(完整word版)土壤酶活性测定方法
土壤酶测定方法
土壤磷酸酶（酸性）——磷酸苯二钠比色法（一）试剂1.pH5 醋酸盐缓冲液：A:L 醋酸溶液（稀释至1000ml）B:L 醋酸钠溶液 A 液+B液稀释至 100ml若使用无水乙酸及乙酸钠配制 1 升PH为的乙酸盐缓冲液，则需要无水乙酸及乙酸钠的量计算以下：①无水乙酸用量的计算：无水乙酸的浓度为，则需无水乙酸的体积为×1000/=（毫升）；②乙酸钠用量的计算：查表知，无水乙酸钠的摩尔质量为82，则需无水乙酸钠的质量为×82× 1=11（克）。
使用无水乙酸及乙酸钠配制 1 升PH为的乙酸盐缓冲液的方法以下：用量筒量取毫升无水乙酸至1000 毫升烧杯内，再用台秤称取无水乙酸钠11 克至该烧杯，而后用量筒量取=996 毫升蒸馏水至该烧杯内，搅拌至乙酸钠溶解并呈平均的溶液即为1 升PH为的乙酸 - 乙酸钠缓冲液。
或许：量 7ml 醋酸钠液 +3ml 醋酸液混淆即得。
2.% 磷酸苯二钠： pH5醋酸缓冲液3.氯代二溴对苯醌亚胺：称取 2 ，6- 二溴苯醌氯酰亚胺，用 10ml 96%乙醇（48ml 乙醇 +2ml 水）溶解，储存于棕色瓶中，寄存在冰箱中，保留的黄色溶液未变褐色以前均可使用。
4.酚标准溶液：酚原液 --- 取 1g 苯酚溶于蒸馏水中，定容至 1000ml 水中，保留于棕色瓶中。
酚工作液 --- 取 10 ml 酚原液稀释至 1000ml 水中，每毫升含酚5.甲苯硫酸铝溶液，称取硫酸铝，定容至100ml。
（二）实验步骤1.标线制作取 0，1， 3，5，7，9，11，13ml 酚工作液，置于 50ml 容量瓶中，加入5ml 缓冲液和 4 滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min 后比色测定。
以光密度值为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。
2.样品测定称取风干土样（过 20 目筛，去除杂质），搁置于 200ml 容量瓶（离心管）中，加甲苯，轻摇 15min 后，加入 20ml %磷酸苯二钠，认真摇匀后搁置于 37°C恒温箱中培育 24h，后于培育液中加入 %硫酸铝溶液过滤。
酶方法测定
凋落物分解酶（土壤酶）测定方法（1）取样要求：不同取样方式均会影响到酶活性的测定。
影响程度不仅与酶种类有关, 而且与凋落物或土壤类型有关。
首选：样品最好在4℃条件下贮存，并在一周之内完成测定，最大程度上降低样本贮存所造成的误差。
其次是：利用风干土进行酶活性测定，一般效果较差。
最后是：样品一直保存在−20 ℃环境中，效果较差。
（2）样品量要求：凋落物样品：0.5 g 土壤样品：1.0 g（3）纤维二糖酶、几丁质酶、内切纤维素酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶均采用对硝基苯酚(PNP)法。
酶活性以每小时每克土催化产生的对硝基苯酚的微克数(PNP μg/(g h))来表示。
主要过程为将0.5 g粉碎的鲜凋落物混入125 ml 50 mmol·L-1的醋酸缓冲液（pH=5）中，制成均匀悬浮液。
2 ml凋落物悬浮液和相应的底物（不同酶需要不同的底物）2 ml混匀，25℃下培养一段时间（不同酶需要不同的培养时间）。
培养完毕后，2000 r·min-1离心5 min，取1 ml上清液转入装有0.2 ml，1 mol·L-1的NaOH的试管中，然后定容到10 ml然后在410 nm下测量吸光值，然后计算出对硝基苯酚产生的量。
测定酚氧化酶和过氧化物酶活性的过程为：在凋落物悬浮液中加入等体积的基质溶液，培养后的滤液用分光光度计在460 nm 处测定。
用每小时每克干土左旋多巴(DOPA)物质的量的变化(DOPA μmol/(gh)) 表示酶活性的高低。
DOPA的吸光系数用酪氨酸酶进行校正。
不同酶活性所选择的基质种类、缓冲液以及培养温度和时间见表：。
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
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土壤蛋白酶活性测定(茚三酮比色法）实验试剂:1、pH7。
6的0.05mol/L的tris—HCL缓冲液（三羟甲基氨基甲烷—盐酸缓冲液):50ml0.2mol/L 的三羟甲基氨基甲烷与27.5ml0.2mol/L的盐酸混合,稀释成200ml。
2、2%酪酸钠溶液:称取2g 酪酸钠，加入10ml0.1mol/L的NaOH溶液，沸水浴处理5min,待膨化后加入pH7.6的tris—HCl缓冲液约80ml，继续沸水浴处理,直至完全溶解，用同样的缓冲液定容至100ml。
3、Tris—HCl—CaCl2混合溶液:用pH7.6的0.05mol/Ltris—HCl缓冲液配制的0。
01mol/L的CaCl2溶液。
4、0。
6mol/L乙酸铅溶液。
5、草酸钠—乙酸混合溶液：每1000ml0。
26mol/L的草酸钠溶液含有240。
7ml0。
2mol/L的乙酸.6、茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂:称取2g茚三酮，0。
02g 抗坏血酸，溶于100ml无水乙醇。
7、0。
2％KIO3溶液。
8、pH5.8乙酸-乙酸钠缓冲液：94 ml0。
2mol/L乙酸钠与6ml0。
2mol/L乙酸混合.9、0.01%甘氨酸标准溶液：1g甘氨酸溶于1000ml水，再稀释10倍。
10、甲苯。
以上试剂均为分析纯。
实验仪器:基本仪器如试管、烧杯等、离心机、分光光度计、刻度试管、水浴锅、电子天平、移液管实验步骤1、标准曲线的绘制①分别吸取50 、100、150、200、250、300μl0。
01％甘氨酸标准溶液,置于10 ml刻度试管中(浓度分别相当于NH2 0.107、0。
213、0。
320、0。
426、0。
533、0.639μg/ml），加入2mlpH5。
8的乙酸—乙酸钠缓冲溶液②加入1。
5ml 茚三酮—乙醇—抗坏血酸混合试剂，混合均匀,沸水浴加热16min③取出立即用自来水冷却15min,加入1ml0.2%KIO3并混合均匀，用蒸馏水定容至10ml，1h内在570nm处比色测定吸光值；以氨基氮(NH2）的浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线.2、培养与测定①称取0.200g土壤,加入2mlTris—HCl—CaCl2混合溶液和1ml甲苯,混合均匀后静置15min以抑制微生物活性；②然后再加入5ml2%的酪酸钠溶液,50℃振荡培养2h。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酸性磷酸酶活性的测定1.试剂制备(1)0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液取10.67 GP硝基苯磷酸二钠（6H2O，分子量371.1）溶于pH4。
5 5在普通缓冲液中稀释至250ml，在4℃冰箱中保存。
(2)通用缓冲液（ph4.5）（缓冲液久置会有沉淀）储备溶液由以下成分组成：三羟甲基氨基甲烷12.1g顺丁烯二酸11.6g柠檬酸14g硼酸6.3g溶于500ml 1nnaoh（40g定容1L），加入蒸馏水至1L。
取200ml储备溶液，加入0.1nhcl或浓HCl，将pH值调节至4.5。
最后，稀释至1L。
（3）甲苯(4)0.5mol/lcacl2.2h2o溶液：36.75gcacl2。
2H 2O定容500ml（无水CaCl2:11.1g定容200ml）（5）0.5mol/lnaoh 溶液：20gnaoh定容1L 2。
测量步骤取1g土壤，置于50ml三角瓶中，加4ml通用缓冲液（ph4.5）、0.25ml甲苯和1ml0.115mp-硝基苯磷酸钠溶液,摇匀后，置于37℃恒温箱中1h。
培养结束后，加入1ml0 5mol/L氯化钙溶液和4ml 0 5mol/LNaOH溶液，用浓滤纸过滤至50ml容量瓶中，用蒸馏水定容后在410nm处比较颜色。
3.计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用单位时间内每克土中的对硝基苯酚的毫克数表示，w（mgg-1h-1）=m1/（m×t）式中：M1——标准曲线上发现的样品中对硝基苯酚的质量（mg）；T-反应时间（H）=1hm-样品土壤重量（g）无土壤ck:用1ml蒸馏水代替1g土壤；每批土样做2个；无基质ck:用1ml蒸馏水代替1mlpnpp。
每个处理做1个。
标准曲线的制备：1）对硝基苯酚标液：1g对硝基苯酚定容1l，低温保存。
2）取标液0、1、2、3、4、5ml于0-6号硬质试管中，分别加ph6.5通用缓冲液4ml，cacl2.2h2o溶液1ml，naoh溶液4ml，② 混合后，将定量滤纸过滤至50ml容量瓶中。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法综合引言：土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定时间内分解特定底物的能力，是评估土壤生态系统功能和土壤肥力状况的重要指标。
土壤酶活性测定方法是研究土壤酶活性的关键手段之一、本文将综合介绍常用的土壤酶活性测定方法，包括蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法。
一、蔗糖酶活性测定方法：蔗糖酶是一种重要的有机磷酸酶，广泛存在于土壤中，能够水解蔗糖为葡萄糖和果糖。
测定土壤蔗糖酶活性可以反映土壤中酶的数量和活性。
1.提取土壤酶液：将土壤与玻璃棒研磨均匀，用0.5mol/L甘油缓冲液（pH6.8）溶解土壤，离心沉淀，得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入蔗糖底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应30分钟，用酒精停止反应，加入硫酸，取样测定比色液的吸光度。
3.统计分析：根据比色液吸光度与标准曲线对照，计算出土壤蔗糖酶活性。
二、过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤过氧化氢酶活性可以反映土壤中氧化还原反应的发生情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与甘油缓冲液混合，加入液氮使其冷冻破碎，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入过氧化氢底物和缓冲液，在25℃恒温振荡下反应一定时间，停止反应后加入酒精，用紫外分光光度计测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与过氧化氢递减曲线对照，计算出土壤过氧化氢酶活性。
三、脲酶活性测定方法：脲酶是一种解脲酸酯的酶，能够水解尿素为氨和二氧化碳。
测定土壤脲酶活性可以反映土壤中氮循环的情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与脲酸酯缓冲液混合，用玻璃棒研磨均匀，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：将一定量的土壤酶液加入脲酶底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应一定时间，反应停止后加入酒精，用比色法测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与标准曲线对照，计算出土壤脲酶活性。
结论：以上就是蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法的综合介绍。
土壤酶活活性测定方法
土壤脲酶（urease）活性的测定方法：靛酚比色法（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
（二）试剂1）甲苯）甲苯2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。
将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水使用前将2溶液各20毫升混合，溶液保存在冰箱中。
使用前将毫升水（（B）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
毫升。
用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0.1mg氮的标准液。
氮的标准液。
（三）测定步骤）标准曲线绘制（1）标准曲线绘制吸取配置好的氮溶液10mL，定容至100mL，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13mL移至50mL容量瓶，加水至20mL，再加入4mL苯酚钠，仔细混合，加入3mL次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。
将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
（2）土壤中脲酶活性的测定）土壤中脲酶活性的测定称取10 g土壤置于100mL容量瓶中。
用2mL甲苯处理15分钟。
往瓶中加土壤蛋白酶活性测定方法：铜盐比色法（一）方法原理本法基于以精胶为基质，酶解后所释放的氨基酸使其与铜盐反应形成蓝色复合物。
用比色测定颜色深度，计算出氨基酸含量，来度量酶的活性。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法，主要用于评估土壤中各种酶的活性水平，以了解土壤肥力、有机质分解和养分循环等生态过程的状况。
常见的土壤酶活性测定方法包括呼吸酶活性、脲酶活性、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性等。
以下是常用的几种土壤酶活性测定方法：
1.呼吸酶活性测定法
呼吸酶活性是衡量土壤微生物活性和有机质分解的一种指标。
方法基于土壤微生物呼吸作用的过程，通过测定土壤呼吸二氧化碳释放速率来评估土壤微生物活性。
常用的测定方法有浸提法、插管法和接触式法等。
2.脲酶活性测定法
脲酶在土壤中参与尿素的分解过程，是一个重要的氮素转化酶。
脲酶活性的测定方法通常利用碳酸二乙酯在酶的作用下水解成二乙酰胺，通过测定产物的吸光度或荧光强度来评估脲酶活性。
3.过氧化氢酶活性测定法
过氧化氢酶是土壤中对过氧化氢具有催化降解作用的一种酶。
测定过氧化氢酶活性的方法常采用比色法或荧光法。
其中，比色法是通过过氧化氢与乳酸铁催化反应产生的底物和酶催化下的反应速率相关的颜色变化来测定酶活性。
而荧光法则是通过过氧化物与具有荧光基团的底物反应产生荧光信号来测定酶活性。
4.过氧化物酶活性测定法
过氧化物酶包括过氧化物歧化酶和过氧化氢酶，是土壤中分解有毒过氧化物的关键酶。
测定该酶活性的方法主要有过氧化氢法和氧化还原法。
过氧化氢法利用过氧化氢催化底物的氧化反应来测定过氧化物酶活性，而氧化还原法则是通过直接测定底物与过氧化物酶反应后产生的电流或电势差来评估酶活性。
以上是常见的几种土壤酶活性测定方法，通过测定土壤中相关酶活性的变化，可以评估土壤生物学特性并指导土壤改良和管理措施的制定。
农田土壤酶活性分析与调节技术研究
农田土壤酶活性分析与调节技术研究农田土壤是农作物生长的基础，土壤中的酶活性对于农作物的生长发育和产量有着重要的影响。
酶活性是土壤中微生物代谢活动的重要指标，可以反映土壤的肥力和生物活性。
因此，分析和调节土壤酶活性对于提高农田土壤质量和农作物产量具有重要意义。
一、农田土壤酶活性的分析方法1. 酶活性测定方法目前常用的测定土壤酶活性的方法有脲酶法、蔗糖酶法、脱氢酶法等。
这些方法通过添加特定底物，测定土壤中特定酶的催化反应速率来间接反映酶活性水平。
其中，脲酶法适用于测定脲酶活性，蔗糖酶法适用于测定蔗糖酶活性，脱氢酶法适用于测定脱氢酶活性等。
2. 酶活性指标的解读通过测定土壤中不同酶的活性水平，可以得到一系列的酶活性指标。
常见的酶活性指标有脲酶活性、蔗糖酶活性、脱氢酶活性等。
这些指标可以反映土壤中不同酶的代谢活动水平，进而评估土壤的肥力和生物活性。
二、农田土壤酶活性的调节技术1. 有机肥的应用有机肥是提高土壤酶活性的重要手段之一。
有机肥中富含丰富的有机质和微生物，可以为土壤提供养分和能量，促进土壤微生物的生长和繁殖，从而增加土壤酶的活性。
适量施用有机肥可以改善土壤结构，增加土壤保水保肥能力，提高土壤酶活性。
2. 微生物肥料的利用微生物肥料是一种含有大量有益微生物的肥料，可以增加土壤中有益微生物的数量和活性。
这些有益微生物可以分解有机质，释放养分，促进植物的生长。
适量使用微生物肥料可以提高土壤酶活性，增加土壤中有益微生物的数量，改善土壤生态环境。
3. 调节土壤pH值土壤pH值对土壤酶活性有着重要的影响。
过酸或过碱的土壤会抑制土壤中酶的活性，影响农作物的生长和发育。
因此，调节土壤pH值是提高土壤酶活性的关键。
可以通过施用石灰或硫酸等物质来调节土壤pH值，使其接近中性，从而提高土壤酶活性。
4. 合理施肥合理施肥可以保证作物对养分的需求，同时也可以提高土壤酶活性。
过量施肥会导致土壤中养分过剩，抑制土壤中酶的活性。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
酶活性测定方法原理
酶活性测定方法原理
酶活性测定方法是用来测量酶的催化活性的方法，其原理基于酶催化反应速率与酶活性之间的关系。
酶活性是指酶催化单位时间内转化底物的量，通常以单位时间内生成的产物的浓度变化率来表示。
酶活性的测定方法可以分为直接测定和间接测定两种。
直接测定方法包括光度法、荧光法和放射性测定法等。
其中，光度法是最常用的方法之一。
其基本原理是通过测量与酶催化反应相关的光学性质的变化来确定酶的活性。
这些光学性质可以是波长、吸光度、发光强度等。
间接测定方法主要是通过测定酶催化反应过程中与底物转化相关的反应产物的生成量来间接得到酶活性。
常见的方法有pH 法、电位滴定法和色谱法等。
例如，pH法是通过测定与底物转化相关的酶催化反应产生的H+或OH-离子生成量来确定酶的活性。
总的来说，酶活性测定方法的原理是根据酶催化反应速率与酶活性之间的关系，通过测定与底物转化相关的反应产物的生成量或与酶催化反应相关的光学性质的变化来确定酶的活性。
酶活性测定技术的使用教程
酶活性测定技术的使用教程简介：酶活性是指单位时间内酶能够催化的底物转化的数量，是评估酶活性及其效率的重要指标。
酶活性的测定对于生物学、医学和食品科学等领域具有重要意义。
本篇文章将为您介绍酶活性测定技术的使用教程，帮助您了解如何准确测定酶活性并获得可靠的实验结果。
一、酶活性测定原理酶活性测定的原理是通过测定单位时间内酶所催化的底物转化速率来评估酶的催化效率。
常见的酶活性测定方法包括色谱法、光谱法、比色法和电化学法等。
选择合适的方法需要根据实验的具体目的和所研究的酶的特性来决定。
二、酶活性测定步骤1. 样品制备：首先根据实验目的选择合适的样品，可以是纯酶、酶提取液或含酶的生物样品。
按照实验要求将样品进行预处理，例如将样品离心、稀释或者浓缩等。
2. 酶活性测定方法选择：根据样品和实验目的的不同，选择合适的酶活性测定方法。
常用方法包括比色法、光谱法和电化学法。
3. 实验操作：根据所选择的酶活性测定方法，进行相应的实验操作。
通常包括以下几个步骤：a. 准备试剂并调整反应体系：根据实验所需，准备好所需的试剂，并按照比例将试剂加入到反应体系中。
b. 控制实验条件：因为酶活性常受温度、pH值和离子浓度等因素的影响，所以在实验过程中需要控制好这些条件以确保准确的结果。
c. 反应时间和反应温度的优化：根据所研究的酶的特性，通过调整反应时间和反应温度来优化实验条件。
d. 反应停止和数据记录：根据所使用的方法，选择合适的方法来停止反应，并记录数据。
4. 数据分析：根据实验所得的数据，进行数据分析和结果解读。
根据所使用的酶活性测定方法，可以得到对应的活性值。
常用的酶活性单位有单位时间里转化底物的数量（例如单位时间里转化的亚硝酸盐浓度变化量）或者特定反应物的生成速率等。
5. 结果验证：通过对多组样品的测定，可以进行结果验证。
重复实验或者使用多个不同方法进行测定，可以提高结果的可靠性。
同时，设立对照组和空白组，可以进一步确认实验结果的准确性。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。
因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。
本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。
一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。
这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。
2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。
有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。
3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。
这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。
4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。
该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。
1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。
这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。
2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。
比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。
3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。
荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。
4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。
比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。
5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。
电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。
总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。
每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。
土壤酶活活性测定方法
土壤酶活活性测定方法酶活性是指酶在一定时间内单位体积或质量产生的酶催化反应产物的数量。
酶活性在土壤中起着关键作用，因为它们能够将无机和有机物质转化为可供植物吸收的形式。
常用的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。
下面将介绍常见的土壤酶活活性测定方法：1.脲酶活性测定：脲酶能够催化尿素的水解，生成氨和二氧化碳。
用于测定土壤脲酶活性的方法是通过在土壤样品中加入一定浓度的尿素，经过一定时间后，测量生成的氨量来评估脲酶活性水平。
2.过氧化氢酶活性测定：过氧化氢酶是一种重要的抗氧化酶，能够将过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤中过氧化氢酶活性的方法是在土壤样品中加入过氧化氢底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中氧气释放速率来评估过氧化氢酶活性水平。
3.蔗糖酶活性测定：蔗糖酶是一种能够催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖的酶。
测定土壤中蔗糖酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的蔗糖，经过一定时间后，测量生成的葡萄糖和果糖的量来评估蔗糖酶活性水平。
4.碱性磷酸酶活性测定：碱性磷酸酶是一种能够催化有机磷酸盐水解为无机磷酸盐的酶。
测定土壤中碱性磷酸酶活性的方法是在土壤样品中加入一定浓度的磷酸酯底物，经过一定时间后，通过测量反应体系中无机磷酸盐生成的速率来评估碱性磷酸酶活性水平。
除了以上几种常见的土壤酶活性指标外，还有其他一些指标可以用于评估土壤酶活性，如脱氢酶、葡萄糖氧化酶等。
具体选择测定方法应根据实际需求和研究目的来确定。
总结起来，土壤酶活活性测定方法是通过测定土壤中特定酶活性水平来评估土壤质量和生态系统功能的一种手段。
常见的土壤酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等。
选择适当的测定方法需要考虑实际需求和研究目的。
土壤微生物胞外酶活的测定 荧光法
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《2.1土壤酸性磷酸酶活性测定》
《2.1土壤酸性磷酸酶活性测定》土壤酸性磷酸酶活性测定土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。
在ph4-9的土壤中均有磷酸酶。
积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。
研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及ph也有关。
磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。
磷酸苯二钠比色法1.试剂配制（1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。
（2）ph5醋酸盐缓冲液。
a.醋酸盐缓冲液（ph=5.0）a：0.2mol/l醋酸溶液（11.5ml，稀释至1000ml）b：0.2mol/l醋酸钠溶液（16.4gc2h3o2na或27.2gc2h3o2na·3h2o 定容至1000ml）14.8mla+35.2mlb混合即得（3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂。
取0.125g2，6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。
保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
（4）酚的标准溶液：酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1l，贮于棕色瓶中。
酚工作液——取10ml酚原液稀释至1l（每毫升含0.01mg酚）。
（5）甲苯。
（6）0.3%硫酸铝溶液。
标准曲线绘制。
取1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。
以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。
2.操作步骤称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，轻摇15min 后，加入20ml0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml0.3%硫酸铝溶液并过滤。
吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。
用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm处比色。
3.结果计算磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。
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1）酶促反应试剂：基质8%蔗糖，pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（11.876g Na2HPO4·2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成，甲苯
2）葡萄糖标准液（1mg/mL）
预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
土壤酶活性测定方法
土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）
一、原理
脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
4）甲苯
5）0.3%硫酸铝溶液
6）酚标准溶液
酚原液：取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，存于棕色瓶中。
酚工作液（0.01mg/ml）：取10ml酚原液稀释至1L。
三、操作步骤
称5g土样置于200ml三角瓶中，加2.5ml甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，37℃下培养24h。然后在培养液加入100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，于分光光度计上660nm处比色。
4）3,5-二硝基水杨酸溶液：称1.25g二硝基水杨酸，溶于50ml 2mol/LNaOH和125ml水中，再加75g酒石酸钾钠，用水稀释至250ml（保存期不过7天），
5）葡萄糖标准液（1mg/mL）
预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。准确称取50mg葡萄糖于烧杯中，用蒸馏水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，摇匀（冰箱中4℃保存期约一星期）。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤
葡萄糖标准曲线：分别吸1mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS溶液3ml混匀，于沸腾水浴中加热5min，取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
一、原理
测定磷酸酶主要根据酶促生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。前一种通常称为有有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法，后一种称为无机磷含量法。研究证明：磷酸酶有三种最适PH值：4~5、6~7、8~10。因此，测定酸性、中性和碱性土壤的磷酸酶，要提供相应的PH缓冲液才能测出该土壤的磷酸酶最大活性。测定磷酸酶常用的PH缓冲体系有乙酸盐缓冲液（PH5.0~5.4）、柠檬酸盐缓冲液（PH7.0）、三羟甲基氨基甲烷缓冲液（PH7.0~8.5）、和硼酸缓冲液（PH9~10）。磷酸酶测定时常用基质有磷酸苯二钠、酚酞磷酸钠、甘油磷酸钠、α-或者β-萘酚磷酸钠等。现介绍磷酸苯二钠比色法。
3）3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2mol/LNaOH和50ml水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释定容至100ml（保存期不过7天）。
三、操作步骤
（1）标准曲线绘制
分别吸1 mg/mL的标准葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于试管中，再补加蒸馏水至1mL，加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温，以空白管调零在波长540nm处比色，以OD值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶测定
称取5 g土壤，置于50mL三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml DNS试剂，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于508nm处进行比色。（为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照；如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样。）
注意事项:
1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。
2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。
3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样
四、结果计算：以24小时后1g土壤中NH3－N的毫克数表示土壤脲酶活性（Ure）。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
二、试剂
1）缓冲液：
（1）醋酸盐缓冲液（PH 5.0）
0.2mol/L醋酸溶液11.55ml 95%冰醋酸溶至1L.
0.2mol/L醋酸钠溶液16.4g C2H3O2Na或27g C2H3O2Na.3H2O溶至1L.
取14.8ml 0.2mol/L醋酸溶液和35.2ml 0.2mol/L醋酸钠溶液稀释至1L.
四、结果计算
纤维素酶活性以72h，1g干土生成葡萄糖毫克数表示。
2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。
3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样
四、结果计算
以24h后1g土壤中释放出的酚的质量（mg）表示磷酸酶活性。
磷酸酶活性=（a样品－a无土－a无基质）×V×n／m
式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
（3）硼酸盐缓冲液（PH 9.6）
0.05mol/L硼砂溶液19.05g硼砂溶至1L.
0.2mol/L NaOH溶液8g NaOH溶至1L.
取50ml 0.05mol/L硼砂溶液加23ml 0.2mol/L NaOH溶液稀释至200ml.
2）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）
3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：称取0.125g氯代二溴对苯醌亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
四、结果计算：蔗糖酶活性以24h，1g干土生成葡萄糖毫克数表示。
蔗糖酶活性=（a样品－a无土－a无基质）×n／m
a样品、a无土、a无机质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数；n为分取倍数；m表示烘干土重
土壤纤维素酶活性测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）
一、原理
纤维素是植物残体进入土壤的碳水化合物的重要组分之一。在纤维素酶作用下，它的最初水解产物是纤维二糖，在纤二糖酶作用下，纤维二糖分解成葡萄糖。所以，纤维素酶是碳素循环中的一个重要的酶。纤维素酶解所生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
（2）柠檬酸盐缓冲液（PH 7.0）
0.1mol二钠溶液53.63g Na2HPO4.7H2O或者71.7g Na2HPO4.12H2O溶至1L.
取6.4ml 0.1mol/L柠檬酸溶液加43.6ml 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至100ml.
二、试剂
1）甲苯
2）1%羧甲基纤维素溶液：1g羧甲基纤维素钠，用50%的乙醇溶至100ml。
3）pH5.5醋酸盐缓冲液：
0.2mol/L醋酸溶液11.55ml 95%冰醋酸溶至1L.
0.2mol/L醋酸钠溶液16.4g C2H3O2Na或27.22g C2H3O2Na.3H2O溶至1L.
取11ml 0.2mol/L醋酸溶液和88ml 0.2mol/L醋酸钠溶液混匀即成PH 5.5醋酸盐缓冲液.
Ure=（a样品－a无土－a无基质）×V×n／m
式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的NH3－N毫克数；
a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的NH3－N毫克数；
a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的NH3－N毫克数；
V为显色液体积；n为分取倍数，浸出液体积／吸取滤液体积；m表示烘干土重
土壤磷酸酶活性测定（磷酸苯二钠比色法）
标准曲线绘制：取0、1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml硼酸缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后，在分光光度计上660nm处比色。以显色液中酚浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
注意事项:
1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。
6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液（0.01mg/ml）。
三、操作步骤
称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。