细胞培养—无菌操作课件
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《细胞培养医学》课件
个性化医疗和精准治疗
通过细胞培养技术可以实现对患者的细胞进行精准治疗和个性化用 药，提高治疗效果和安全性。
瘤学等研究。
20世纪70年代，随着组织工程 和再生医学的发展，细胞培养技 术在临床治疗中也得到了广泛应
用。
细胞培养技术的应用领域
基础研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等基本生命过程， 为疾病的发生、发展和治疗提
供理论依据。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，为新药的研发提供 实验依据。
药物筛选与药理学研究
药物筛选
通过细胞培养技术，可以快速筛选出 具有药效的化合物，为新药研发提供 候选药物。
药理学研究
利用细胞培养模型，可以研究药物对 细胞的作用机制，为药物设计和优化 提供依据。
疾病模型的建立
疾病模拟
通过细胞培养技术，可以模拟人类疾病的发生和发展过程，为疾病机制研究和 药物筛选提供有效模型。
组织工程
用于构建人工组织和器官，为 临床治疗提供替代品和修复材 料。
再生医学
用于治疗和修复损伤组织和器 官，促进机体的再生和修复。
02 细胞培养的基本原理
细胞生长与增殖的机制
1 2
细胞周期
描述细胞从分裂间期到分裂期再到新的分裂间期 的循环过程，包括DNA复制、染色体分离等关键 事件。
细胞分裂
阐述细胞分裂的过程，包括有丝分裂和减数分裂 ，以及它们在细胞生长和增殖中的作用。
细胞培养的质量控制
培养基质量控制
确保培养基的成分、浓度和PH值等符合标准，以保证细胞的正常 生长和分化。
细胞污染控制
防止细菌、真菌等微生物污染，以及交叉污染，确保细胞的纯度和 安全性。
细胞生长曲线的测定
通过细胞培养技术可以实现对患者的细胞进行精准治疗和个性化用 药，提高治疗效果和安全性。
瘤学等研究。
20世纪70年代，随着组织工程 和再生医学的发展，细胞培养技 术在临床治疗中也得到了广泛应
用。
细胞培养技术的应用领域
基础研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等基本生命过程， 为疾病的发生、发展和治疗提
供理论依据。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，为新药的研发提供 实验依据。
药物筛选与药理学研究
药物筛选
通过细胞培养技术，可以快速筛选出 具有药效的化合物，为新药研发提供 候选药物。
药理学研究
利用细胞培养模型，可以研究药物对 细胞的作用机制，为药物设计和优化 提供依据。
疾病模型的建立
疾病模拟
通过细胞培养技术，可以模拟人类疾病的发生和发展过程，为疾病机制研究和 药物筛选提供有效模型。
组织工程
用于构建人工组织和器官，为 临床治疗提供替代品和修复材 料。
再生医学
用于治疗和修复损伤组织和器 官，促进机体的再生和修复。
02 细胞培养的基本原理
细胞生长与增殖的机制
1 2
细胞周期
描述细胞从分裂间期到分裂期再到新的分裂间期 的循环过程，包括DNA复制、染色体分离等关键 事件。
细胞分裂
阐述细胞分裂的过程，包括有丝分裂和减数分裂 ，以及它们在细胞生长和增殖中的作用。
细胞培养的质量控制
培养基质量控制
确保培养基的成分、浓度和PH值等符合标准，以保证细胞的正常 生长和分化。
细胞污染控制
防止细菌、真菌等微生物污染，以及交叉污染，确保细胞的纯度和 安全性。
细胞生长曲线的测定
第十章植物细胞培养的基本过程和方法ppt课件
二、通过愈伤组织诱导获取植物细胞
愈伤组织的概念--P173 形成过程： 1、起始期； （诱导期） 准备进行分裂 2、分裂期；细胞体积变小→分生状态 3、形成期。大小稳定 内部深层细胞开始分裂
怎样从愈伤组织分离得到细胞？
P175 获得愈伤组织后，挑选质量好的愈伤组 织块，用无菌的镊子或小刀分割得到植物小 细胞团，也可以将愈伤组织转移到液体培养 基中，加入经过灭菌处理的玻璃珠，进行振 荡培养，使愈伤组织分散成为小细胞团或单 细胞，然后用适当孔径的不锈钢筛网过滤， 除去大细胞团和残渣，得到一定体积的小细 胞团或单细胞悬浮液。
份35℃的固体培养基充分混合均匀，然后均匀地平
铺于培养皿中，厚度约1~2mm。 封口：用石蜡膜封培养皿。
2、看护培养
看护培养（nurse culture）：是由Muir1954年设计的。
操作方法： 在固体培养基上置入一块 活跃生长的愈组织，再在愈 伤组织上放一小片滤纸，待 滤纸湿润后将细胞接种于滤 纸上。当培养细胞长出微小 细胞团以后，将其直接转至 琼脂培养基上让其 迅速生长
第四节 单细胞培养
悬浮培养不能对某一细胞进行定点观察 和分析，也就不能进行定点选择。因此，在 进行细胞株（种子细胞）选择和需要对细胞 活动跟踪观察的情况下，必须进行真正意义 上的单细胞培养。由于植物细胞的团聚性， 单细胞培养还比较困难。
1、平板培养 2、看护培养 3、微室培养 4、条件培养（双层滤纸培养）
细胞生长指标
1、细胞生长计量: 细胞计数 细胞密实体积 细胞鲜重 细胞干重
2、细胞活力测定
悬浮细胞培养的同步化
细胞同步化：同一悬浮培养体系的所有细 胞都同时通过细胞周期的某一特定时期。
植物细胞在悬浮培养中的游离性较差， 容易团聚进入不同程度的分化状态，因此 要达到完全同步化相当困难。
细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
倒 置 显 微 镜
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
液 氮 罐
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
《无菌技术》ppt课件
利用噬菌体（一种病毒）感染并 杀死细菌的方法。
酶灭菌法
利用酶分解微生物细胞壁或蛋白 质，使其失去活性。
PART 03
无菌技术的实际应用
医疗领域
手术室
无菌技术应用于手术室，确保手 术进程中使用的器械、敷料等物 品的无菌状态，下落术后感染的
风险。
注射与输液
无菌技术应用于注射器和输液器的 生产、储存和使用，确保药物不被 污染，保证患者的安全。
奶制品的无菌处理
奶制品容易受到微生物污染，因此需要进行无菌处理。通 过高温瞬时灭菌、超高压灭菌等技术，可以杀灭奶制品中 的微生物，延长保质期并保证食品安全。
罐头的无菌包装
罐头食品是典型的无菌包装食品之一。通过高温、高压等 工艺，可以在密封的罐头中杀灭所有微生物，使食品长期 保存而不变质。
实验室的无菌技术应用案例
202X-2026
ONE
KEEP VIEW
XXX
XXX
《无菌技术》PPT课 件
XXX
XXX
WENKU
REPORTING
汇报人：XXX
202X-12-录
• 无菌技术的定义与重要性 • 无菌技术的操作方法 • 无菌技术的实际应用 • 无菌技术的挑战与未来发展 • 无菌技术的案例分析
无菌技术应用于方便食品 的生产，如方便面、速冻 食品等，提高产品的卫生 质量。
实验室
微生物实验
无菌技术应用于微生物实验中， 如细菌培养、病毒分离等，确保 实验结果不受外界微生物的干扰
。
细胞培养
无菌技术应用于细胞培养实验中 ，如干细胞培养、肿瘤细胞培养 等，保证细胞的生长和繁育不受
污染。
分子生物学实验
血液透析
无菌技术应用于血液透析机的使用 ，确保血液在循环进程中不受外界 污染，提高透析效果。
酶灭菌法
利用酶分解微生物细胞壁或蛋白 质，使其失去活性。
PART 03
无菌技术的实际应用
医疗领域
手术室
无菌技术应用于手术室，确保手 术进程中使用的器械、敷料等物 品的无菌状态，下落术后感染的
风险。
注射与输液
无菌技术应用于注射器和输液器的 生产、储存和使用，确保药物不被 污染，保证患者的安全。
奶制品的无菌处理
奶制品容易受到微生物污染，因此需要进行无菌处理。通 过高温瞬时灭菌、超高压灭菌等技术，可以杀灭奶制品中 的微生物，延长保质期并保证食品安全。
罐头的无菌包装
罐头食品是典型的无菌包装食品之一。通过高温、高压等 工艺，可以在密封的罐头中杀灭所有微生物，使食品长期 保存而不变质。
实验室的无菌技术应用案例
202X-2026
ONE
KEEP VIEW
XXX
XXX
《无菌技术》PPT课 件
XXX
XXX
WENKU
REPORTING
汇报人：XXX
202X-12-录
• 无菌技术的定义与重要性 • 无菌技术的操作方法 • 无菌技术的实际应用 • 无菌技术的挑战与未来发展 • 无菌技术的案例分析
无菌技术应用于方便食品 的生产，如方便面、速冻 食品等，提高产品的卫生 质量。
实验室
微生物实验
无菌技术应用于微生物实验中， 如细菌培养、病毒分离等，确保 实验结果不受外界微生物的干扰
。
细胞培养
无菌技术应用于细胞培养实验中 ，如干细胞培养、肿瘤细胞培养 等，保证细胞的生长和繁育不受
污染。
分子生物学实验
血液透析
无菌技术应用于血液透析机的使用 ，确保血液在循环进程中不受外界 污染，提高透析效果。
植物细胞培养ppt课件
• 外植体：用来进行离体无菌培养的离体材料。
• 愈伤组织：外植体在离体培养条件下，细胞经脱分
化等一系列过程，产生一团不定型的疏散排列的薄 壁细胞（具有未分化细胞的特性）。
• 胚状体：由愈伤组织细胞诱导分化出具有胚芽，胚
根和胚轴的胚状结构。
• 不定芽：愈伤组织中的细胞发生分化，形成
不同的器官原基，再逐渐形成芽和根。
植物生长调节物质：
生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D
细胞分裂素类：BAP, KT，TDz，ZT
pH值（5.8）
琼脂
精选ppt
15
• 封口：接种后，瓶，管用无菌药棉或盖封
口，培养皿用无菌胶带封口
• 温度（25度），pH（5-6）和氧气（5%）
• 增殖：在新梢（愈伤组织）等形成后，分
株或切段转入增殖培养基中继代培养。
3）分化期：分化期是指在分裂期的末期，细胞 内开始出现一系列形态和生理上的变化，从而 使愈伤组织内产生不同形态和功能的细胞。分 化出形态和功能不同的细胞，分生细胞、色素 细胞、纤维细胞等 。
精选ppt
20
• 愈伤组织要求：松散性好、增殖快、再生能力强 。
外观一般为鲜艳的乳白或淡黄色，呈小颗粒状， 疏松易碎。
总的原则：健康无病的年幼组织。
精选ppt
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2）培养材料的消毒
材料
自来水和蒸 馏水冲洗
酒精中浸泡 30-60秒
无菌水 冲洗3遍
0.01%升汞 （HgCl2)消毒10 分钟
精选ppt
12
3） 制备外植体
在无菌条件下将材料切成0.2-0.5cm厚的小片， 剥去芽的鳞片，嫩枝的外皮或种皮胚乳。
精选ppt
苗后用自来水冲洗干净；再移栽到准备好 的基质中。
无菌技术ppt课件
实验和治疗过程的安全性。
保障医疗质量
无菌技术应用于医疗、实验室和 制药等领域，通过减少或消除微 生物污染，保障医疗质量和产品
安全。
减少感染风险
无菌技术的目的是减少或消除感 染的风险，保护患者和医务人员
的健康，提高医疗服务质量。
无菌技术的重要性
防止感染
无菌技术能有效防止手术或治疗过程中的微生物污 染，降低感染风险。
空气质量监控
02 使用空气过滤器等设备，监控无菌区域内的空气质量，确保符合无菌要求。
人员进出管理
03 严格控制人员进出无菌区域，确保进入人员经过适当的消毒和防护措施。
03
无菌技术在医疗 行业中的应用
手术室的无菌管理
环境清洁与消毒
定期清洁手术室，保持无尘无 菌，对手术器械和物品进行灭
菌处理。
手术人员卫生
微生物实验的无菌技术
通过严格的操作流程和无菌器具的 使用，减少实验中的微生物污染风 险。
无菌技术确保微生物实验结果的准 确性和可靠性，避免假阳性或假阴 性的出现。
无菌技术保护实验者免受有害微生 物的感染，确保实验人员的安全和 健康。
防止污染
确保准确性
保护实验者
细胞培养的无菌要求
01 无菌操作环境
。
02
操作复杂性
无菌操作需要高度的技术 水平和专业知识，不易普 及和推广。
03
高成本
无菌技术需要大量的设备 和资源支持，成本较高， 不适用于所有情况。
无菌技术的创新与发展
01 创新技术
介绍新型无菌技术，如紫外线消毒、纳米乐超滤等技术， 为无菌操作提供更高效、安全的方法。
无菌技术ppt 课件
汇报人：XXX
01
无菌技术概述
保障医疗质量
无菌技术应用于医疗、实验室和 制药等领域，通过减少或消除微 生物污染，保障医疗质量和产品
安全。
减少感染风险
无菌技术的目的是减少或消除感 染的风险，保护患者和医务人员
的健康，提高医疗服务质量。
无菌技术的重要性
防止感染
无菌技术能有效防止手术或治疗过程中的微生物污 染，降低感染风险。
空气质量监控
02 使用空气过滤器等设备，监控无菌区域内的空气质量，确保符合无菌要求。
人员进出管理
03 严格控制人员进出无菌区域，确保进入人员经过适当的消毒和防护措施。
03
无菌技术在医疗 行业中的应用
手术室的无菌管理
环境清洁与消毒
定期清洁手术室，保持无尘无 菌，对手术器械和物品进行灭
菌处理。
手术人员卫生
微生物实验的无菌技术
通过严格的操作流程和无菌器具的 使用，减少实验中的微生物污染风 险。
无菌技术确保微生物实验结果的准 确性和可靠性，避免假阳性或假阴 性的出现。
无菌技术保护实验者免受有害微生 物的感染，确保实验人员的安全和 健康。
防止污染
确保准确性
保护实验者
细胞培养的无菌要求
01 无菌操作环境
。
02
操作复杂性
无菌操作需要高度的技术 水平和专业知识，不易普 及和推广。
03
高成本
无菌技术需要大量的设备 和资源支持，成本较高， 不适用于所有情况。
无菌技术的创新与发展
01 创新技术
介绍新型无菌技术，如紫外线消毒、纳米乐超滤等技术， 为无菌操作提供更高效、安全的方法。
无菌技术ppt 课件
汇报人：XXX
01
无菌技术概述
《细胞培养技术》课件
《细胞培养技术》PPT课 件
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术ppt课件
-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室 温下全溶后再分装或使用。
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23
二、培养细胞相关条件
（三）细胞培养用试剂
血清解冻后发现有絮状物出现，该如何处理?
原因：脂蛋白的变性；
血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一） 在血清解冻后，也会存在于血清中，也是造成 絮状物的主要原因之一。这些絮状物的产生不 会影响血清本身的质量。
二级：提供工作人员、环境和产品的保护。
A（A1和A2）
B（B1和B2）
三级：生物安全3、4级实验室用。
ppt课件完整
7
生物安全柜
ESCO ppAt课C件2完-整4S1
8
生物安全柜
ppt课件完整
9
三级生物安全柜
ppt课件完整
10
二、培养细胞相关条件
3.相关仪器设备 （1）CO2培养箱 （2）倒置显微镜、普通显微镜及照相系统 （3）冰箱（4度，-20度，-80度） （4）超纯水系统（电阻率≥ 18.2MΩ.cm ） （5）细胞存储器（液氮罐，深低温冰箱、-80
清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是 剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤 分装。
5、其他血清 新生牛血清，小牛血清，一般国产的。
ppt课件完整
22
二、培养细胞相关条件
（三）细胞培养用试剂 （2）血清
使用：5 ～ 20%。 保存：–20～-70℃储存；
4℃存放勿超过一个月。 解冻步骤：
去除方法：可以将血清分装至无菌离心管
内，以400g 稍微离心，将上清液加入培养基内
一起过滤。我们不建议您直接过滤血清以去除
这些絮状物，因为它可能会阻塞过滤膜。
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二、培养细胞相关条件
（三）细胞培养用试剂
血清解冻后发现有絮状物出现，该如何处理?
原因：脂蛋白的变性；
血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一） 在血清解冻后，也会存在于血清中，也是造成 絮状物的主要原因之一。这些絮状物的产生不 会影响血清本身的质量。
二级：提供工作人员、环境和产品的保护。
A（A1和A2）
B（B1和B2）
三级：生物安全3、4级实验室用。
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生物安全柜
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生物安全柜
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三级生物安全柜
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二、培养细胞相关条件
3.相关仪器设备 （1）CO2培养箱 （2）倒置显微镜、普通显微镜及照相系统 （3）冰箱（4度，-20度，-80度） （4）超纯水系统（电阻率≥ 18.2MΩ.cm ） （5）细胞存储器（液氮罐，深低温冰箱、-80
清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是 剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤 分装。
5、其他血清 新生牛血清，小牛血清，一般国产的。
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二、培养细胞相关条件
（三）细胞培养用试剂 （2）血清
使用：5 ～ 20%。 保存：–20～-70℃储存；
4℃存放勿超过一个月。 解冻步骤：
去除方法：可以将血清分装至无菌离心管
内，以400g 稍微离心，将上清液加入培养基内
一起过滤。我们不建议您直接过滤血清以去除
这些絮状物，因为它可能会阻塞过滤膜。
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无菌观念培训课件
高压蒸汽灭菌法
通过过滤器将空气中的微生物过滤掉，使空气变得无菌。常用于手术室、实验室等场所的空气消毒。
过滤除菌法
利用紫外线的辐射作用，破坏微生物的核酸和蛋白质，使其死亡。常用于实验室、病房等场所的表面和空气消毒。
紫外线消毒法
操作前要对操作场所进行清洁、消毒，确保环境干净、整洁、无菌。
环境准备
操作人员要穿戴整洁的工作服、帽子、口罩、手套等防护用品，并进行手卫生处理，确保双手无菌。
操作结束后，要及时处理废弃物，并对操作场所进行清洁、消毒，确保环境无菌。
03
CHAPTER
无菌操作实践
手术开始前，需对手术室内进行全面的清洁和消毒，确保手术室内空气、物体表面无菌。
手术室环境准备
手术人员需进行严格的术前洗手、穿戴无菌手术衣帽、口罩等防护用品，确保自身不带菌进入手术室。
手术人员准备
定期进行风险评估
定期对无菌操作进行风险评估，识别潜在的风险因素，及时采取防范措施。
建立洁净环境
进行无菌操作前，必须确保操作环境的洁净度。采用适当的清洁、消毒方法，减少环境中微生物的数量。
严格操作规程
制定详细的无菌操作规程，对操作人员进行技能培训，确保他们熟练掌握正确的操作手法和注意事项。
使用高质量设备与材料
选择正规渠道购买无菌设备和材料，检查其质量认证和有效期，确保使用的产品符合标准。
案例一
01
操作人员未经过充分培训，导致在无菌操作过程中出现手法不规范，引发污染。应对措施：加强操作人员培训，熟练掌握无菌操作技巧和规范。
案例二
02
由于设备老化，无菌器具在使用过程中出现故障，导致操作失败。应对措施：定期检查和更新设备，确保其正常运行和无菌性能。
案例三
通过过滤器将空气中的微生物过滤掉，使空气变得无菌。常用于手术室、实验室等场所的空气消毒。
过滤除菌法
利用紫外线的辐射作用，破坏微生物的核酸和蛋白质，使其死亡。常用于实验室、病房等场所的表面和空气消毒。
紫外线消毒法
操作前要对操作场所进行清洁、消毒，确保环境干净、整洁、无菌。
环境准备
操作人员要穿戴整洁的工作服、帽子、口罩、手套等防护用品，并进行手卫生处理，确保双手无菌。
操作结束后，要及时处理废弃物，并对操作场所进行清洁、消毒，确保环境无菌。
03
CHAPTER
无菌操作实践
手术开始前，需对手术室内进行全面的清洁和消毒，确保手术室内空气、物体表面无菌。
手术室环境准备
手术人员需进行严格的术前洗手、穿戴无菌手术衣帽、口罩等防护用品，确保自身不带菌进入手术室。
手术人员准备
定期进行风险评估
定期对无菌操作进行风险评估，识别潜在的风险因素，及时采取防范措施。
建立洁净环境
进行无菌操作前，必须确保操作环境的洁净度。采用适当的清洁、消毒方法，减少环境中微生物的数量。
严格操作规程
制定详细的无菌操作规程，对操作人员进行技能培训，确保他们熟练掌握正确的操作手法和注意事项。
使用高质量设备与材料
选择正规渠道购买无菌设备和材料，检查其质量认证和有效期，确保使用的产品符合标准。
案例一
01
操作人员未经过充分培训，导致在无菌操作过程中出现手法不规范，引发污染。应对措施：加强操作人员培训，熟练掌握无菌操作技巧和规范。
案例二
02
由于设备老化，无菌器具在使用过程中出现故障，导致操作失败。应对措施：定期检查和更新设备，确保其正常运行和无菌性能。
案例三
微生物无菌操作技术介绍课件
智能化技术的应用
01
自动化无菌操作：通过智
能设备实现无菌操作的自
动化，提高工作效率
02
智能监控系统：实时监控
无菌操作环境，确保操作
安全
03
优化操作提供依据
04
智能决策支持：根据数据
分析结果，为无菌操作提
供智能决策支持
04 保障产品质量：确保生产过 程中的微生物污染得到有效 控制，保障产品质量和安全
无菌操作的基本原则
防止微生物污染：确保操作环境、 01 设备和人员无菌
保持无菌状态：操作过程中避免污 02 染，保持无菌状态
避免交叉污染：防止不同微生物之 03 间的交叉污染
定期检测：定期对操作环境和设备 04 进行微生物检测，确保无菌状态
微生物检测：无菌操作技术在微生物检测中的应用， 包括样品的采集、处理、检测等步骤。
微生物分离：无菌操作技术在微生物分离中的应用， 包括分离、纯化、保存等步骤。
微生物基因操作：无菌操作技术在微生物基因操作 中的应用，包括基因的提取、扩增、转化等步骤。
生物制药生产
01
微生物发酵：利用微生
物生产药物，如抗生素、
操作注意事项
操作前，确保无 菌操作台和实验 器材已消毒
01
操作过程中，避 免交叉污染，如 使用不同的实验 器材进行不同实 验
03
02
操作过程中，避 免触碰无菌操作 台和实验器材的 表面
04
操作结束后，及 时清理无菌操作 台和实验器材， 并再次消毒
微生物实验室操作
微生物培养：无菌操作技术在微生物培养中的应用， 包括培养基的制备、接种、培养等步骤。
微生物无菌操作技术的应用领域
食品工业：食品生产过程中的微生物
培养基灭菌PPT演示课件
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2.电磁波、射线灭菌
利用高能电磁波、紫外线或放射性物质产生的高能 粒子射线穿透微生物细胞进行灭菌。
紫外线、阴极射线、X射线、γ射线
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3.加热灭菌
高温致死原理：由于它使微生物的蛋白质和核酸等重要 生物高分子发生变性、破坏，例如它可使核酸发生脱氨、 脱嘌呤或降解，以及破坏细胞膜上的类脂质成分等。 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物 处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状 态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶 体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内 死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。
1. 灭菌的定义
用物理或化学因素除去物品上所有生活微生物的方法。 工程上的灭菌是指用物理或化学因子杀灭有生活能力的细菌
营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒是消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。工业规模的液体培
养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 灭菌的目的：纯种发酵。
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消毒（disinfection）
第二章 培养基灭菌
1
第二章 培养基灭菌
第一节 概述 第二节 加热灭菌的基本原理 第三节 分批灭菌的设计计算 第四节 连续灭菌的设计计算
2
本章学习要点
1、熟练掌握培养基灭菌的意义和原理、常用的灭菌方法 和相关计算设计。分批灭菌和连续灭菌的概念。理解培养 基灭菌的残留定律。 2、了解培养基灭菌在发酵工业中的选用及设备流程。培 养基灭菌的工程设计、培养基与设备、管道灭菌条件。理 解培养基连续灭菌和分批灭菌的特点及高温短时灭菌技术 原理；培养基连续灭菌和分批灭菌技术的优缺点比较及其 应用。 3、了解影响培养基灭菌的因素。
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2.电磁波、射线灭菌
利用高能电磁波、紫外线或放射性物质产生的高能 粒子射线穿透微生物细胞进行灭菌。
紫外线、阴极射线、X射线、γ射线
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3.加热灭菌
高温致死原理：由于它使微生物的蛋白质和核酸等重要 生物高分子发生变性、破坏，例如它可使核酸发生脱氨、 脱嘌呤或降解，以及破坏细胞膜上的类脂质成分等。 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物 处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状 态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶 体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内 死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。
1. 灭菌的定义
用物理或化学因素除去物品上所有生活微生物的方法。 工程上的灭菌是指用物理或化学因子杀灭有生活能力的细菌
营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒是消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。工业规模的液体培
养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 灭菌的目的：纯种发酵。
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消毒（disinfection）
第二章 培养基灭菌
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第二章 培养基灭菌
第一节 概述 第二节 加热灭菌的基本原理 第三节 分批灭菌的设计计算 第四节 连续灭菌的设计计算
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本章学习要点
1、熟练掌握培养基灭菌的意义和原理、常用的灭菌方法 和相关计算设计。分批灭菌和连续灭菌的概念。理解培养 基灭菌的残留定律。 2、了解培养基灭菌在发酵工业中的选用及设备流程。培 养基灭菌的工程设计、培养基与设备、管道灭菌条件。理 解培养基连续灭菌和分批灭菌的特点及高温短时灭菌技术 原理；培养基连续灭菌和分批灭菌技术的优缺点比较及其 应用。 3、了解影响培养基灭菌的因素。
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洁净级别—无菌药品生产所需的洁净 区可分为4个级别
• A级：高风险操作区，如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接 触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域，应当用单 向流操作台（罩）维持该区的环境状态。单向流系统在其工作区域 必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。应当有数据证明 单向流的状态并经过验证。在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使 用较低的风速。
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无菌操作—器皿的消毒
• 所有用到的器皿（买时已灭菌的除外）都必须经过高压灭 菌烘干后才能放入超净台内
• 已灭菌的、外包装完好的培养瓶、离心管、冻存管等可以 表面经75%酒精擦拭后直接放入超净台
• 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的 瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
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生物安全柜
• 生物安全柜一般是做致病菌，霉菌，酵母菌，病毒来用，操作区域 是负压，简单说是往上处抽风的，当然致病菌也不是直接抽出排到 室外，是过滤在生物安全柜的顶部漏器上，从排风量上可以分为， 50%外排型，75% 以及100%外排型。在生物安全柜内所形成的几乎没 有微生物的环境中，尽量避免使用明火，酒精灯的火焰可能会影响 室内的气流平衡。
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洗手和着装
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洗手和着装
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洗手和着装
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洗手和着装
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无菌操作—个人防护
• 在实验室工作时必须使用个体防护装备 • 个人衣服和普通实验服不能穿入细胞培养室内 • 实验室内不能穿长摆裙，短裙及短裤，不得在实验室内穿露脚趾的鞋
• 一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75% 酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒
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超净工作台
• 超净台是做一般对人体没有直接伤害的 常规细菌的操作实验，正压送风，工作 台工作区域的气流形成为水平层流型。 区内空气经初效过滤器过滤后，由风机 压入静压箱，再经高效过滤器过滤，由 此送出的洁净气流，以一定的均匀断面 风速通过操作区将尘埃颗粒带走，从而 形成高洁净的工作环境。超净空气的流 速为２４～３０ｍ／ｍｉｎ，这已足够 防止附近空气可能袭扰而引起的污染， 这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本 生灯对器械等的灼烧消毒
细胞培养之无菌操作
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Hale Waihona Puke 录PPT学习交流2
• 无菌
• 定义：对一个环境所谓的无菌，是指在环境中一切有生命活动的微生 细胞及其芽胞或孢子都不存在
• 无菌技术
• 定义：无菌技术是细胞工程的基本技术包括实验器具和材料的准备、 超净台的消毒、洗手和着装、无菌操作等
• 意义：因体外培养细胞没有抗感染能力，防止污染则是决定培养成功 要条件，即便是在设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作 也会导致污染。为在一切操作中尽可能保证无菌，每一项工作我们都 有条不紊和完全可靠。
• B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域。
• C级和D级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区。
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实验器具和材料的准备
• 在开始实验前要制定好实验计划和操作计划，有关数据的计算要事先 做好。根据实验要求，准备各种所需耗材物品及试剂，清点无误后将 其放置在操作场所进行消毒处理。
• 凡是需要带入安全柜（超净台）的培养基、胰酶、培养皿（培养瓶） 等耗材和试剂在经过消毒处理之后再用75%的酒精棉球擦拭表面。
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培养室的消毒
•进入无菌实验室前先穿好无菌服、戴帽子及口罩 •无菌实验室每周用0.2%的新洁尔灭拖洗地面、粘尘杆去除灰尘，再用 臭氧消毒 •室内台面要保持洁净，做完实验后用75％酒精或千分之三新洁尔灭棉 球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等 •实验所用物品尽可能一次性准备好，避免多次出入
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消毒
• 75%酒精消毒原理
• 酒精之所以能消毒是因为酒精能够吸收细菌蛋白的水分，使其脱水变 性凝固，从而达到杀灭细菌的目的。如果使用高浓度酒精，对细菌蛋 白脱水过于迅速，使细菌表面蛋白质首先变性凝固，形成了一层坚固 的包膜，酒精反而不能很好地渗入细菌内部，以致影响其杀菌能力。 75%的酒精与细菌的渗透压相近，可以在细菌表面蛋白未变性前逐渐不 断地向菌体内部渗入，使细菌所有蛋白脱水、变性凝固，最终杀死细 菌，酒精浓度低于75%时，由于渗透性降低，也会影响杀菌能力。
子 • 实验室内严禁处理和配戴眼镜 • 严禁穿着细胞培养室专用防护服离开实验室 • 发生手套破损应立即更换
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无菌操作—超净台的消毒
• 超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗，然后用紫外 线消毒30min
• 在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫 外线
• 消毒时工作台面上用品不可过多堆放，否则会遮挡射线降 低消毒效果
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消毒
• 新洁尔灭消毒液 •原理：新洁尔灭灭菌原理为破坏细胞膜、改变其渗透性而起杀菌作用
• 84消毒液 •84消毒液是一种以次氯酸钠为主的高效消毒剂，主要成分是次氯酸钠 次氯酸钠的漂白性是其与水反应生成的次氯酸所带来的，因次氯酸具 有极强的氧化性，能够将大多数物质氧化，使其变性，因而能起到消 毒作用
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无菌操作—细胞处理
• 超净台经过30min紫外灭菌后，才能打开通风装置
• 开始工作的第一步就是点燃酒精灯，之后的一切操作都需 在火焰近处并经过烧灼进行，动作要轻、准确，不能乱碰。 如吸管不能碰到废液缸，继续使用的器皿（如瓶盖、滴管） 要放在高处，使用时仍要过火
• 消毒灭菌
• 消毒：是指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。通常 方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂。
• 灭菌：杀灭或除去特定环境或物品中一切微生物的过程。目前标准规 过程必须使灭菌物品污染的微生物存活率减少到10-6及以下。
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消毒剂种类
• 依据化学成分主要分为9种 • 醛类消毒剂 • 杂环类消毒剂 • 含氯消毒剂 • 过氧化物类消毒剂 • 含碘消毒剂 • 季铵盐类消毒剂 • 酚类消毒剂 • 胍类消毒剂 • 醇类消毒剂 • 重金属类消毒剂 • 生物类消毒剂