固相萃取-高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸含量

固相萃取-高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸含量
张亚勋;袁琳;杜瑞;高海东;任钊;付有利;邢文听
【摘要】建立了食品中胭脂红酸含量的液相色谱测定方法.样品采用2 mmol/L HCl-甲醇提取,PLS固相萃取柱浓缩净化,以C18为色谱柱填料,以甲醇-0.3％甲酸水体系为流动性进行色谱分离,在280 nm处进行测定.质量浓度在1～50μg/mL呈线性;方法回收率在85％～92％,相对标准偏差(n=6)均小于3％;该方法前处理简单、快速、准确,适合各类食品中胭脂红酸含量的测定.
【期刊名称】《河南化工》
【年(卷),期】2019(036)005
【总页数】2页(P55-56)
【关键词】固相萃取;高效液相色谱;胭脂红酸
【作者】张亚勋;袁琳;杜瑞;高海东;任钊;付有利;邢文听
【作者单位】河南省商业科学研究所有限责任公司 , 河南郑州 450002;河南省化工研究所有限责任公司 ,河南郑州 450052;河南省商业科学研究所有限责任公司 , 河南郑州 450002;河南省商业科学研究所有限责任公司 , 河南郑州 450002;河南省商业科学研究所有限责任公司 , 河南郑州 450002;河南省商业科学研究所有限责任公司 , 河南郑州 450002;河南省化工研究所有限责任公司 ,河南郑州 450052【正文语种】中文
【中图分类】O657.72
胭脂虫红是一种天然葸醌类色素，其主要活性成分为胭脂红酸。

联合国粮农组织和世界卫生组织允许胭脂红酸作为食品添加剂中使用的天然色素；同时也是唯一一种FDA允许既可用于食品，又可用于药品和化妆品的天然色素。

胭脂红酸作为天然提取物，在我国现已广泛应用于食品加工领域。

《食品添加剂使用卫生标准》(GB 2760-2014)中规定: 胭脂虫红(以胭脂虫红酸计) 可用于乳类、果酱、糖果、方便米面制品、熟肉制品等21类食品；但仅对各类食品中使用限量做了规定，但尚没有食品中胭脂红酸测定方法的国家标准、行业标准或者地方标准。

因此为其规范胭脂红酸合理运用，保障食品质量安全，有必要建立稳定可靠的方法对食品中胭脂红酸的含量检测提供依据。

目前，对食品中胭脂红酸的检测方法主要有高效液相色谱紫外检测法、分光光度检测法、毛细管电泳检测法和薄层色谱检测法。

文章建立了通过盐酸溶液提取，SPE小柱富集、净化，HPLC-DAD快速检测食品中胭脂红酸含量的方法，取得了满意的效果。

1 实验部分
1.1 仪器与试剂
Agilent 1260 HPLC-DAD(美国安捷伦)；GENIUS 3涡旋混合器(德国IKA)；GR22N离心机(日本日立)；PLS-SPE(150 mg，6 mL；中国迪马)；胭脂虫红酸( CAS 1260-17-9，C22H20O13，纯度98.5%，德国Dr)；；甲醇/乙腈(德国默克 HPLC级)。

1.2 色谱条件
色谱柱：Agilent XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇+水(0.3%甲酸)；检测波长：280 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件时间/min甲醇/%0.3%甲酸
/%020802208088020108020112080142080
1.3 前处理方法
称取2.5 g样品与50 mL离心管中，加入10.0 mL 2 mol/L HCl，旋紧盖子，置
于沸水浴中提取30 min，取出冷却，再加入15.0 mL甲醇，振摇混匀，于4 ℃ 8 000 r/min离心5 min，取出上清液；45 ℃减压蒸馏至8 mL待SPE净化。

依次用5 mL 甲醇、5 mL水活化SPE；然后加入净化液，弃去流出液；加入5 mL 30%甲醇水，然后抽干；加入6 mL 洗脱液。

收集洗脱液，40 ℃氮吹，然后用0.3%的甲酸水定容至5 mL。

2 结果与讨论
波长选择通过二极管阵列检测器在200～640 nm内扫描，结果见图1。

图1 胭脂虫红标准品的吸收图谱
由图1可知：胭脂虫红在波长280、315、495 nm处均出现吸收峰，其中280 nm处吸收值最大，峰形最好。

因此，为了获得最佳灵敏度，减少定量误差，试验选择检测波长为280 nm。

流动相选择比较了甲醇-水等度体系、甲醇-甲酸水等度体系、甲醇-磷酸水等度体系、甲醇-甲酸水梯度体系、甲醇-磷酸水梯度体系。

发现在等度条件下甲醇-磷酸
水响应值最好，其次为甲醇-甲酸水；但在等度条件下，峰形出现拖尾现象、峰较宽。

在梯度条件下，两种酸体系响应值相同，切响应值远大于等度体系的响应值，且峰对称型好，缝窄。

考虑到磷酸盐易结晶，因此选用甲醇-甲酸水梯度体系。

分别对照甲醇-水(0.1%甲酸)、甲醇-水(0.3%甲酸)、甲醇-水(0.5%甲酸)、甲醇-水(0.7%甲酸)流动相体系，在甲酸在0.3%相应值最高，其次为0.5%，最终流动相
为甲醇-水(0.3%甲酸)梯度洗脱，色谱图见图2 。

图2 胭脂虫红标准色图谱
前处理条件市场上的胭脂虫红多以钙铝盐沉淀胭脂红酸而得的钙铝盐色淀，呈鲜红
色，其不溶于冷水略溶于醇、热水。

因此样品须在HCl 溶液在热水浴中将胭脂虫红转化成水溶性的胭脂虫红酸后进行检测。

分别考察了C18、PWA-2、PLS以及聚酰胺SPE小柱。

发现PLS小柱回收率最高，其次为聚酰胺小柱，而C18、PWA-2小柱回收率很低。

这是由于净化液为HCl强酸，PWA-2属于弱酸阴离子小柱，而C18填料pH值为2～8，强酸破坏C18以及PWA-2填料结构，故回收率偏低；有文献报道使用聚酰胺小柱，但在使用中发现经常受到样品堵塞。

而PLS 填料为亲水亲脂平衡填料，pH值为0～14，强酸条件下填料架构不发生变化。

线性范围及检出限配制不同浓度的标准溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，线性方程为：y=146.5x-4.6R2=0.999 9，线性范围1～50 μg/mL；按信噪比
S/N=3计，本方法胭脂虫红酸的检测限为0.2 mg /kg。

加标回收取果冻、面制品、饮料、火腿、咖啡5 种样品进行2个浓度标准添加试验，每个添加量做6个平行试验，试验结果见表2。

表2 回收试验结果(n=6)项目加标水平g/kg回收率%RSD%果冻
0.0050.0285891.80.9面制品∗0.0050.02747422.4饮料0.0050.0285921.20.9火腿0.0050.0288911.41.5咖啡∗0.0050.0272762.52.6
注：面制品、咖啡离心上清液滤纸过滤，否则堵塞SPE小柱造成回收率低。

由表2可知，胭脂红酸在不同食品中回收率在72%～92%，相对标准偏差在
0.9%～2.6%。

3 小结
本方法选用PLS-SPE-HPLC法检测不同类别食品中胭脂红酸含量。

方法线性范围大，灵敏度高，精密度和准确好，前处理过程简单，缩短分析时间分离效果好，为食品添加剂食用色素的快速检测提供依据。

能够满足日常食品安全检测的需要。