介绍一种骨髓穿刺活检标本的标准化处理方法
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2 结果
网状纤维染色： 网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色或 浅褐色，胞核呈灰褐色（ 图 2） 。含铁血黄素染色： 含铁血黄 素蓝色，胞核红色（ 图 3） 。
①
②
③
④
图 1 HE 染色切片均匀，染色对比适中 图 2 银染： 银纤维着色 清晰，对比清晰 图 3 铁染色： 含铁血黄素着色清晰，对比色清 晰 图 4 脱钙时间过长，HE 染色影响大
患者女性，43 岁，无明显诱因右下腹疼痛 10 h 就诊。查 体： 右下腹压痛、反跳痛明显，余未见明显异常。CT 检查示： 肝右前叶可见一不规则稍低密度影，大小 11. 6 cm × 12 cm， 密度不均，中央可见散在更低密度影，CT 值： 26 ～ 30 Hu，边 界不清晰（ 图 1） ，盆腔内见有积液。WBC 12. 6 × 109 / L、RBC 3. 8 × 109 / L、Hb 81 g / L。CA199： 47. 94 U / ml、CA125： 227. 2 U / ml。临床诊断： 肝占位性病变，疑似肝癌。术中见腹腔内 1 000 ml 血性积液伴少许血凝块，中肝叶（ 肝脏第Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ 段） 可见一实性肿块，大小 13 cm × 13 cm × 7 cm，破裂伴活
彻底，而染色好坏的基础是组织细胞的有效成分和结构是否 保存完好。为了能够得到一张完美的骨髓切片，笔者根据多 年的经验提出骨髓的标准化处理，针对每一个步骤提出了自 己的看法及相关注意事项。骨髓活体组织（ 所有的病理活体 组织） 必须及时固定于 10% 的中性福尔马林液中，固定时间 ≥8 h。目前，病理科常用的脱钙液是酸性脱钙液，各种无机 酸可不同程度地破坏组织结构，尤其是组织未充分固定的情 况下，这种损伤更明显，因此在骨髓组织脱钙前必须保证固 定充分。经过我科长期实践证明： 4% 盐酸甲醛脱钙液无论 在脱钙速度、质量，还是保存组织的形态结构、抗原成分方面 均有效，并有边脱钙边固定的双重作用，现已得到广泛认可 及推广使用［5，6］。脱钙“终点”的判断方法： 手捏时富有弹性 无硬感； 用取材刀的刀锋轻刮，无明显的沙沙声，用大头针能 顺利扎入。骨髓组织在制片前经过酸的处理时若脱钙后的 处理不当，HE 染色中苏木精往往不易上色，造成颜色暗淡 （ 图 4） 。本实验做法： 脱钙后的骨髓组织直接用 70% 乙醇浸 泡 1 h 后更换，连续更换 2 ～ 3 次，然后再用流水冲洗，最后 入全封闭自动脱水机处理。此法可以中和组织内的酸性物 质，使组织不易膨胀，并起到再次固定的作用，有助于染色。 骨髓组织切片要薄切，常规 HE 切片为 2 μm 厚，特殊染色为 3 μm 厚，若切片太厚，细胞宜重叠，影响观察。捞片的水温 不宜过高，一般为 47 ～ 48 ℃ ，因为骨髓组织纤维支架少，水 温过高，组织松散，影响整体结构的观察。
·1179·
·病例报道· 肝血管瘤伴血管平滑肌脂肪瘤及局灶性结节性增生 1 例
张永辉，邱建龙，陈远钦
关键词： 肝脏肿瘤； 血管瘤； 血管平滑肌脂肪瘤； 结节性增生 中图分类号： R 735. 7 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1179 － 02
动性出血，边缘不清楚。
［3］ 哈申高娃，沙 拉，王 蕊． 骨髓铁染色对缺铁性贫血与慢 性疾病性贫血的鉴别诊断价值［J］． 吉林医学，2005，26（ 10） ： 1044 － 5．
［4］ 张英波，万树栋． 铁染色在鉴别几种形态相似贫血中的应用 ［J］． 实用医技杂志，2007，14（ 6） ： 718．
［5］ 朱小兰，张 威，骆新兰． 216 例骨髓脱钙时间的探讨［J］． 临床与实验病理学杂志，2003，19（ 6） ： 663．
HE 染色： （ 1） 2 μm 厚切片； （ 2） 捞片水温不宜过高，47 ～ 48 ℃ ； （ 3） 烤片温度不宜过高，60 ℃ 左右，30 min； （ 4） 常规 脱蜡至水； （ 5） 置 Harris 苏木精染液染 10 ～ 20 min，染色时间 要根据各实验室的条件，确保细胞核染色清晰； （ 6） 自来水 洗，入 1% 盐酸乙醇中迅速分化，2 ～ 3 s，迅速自来水洗，流水 泛蓝 15 min； （ 7） 置伊红染液染 30 s ～ 1 min； （ 8） 自来水洗， 70% 、80% 乙醇各 10 s，95% 乙醇Ⅰ、Ⅱ，100% 乙醇Ⅰ、Ⅱ，苯 酚二甲苯，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各 1 min，中性树胶封固。 1． 3 结果判断 细胞核呈蓝色，细胞质、骨小梁呈红色（ 图 1） 。 1． 4 特殊染色 1． 4． 1 网状纤维染色( Gomori 染色) 用 Gomori 染色来判 断骨髓纤维化程度，在多种血液病骨髓活检病理诊断与鉴别 诊断中亦有辅助诊断意义［2］。其基本染色原理是氧化 － 漂 白 － 媒染 － 浸银 － 还原 － 调色。步骤： （ 1） 染色前常规脱蜡 至水； （ 2） 0. 5% 高锰酸钾氧化 5 ～ 10 min，蒸馏水洗； （ 3） 2% 草酸漂白 1 ～ 2 min，蒸馏水洗； （ 4） 2% 硫酸铁铵水溶液媒染 5 ～ 10 min，蒸馏水洗； （ 5） 银氨液浸染 5 ～ 10 min，蒸馏水速 洗数次； （ 6） 20% 甲醛溶液还原 1 ～ 2 min，蒸馏水洗； （ 7） 常
［6］ 傅春燕，陈 晨． 介绍一种骨髓组织脱钙新方法［J］． 临床与 实验病理学杂志，2003，19（ 6） ： 664．
Gomori 染色及含铁血黄素染色（ 普鲁氏蓝反应） 是骨髓
病理诊断 中 必 不 可 少 的 两 种 特 殊 染 色 方 法。 本 实 验 要 求 Gomori 染色过程中必须保持器皿的干净，银氨液现配现用， 设阳性对照片，所有步骤用立式染缸浸染，这样做既能避免 滴染时出现的“边缘效应”及银沉淀，又能更好的保证质控。 含铁血黄素染色过程中同样需保持器皿的干净，设阳性对照 片，铁反应前的各步骤应以蒸馏水冲洗，以防止自来水内的 铁离子与组织内的钙盐结合产生假阳性反应，2% 亚铁氰化 钾溶液需新鲜配制。
收稿日期： 2012 － 03 － 30 作者单位： 广州医学院第一附属医院病理科，广州 510120 作者简介： 莫明聪，男，技师。E-mail： mmc198208@ 126． com
3 讨论 石蜡包埋骨髓组织薄切片质量的关键因素是脱钙是否
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
总之，要做好一张骨髓 HE 切片，必须注意每一个步骤， 需要结合各个地方、各实验室的条件进行长期的摸索总结。
参考文献：
［1］ 蔡秀玲，骆新兰，张 威． 骨髓穿刺活检标本石蜡切片的质 控［J］． 诊断病理学杂志，2005，12（ 5） ： 392．
［2］ 刘恩彬，陈辉树，邱振宇等． 网状纤维染色在骨髓活检病理 诊断中的意义［J］． 诊断病理学杂志，2002，9（ 6） ： 334 － 6．
·1178·
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
介绍一种骨髓穿刺活检标本的标准化处理方法
莫明聪，陈国勤
关键词： 骨髓穿刺； 活组织检查； 标准化 中图分类号： R 446. 8 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1178 － 02
近年来骨髓活检技术已越来越多的应用于临床，但国内 制片、特殊染色技术尚无统一标准。本文现介绍作者在工作 中探索出的比较规范的操作方法并获得了很好的效果。
1 材料与方法
1． 1 材料 收集广州医学院第一附属医院 2008 ～ 2011 年 送检的所有骨髓穿刺标本，共 974 例。市售分析纯浓盐酸及 甲醛。先将 4 份浓盐酸加入 86 份蒸馏水中，再取 10 份分析 纯甲醛加入刚配制的盐酸溶液中混匀即成盐酸 － 甲醛混合 脱钙液［1］。 1． 2 方法 （ 1） 将固定好的骨髓穿刺组织放入耐酸容器 中，加入 10 ～ 15 ml 盐酸 － 甲醛混合脱钙液，2 ～ 3 h［2］； （ 2） 脱钙后，加入 70% 乙醇浸泡 1 h 后更换，连续更换 2 ～ 3 次， 最后流水稍冲洗； （ 3） 处理后，与其他标本一起放入自动脱 水机处理。
收稿日期： 2012 － 04 － 09 作者单位： 福建省泉州市解放军第 180 医院病理科，泉州 362000 作者简介： 张永辉，女，医师。E-mail： 403072609@ qq． com
图 1 CT 显示肝右前叶边界不清晰，可见密度不均的占位
病理检查 肝脏灰白、灰黄色结节状肿物，大小 12 cm × 11 cm × 5. 5 cm，周围附少量肝组织，切面暗红色，挤压似 海绵状，内有大量血性液体流出，质软，局部境界不清楚。邻 近较大肿物肝组织内另见 2 个结节，大者直径 3 cm，切面灰 白，中间见少量灰白星状瘢痕，质中、界清； 小者直径 1 cm，
规脱水，封固。 1． 4． 2 含铁血黄素染色( 普鲁士蓝反应) 含铁血黄素染 色可根据反应的强弱来了解骨髓中铁的含量，在鉴别缺铁性 贫血、慢性感染性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血及铁粒幼贫 血等几种形 态 相 似 贫 血 中 有 重 要 价 值［3，4］。 染 色 原 理 是 骨 髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其所含的三价铁经稀盐 酸处理后而游离，并能与酸性亚铁氰化钾溶液发生普鲁士蓝 反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。步骤： （ 1） 染色前常规脱蜡至水； （ 2） 染普鲁士溶液 20 ～ 30 min，蒸 馏水洗； （ 3） 0. 1% 核固红水溶液复染 3 ～ 5 min，水洗； （ 4） 常 规脱水，透明，封固。
网状纤维染色： 网状纤维呈黑色，胶原纤维呈棕黄色或 浅褐色，胞核呈灰褐色（ 图 2） 。含铁血黄素染色： 含铁血黄 素蓝色，胞核红色（ 图 3） 。
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图 1 HE 染色切片均匀，染色对比适中 图 2 银染： 银纤维着色 清晰，对比清晰 图 3 铁染色： 含铁血黄素着色清晰，对比色清 晰 图 4 脱钙时间过长，HE 染色影响大
患者女性，43 岁，无明显诱因右下腹疼痛 10 h 就诊。查 体： 右下腹压痛、反跳痛明显，余未见明显异常。CT 检查示： 肝右前叶可见一不规则稍低密度影，大小 11. 6 cm × 12 cm， 密度不均，中央可见散在更低密度影，CT 值： 26 ～ 30 Hu，边 界不清晰（ 图 1） ，盆腔内见有积液。WBC 12. 6 × 109 / L、RBC 3. 8 × 109 / L、Hb 81 g / L。CA199： 47. 94 U / ml、CA125： 227. 2 U / ml。临床诊断： 肝占位性病变，疑似肝癌。术中见腹腔内 1 000 ml 血性积液伴少许血凝块，中肝叶（ 肝脏第Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ 段） 可见一实性肿块，大小 13 cm × 13 cm × 7 cm，破裂伴活
彻底，而染色好坏的基础是组织细胞的有效成分和结构是否 保存完好。为了能够得到一张完美的骨髓切片，笔者根据多 年的经验提出骨髓的标准化处理，针对每一个步骤提出了自 己的看法及相关注意事项。骨髓活体组织（ 所有的病理活体 组织） 必须及时固定于 10% 的中性福尔马林液中，固定时间 ≥8 h。目前，病理科常用的脱钙液是酸性脱钙液，各种无机 酸可不同程度地破坏组织结构，尤其是组织未充分固定的情 况下，这种损伤更明显，因此在骨髓组织脱钙前必须保证固 定充分。经过我科长期实践证明： 4% 盐酸甲醛脱钙液无论 在脱钙速度、质量，还是保存组织的形态结构、抗原成分方面 均有效，并有边脱钙边固定的双重作用，现已得到广泛认可 及推广使用［5，6］。脱钙“终点”的判断方法： 手捏时富有弹性 无硬感； 用取材刀的刀锋轻刮，无明显的沙沙声，用大头针能 顺利扎入。骨髓组织在制片前经过酸的处理时若脱钙后的 处理不当，HE 染色中苏木精往往不易上色，造成颜色暗淡 （ 图 4） 。本实验做法： 脱钙后的骨髓组织直接用 70% 乙醇浸 泡 1 h 后更换，连续更换 2 ～ 3 次，然后再用流水冲洗，最后 入全封闭自动脱水机处理。此法可以中和组织内的酸性物 质，使组织不易膨胀，并起到再次固定的作用，有助于染色。 骨髓组织切片要薄切，常规 HE 切片为 2 μm 厚，特殊染色为 3 μm 厚，若切片太厚，细胞宜重叠，影响观察。捞片的水温 不宜过高，一般为 47 ～ 48 ℃ ，因为骨髓组织纤维支架少，水 温过高，组织松散，影响整体结构的观察。
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·病例报道· 肝血管瘤伴血管平滑肌脂肪瘤及局灶性结节性增生 1 例
张永辉，邱建龙，陈远钦
关键词： 肝脏肿瘤； 血管瘤； 血管平滑肌脂肪瘤； 结节性增生 中图分类号： R 735. 7 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1179 － 02
动性出血，边缘不清楚。
［3］ 哈申高娃，沙 拉，王 蕊． 骨髓铁染色对缺铁性贫血与慢 性疾病性贫血的鉴别诊断价值［J］． 吉林医学，2005，26（ 10） ： 1044 － 5．
［4］ 张英波，万树栋． 铁染色在鉴别几种形态相似贫血中的应用 ［J］． 实用医技杂志，2007，14（ 6） ： 718．
［5］ 朱小兰，张 威，骆新兰． 216 例骨髓脱钙时间的探讨［J］． 临床与实验病理学杂志，2003，19（ 6） ： 663．
HE 染色： （ 1） 2 μm 厚切片； （ 2） 捞片水温不宜过高，47 ～ 48 ℃ ； （ 3） 烤片温度不宜过高，60 ℃ 左右，30 min； （ 4） 常规 脱蜡至水； （ 5） 置 Harris 苏木精染液染 10 ～ 20 min，染色时间 要根据各实验室的条件，确保细胞核染色清晰； （ 6） 自来水 洗，入 1% 盐酸乙醇中迅速分化，2 ～ 3 s，迅速自来水洗，流水 泛蓝 15 min； （ 7） 置伊红染液染 30 s ～ 1 min； （ 8） 自来水洗， 70% 、80% 乙醇各 10 s，95% 乙醇Ⅰ、Ⅱ，100% 乙醇Ⅰ、Ⅱ，苯 酚二甲苯，二甲苯Ⅰ、Ⅱ各 1 min，中性树胶封固。 1． 3 结果判断 细胞核呈蓝色，细胞质、骨小梁呈红色（ 图 1） 。 1． 4 特殊染色 1． 4． 1 网状纤维染色( Gomori 染色) 用 Gomori 染色来判 断骨髓纤维化程度，在多种血液病骨髓活检病理诊断与鉴别 诊断中亦有辅助诊断意义［2］。其基本染色原理是氧化 － 漂 白 － 媒染 － 浸银 － 还原 － 调色。步骤： （ 1） 染色前常规脱蜡 至水； （ 2） 0. 5% 高锰酸钾氧化 5 ～ 10 min，蒸馏水洗； （ 3） 2% 草酸漂白 1 ～ 2 min，蒸馏水洗； （ 4） 2% 硫酸铁铵水溶液媒染 5 ～ 10 min，蒸馏水洗； （ 5） 银氨液浸染 5 ～ 10 min，蒸馏水速 洗数次； （ 6） 20% 甲醛溶液还原 1 ～ 2 min，蒸馏水洗； （ 7） 常
［6］ 傅春燕，陈 晨． 介绍一种骨髓组织脱钙新方法［J］． 临床与 实验病理学杂志，2003，19（ 6） ： 664．
Gomori 染色及含铁血黄素染色（ 普鲁氏蓝反应） 是骨髓
病理诊断 中 必 不 可 少 的 两 种 特 殊 染 色 方 法。 本 实 验 要 求 Gomori 染色过程中必须保持器皿的干净，银氨液现配现用， 设阳性对照片，所有步骤用立式染缸浸染，这样做既能避免 滴染时出现的“边缘效应”及银沉淀，又能更好的保证质控。 含铁血黄素染色过程中同样需保持器皿的干净，设阳性对照 片，铁反应前的各步骤应以蒸馏水冲洗，以防止自来水内的 铁离子与组织内的钙盐结合产生假阳性反应，2% 亚铁氰化 钾溶液需新鲜配制。
收稿日期： 2012 － 03 － 30 作者单位： 广州医学院第一附属医院病理科，广州 510120 作者简介： 莫明聪，男，技师。E-mail： mmc198208@ 126． com
3 讨论 石蜡包埋骨髓组织薄切片质量的关键因素是脱钙是否
临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
总之，要做好一张骨髓 HE 切片，必须注意每一个步骤， 需要结合各个地方、各实验室的条件进行长期的摸索总结。
参考文献：
［1］ 蔡秀玲，骆新兰，张 威． 骨髓穿刺活检标本石蜡切片的质 控［J］． 诊断病理学杂志，2005，12（ 5） ： 392．
［2］ 刘恩彬，陈辉树，邱振宇等． 网状纤维染色在骨髓活检病理 诊断中的意义［J］． 诊断病理学杂志，2002，9（ 6） ： 334 － 6．
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临床与实验病理学杂志 J Clin Exp Pathol 2012 Oct; 28( 10)
介绍一种骨髓穿刺活检标本的标准化处理方法
莫明聪，陈国勤
关键词： 骨髓穿刺； 活组织检查； 标准化 中图分类号： R 446. 8 文献标志码： B 文章编号： 1001 － 7399（ 2012） 10 － 1178 － 02
近年来骨髓活检技术已越来越多的应用于临床，但国内 制片、特殊染色技术尚无统一标准。本文现介绍作者在工作 中探索出的比较规范的操作方法并获得了很好的效果。
1 材料与方法
1． 1 材料 收集广州医学院第一附属医院 2008 ～ 2011 年 送检的所有骨髓穿刺标本，共 974 例。市售分析纯浓盐酸及 甲醛。先将 4 份浓盐酸加入 86 份蒸馏水中，再取 10 份分析 纯甲醛加入刚配制的盐酸溶液中混匀即成盐酸 － 甲醛混合 脱钙液［1］。 1． 2 方法 （ 1） 将固定好的骨髓穿刺组织放入耐酸容器 中，加入 10 ～ 15 ml 盐酸 － 甲醛混合脱钙液，2 ～ 3 h［2］； （ 2） 脱钙后，加入 70% 乙醇浸泡 1 h 后更换，连续更换 2 ～ 3 次， 最后流水稍冲洗； （ 3） 处理后，与其他标本一起放入自动脱 水机处理。
收稿日期： 2012 － 04 － 09 作者单位： 福建省泉州市解放军第 180 医院病理科，泉州 362000 作者简介： 张永辉，女，医师。E-mail： 403072609@ qq． com
图 1 CT 显示肝右前叶边界不清晰，可见密度不均的占位
病理检查 肝脏灰白、灰黄色结节状肿物，大小 12 cm × 11 cm × 5. 5 cm，周围附少量肝组织，切面暗红色，挤压似 海绵状，内有大量血性液体流出，质软，局部境界不清楚。邻 近较大肿物肝组织内另见 2 个结节，大者直径 3 cm，切面灰 白，中间见少量灰白星状瘢痕，质中、界清； 小者直径 1 cm，
规脱水，封固。 1． 4． 2 含铁血黄素染色( 普鲁士蓝反应) 含铁血黄素染 色可根据反应的强弱来了解骨髓中铁的含量，在鉴别缺铁性 贫血、慢性感染性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血及铁粒幼贫 血等几种形 态 相 似 贫 血 中 有 重 要 价 值［3，4］。 染 色 原 理 是 骨 髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其所含的三价铁经稀盐 酸处理后而游离，并能与酸性亚铁氰化钾溶液发生普鲁士蓝 反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。步骤： （ 1） 染色前常规脱蜡至水； （ 2） 染普鲁士溶液 20 ～ 30 min，蒸 馏水洗； （ 3） 0. 1% 核固红水溶液复染 3 ～ 5 min，水洗； （ 4） 常 规脱水，透明，封固。