自身的DNA不被限制性内切酶破坏，修饰酶识别的位点与相应的限制性内切酶相同，它们的作用是甲基化每条链中的一个碱基，而不是切开DNA链。

甲基化所形成的甲基基团能伸入到限制性内切酶识别位点的双螺旋大沟中，阻碍限制性内切酶发挥作用。

（1）限制：细菌为防御外来DNA入侵而将其降解的现象。

（一般由限制酶来降解外源DNA)修饰：细菌为防止自身DNA被降解而修饰自身DNA。

(一般由甲基化酶进行修饰）（2）意义：这种限制系统可排除外来的DNA而自身的DNA由于甲基化，不能被限制酶切割。

10.微生物基因工程的应用有哪些？
微生物基因工程是基因工程的重要内容，也是其应用的重要领域。

从内容而言，微生物基因工程主要从两个方面来展开：1.对生物遗传性状的改良，获得性状更优的微生物；2。

生产组蛋白、多肽或抗生素等次生代谢物。

（一）在农业领域的应用
1.在生物农药开发上的应用：基因工程微生物杀虫剂；基因工程杀菌剂；生物除草剂。

2.在生物肥料上的开发应用
nifA基因突变会导致固氮酶失活，在根瘤菌中引入多拷贝的该基因，可提高固氮能力，在基因改造中，可设法提高根瘤菌固氮相关固氮酶等基因的表达水平。

3.饲料开发上的应用
植酸酶可提高饲料的利用率，降低成本，构建高效表达植酸酶的重组酵母，并以此生产产品。

（二）工业领域
1.乳酸菌发酵基因工程菌
2.食品添加剂基因工程：氨基酸生产菌得改造，氨基酸可做氧化剂、增鲜剂；合成L-抗坏血酸的重组菌。

3.酶制剂工程菌：对酶基因修饰改造，设计新的酶基因，创造新酶种。

4.酿酒酵母工程菌构建
（三）药物生产上的应用
1.生产蛋白类药物：大肠杆菌高效表达在医用蛋白生产中作用巨大。

2.生产抗生素：提高产量和效率
（四）环境保护上的应用
1.农业残留、有毒物质的降解工程菌
2.石油产品的微生物降解
3.造纸去污、生物降解塑料工程菌
4．清除放射性环境废物的基因工程菌
5．在废弃物资源化和环境保护中的应用
五、论述题
法制备大肠杆菌感受态细胞及其转化外源DNA的原理，说一说影响转化效率的主要影响因素。

1.论述CaCl
2
（一）原理：Ca2+诱导的完整细胞的转化适用于革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌等)，Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构，后者经热脉冲发生收缩作用，使细胞膜出现空隙，细菌细胞此时的状态叫做感受态。

感受态允许DNA分子进入，进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细
胞出现新的遗传性状。

将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子
（二）影响因素：
1.载体及DNA重组分子方面：
①载体本身的性质：不同的载体转化同一株受体细胞，其转化率不同；
②载体的空间构象：质粒的超螺旋构象转化率最高，经酶切连接操作后的载体由于空间构象难以恢复，其
转化率一般要比新制备的超螺旋质粒低两个数量级；
③插入片段的大小：对质粒载体而言，插入片段越大，转化效率越低。

2.受体细胞方面：
受体细胞必须与载体相匹配，例如：pBR322转化大肠杆菌JM83株，转化率很低；但对大肠杆菌ED8767株的转化率则较高。

3.转化方法方面：
①受体细胞的预处理：影响最大
②供受体的比例：Ca2+诱导转化0.1ml感受态细胞50ng DNA
原生质体转化109个原生质体50ng DNA
③转化方法：Ca2+诱导转化106-107/mg DNA
原生质体转化105-106/mg DNA
λ-DNA转染107-108/mg DNA
电穿孔转化106-109/mg DNA
3.论述Southern杂交的基本原理和实验操作过程，讲一讲其与northern杂交有什么不同。

（1）原理：通过毛细管作用、电转移、真空转膜等方法，使在凝胶电泳中已分离的DNA片段转移并结合到适当的滤膜上，然后通过同已标记的单链DNA或RNA探针进行杂交，以检测被转移DNA片段，称为DNA 印迹杂交技术。

（2）实验操作过程：
①DNA的片段化及其电泳分离
②凝胶电泳后的变性处理：在0.4N NaOH碱性条件下变性，使双链DNA分子变成单链。

再在1.5M NaCl/1M Tris （pH7.4）条件下中和使DNA仍保持单链状态。

③转移并固定到滤膜上
通过毛细管渗吸或电转移或真空转移的方式，将凝胶上的DNA转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上。

最后通过80℃处理或紫外线照射将DNA固定在滤膜上。

④杂交。