临床基因扩增检验质量保证课件
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临床基因扩增检验的质量保证
实施室内质控措施，确保检验结果的准确性和可 靠性。
室间质评
参与室间质评活动，提高检验结果的互认性和可 比性。
质控数据管理
建立质控数据管理系统，对质控数据进行收集、 分析、反馈和改进。
04
质量保证的实施策略ຫໍສະໝຸດ 建立质量管理体系制定质量方针和目标
明确质量管理的方向和目标，为检验工作提供指导。
组织架构与职责分工
定期进行内部审核和外部认证
本机构定期进行内部审核，以确保质量管理体系 的有效运行。同时，积极参加外部认证，以获得 国际认可的质量保证体系。
其他机构的质量保证经验分享
强化人员培训和考核
其他机构强调在临床基因扩增检验中，应加强人员培训和考核，提高检验人员的专业水平 和操作技能。
建立多层次的质控体系
为确保检验结果的准确性，一些机构采取多层次的质控体系，包括室内质控和室间质评等 措施。
指导治疗
基因扩增检验的结果有助于医生制定 个性化的治疗方案，提高治疗效果。
质量保证的必要性
确保结果准确性
质量保证措施能够确保基因扩增 检验结果的准确性和可靠性，避
免误诊和漏诊。
提高患者安全
质量保证有助于降低因检验误差导 致的不必要的治疗或误诊的风险， 保障患者安全。
提升医疗机构声誉
实施质量保证措施能够提高医疗机 构在基因扩增检验方面的专业性和 可靠性，提升其声誉和患者信任度。
02
临床基因扩增检验的过程
样本采集与处理
样本采集
采集的样本应具有代表性，能够 真实反映患者情况。
样本处理
采集后的样本应尽快进行处理， 避免污染和降解。
核酸提取与纯化
核酸提取
从样本中提取出核酸是基因扩增检验 的前提。
室间质评
参与室间质评活动，提高检验结果的互认性和可 比性。
质控数据管理
建立质控数据管理系统，对质控数据进行收集、 分析、反馈和改进。
04
质量保证的实施策略ຫໍສະໝຸດ 建立质量管理体系制定质量方针和目标
明确质量管理的方向和目标，为检验工作提供指导。
组织架构与职责分工
定期进行内部审核和外部认证
本机构定期进行内部审核，以确保质量管理体系 的有效运行。同时，积极参加外部认证，以获得 国际认可的质量保证体系。
其他机构的质量保证经验分享
强化人员培训和考核
其他机构强调在临床基因扩增检验中，应加强人员培训和考核，提高检验人员的专业水平 和操作技能。
建立多层次的质控体系
为确保检验结果的准确性，一些机构采取多层次的质控体系，包括室内质控和室间质评等 措施。
指导治疗
基因扩增检验的结果有助于医生制定 个性化的治疗方案，提高治疗效果。
质量保证的必要性
确保结果准确性
质量保证措施能够确保基因扩增 检验结果的准确性和可靠性，避
免误诊和漏诊。
提高患者安全
质量保证有助于降低因检验误差导 致的不必要的治疗或误诊的风险， 保障患者安全。
提升医疗机构声誉
实施质量保证措施能够提高医疗机 构在基因扩增检验方面的专业性和 可靠性，提升其声誉和患者信任度。
02
临床基因扩增检验的过程
样本采集与处理
样本采集
采集的样本应具有代表性，能够 真实反映患者情况。
样本处理
采集后的样本应尽快进行处理， 避免污染和降解。
核酸提取与纯化
核酸提取
从样本中提取出核酸是基因扩增检验 的前提。
临床基因扩增实验ppt课件
精选ppt课件
13
试剂管理制度
• 实验室应根据工作需要定期提交试剂申请单，做
到及时盘存清点。
• 所有试剂做到来源渠道正规，质量保证。 • 实验室应对试剂库存定期检查，不得用过期变质
的试剂。
• 试剂保存应严格按照规定存放，确保有效期内能
有效地使用，杜绝浪费。
• 试剂外借一律须经实验室负责人同意，剧毒试剂
精选ppt课件
16
第三节：临床基因扩增实验室 操作指导书（SOP）
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17
• 各种仪器设备的标准操作维护程序
（PCR扩增仪、离心机、干式恒温器、生物安全柜、移液器、 冰箱、可移动紫外线消毒车等。）
• 各种仪器设备标准校准程序 • （温度计、移液器、PCR扩增仪等） • PCR标本唯一标识编号规则（120525B05） • 临床标本的采集及处理的标准操作程序 • 各种病原体扩增荧光检测标准操作程序 • 室内质量控制、室间质评标准操作程序
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24
空白管对照的种类
• 反应液空白管对照 • 试剂空白管（在整个实验过程中开口放置
于核酸提取的操作台面区域内30—60分钟， 然后进行扩增在反应液空白管为阴性的情 况下如果出现阳性提示可能出现实验室污 染。）
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25
扩增产物分析
• 通过标准曲线对未知模板进行定量分析 • 1。根据试剂盒的要求先确定基本的基线和域值。 • 2.初步分析未知模板的定量结果，根据当时曲线
• 人员的培训 • 规范操作
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21
分析中的质量控制
• 核酸提取 • 1.标本制备最好在生物安全柜内进行，可防止标本气溶胶
的扩散。
• 2.在实验操作过程中要经常更换手套，因为手套的污染很
临床基因扩增检验的质量保证PPT97
•35
扩增仪孔间温度的重复性和均一性 的检测方法
一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示 记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统， 当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反 应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反 应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的 PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔 不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动 热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内 温度监测至少要有一个扩增周期。
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释 出的原理
核酸的分离纯化 靶核酸提取的质量 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和
干扰物质 核酸样本制备及扩增检测的质控 产物检测的质控
•45
一般核酸提取试剂促使靶核酸 从细胞内释出的原理
靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离 及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测 定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌 、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述 细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。
□有 □有 □有 □有 □有
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □紫外照射
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁
□遵循单一工作流向
•38 □紫外照射
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质检 定量测定的精密度是测定组成步骤的
变异和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c 等（例如试剂准备、标本采集、核酸 提取、扩增和产物检测等）的标准差 ；
临床基因扩增检验的质 量保证PPT97
2020年5月24日星期日
定义
质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或 服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有
扩增仪孔间温度的重复性和均一性 的检测方法
一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示 记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统， 当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。
具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反 应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反 应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的 PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔 不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动 热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内 温度监测至少要有一个扩增周期。
一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞内释 出的原理
核酸的分离纯化 靶核酸提取的质量 临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和
干扰物质 核酸样本制备及扩增检测的质控 产物检测的质控
•45
一般核酸提取试剂促使靶核酸 从细胞内释出的原理
靶核酸可以与宿主细胞整合，核内游离 及胞浆内各种构形存在于细胞内，如测 定的是病原微生物,则靶核酸存在于细菌 、病毒、原虫或真菌细胞内，如果上述 细胞破裂,则靶核酸亦可存在于细胞外。
□有 □有 □有 □有 □有
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □紫外照射
□使用后用10%次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁
□遵循单一工作流向
•38 □紫外照射
理想的试剂和操作方法
试剂盒的质检 定量测定的精密度是测定组成步骤的
变异和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步骤a、b、c 等（例如试剂准备、标本采集、核酸 提取、扩增和产物检测等）的标准差 ；
临床基因扩增检验的质 量保证PPT97
2020年5月24日星期日
定义
质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或 服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有
临床基因扩增检验实验室质量管理和标准化：问题及思考PPT参考课件
13实验室“质量监控指标”？
分析前：标本差错率、标本不合格率（凝块、 溶血、容器破损、标本量不够、超出允许时间 等）……（可从自查、投诉等得到信息）
分析中：室内质控（真失控率、超出2SD频 率）、检测阳性率、假阳性率、阳性结果连续 出现数、假阴性率、结果差错率、检测失败率、 仪器故障频率、标本的日检测量、仪器日和定 期维护的执行情况等等…… 。
36
全面质量管理的工作循环:PDCA
4个阶段，8个步骤
第一阶段（Plan）有4个步骤： 分析并找出问题；找出问题产生的原因；确定最主 要原因；制定改进措施计划。
第二阶段（Do）有1个步骤：执行计划 第三阶段（Check）有1个步骤：检查计划执行情况。 第四阶段（Action）有2个步骤：总结、制定标准
（修改质量文件），以巩固提高；发现新出现的问 题，转入下一PDCA循环。
37
37
PDCA的特点
小环合成大环 不断循环，阶梯式上升 “A”是改进的动力之源
AP
A PC D CD
38
38
一个临床PCR实验室对全年 室内质控结果的分析举例
39
40
41
这次失控 反映的是 实验室的 什么问题？
分析后：报告及时率、报告差错率、报告遗失 率、报告召回率、医生和患者有效投诉率、纠 纷发生率等…… 。
14
实验室的“质量追求”？
15
设置“质量目标”的意义？
目标: 是个人、部门或整个组织所期望的成果
（标本、数据）差错率<?（1.0）% 仪器故障频率<?（2次）/年 报告及时率>?（95）％？ 室内质控真失控率<?（0.5）% 有效投诉率<?（1.0）/每百个报告 ……
分析前：标本差错率、标本不合格率（凝块、 溶血、容器破损、标本量不够、超出允许时间 等）……（可从自查、投诉等得到信息）
分析中：室内质控（真失控率、超出2SD频 率）、检测阳性率、假阳性率、阳性结果连续 出现数、假阴性率、结果差错率、检测失败率、 仪器故障频率、标本的日检测量、仪器日和定 期维护的执行情况等等…… 。
36
全面质量管理的工作循环:PDCA
4个阶段，8个步骤
第一阶段（Plan）有4个步骤： 分析并找出问题；找出问题产生的原因；确定最主 要原因；制定改进措施计划。
第二阶段（Do）有1个步骤：执行计划 第三阶段（Check）有1个步骤：检查计划执行情况。 第四阶段（Action）有2个步骤：总结、制定标准
（修改质量文件），以巩固提高；发现新出现的问 题，转入下一PDCA循环。
37
37
PDCA的特点
小环合成大环 不断循环，阶梯式上升 “A”是改进的动力之源
AP
A PC D CD
38
38
一个临床PCR实验室对全年 室内质控结果的分析举例
39
40
41
这次失控 反映的是 实验室的 什么问题？
分析后：报告及时率、报告差错率、报告遗失 率、报告召回率、医生和患者有效投诉率、纠 纷发生率等…… 。
14
实验室的“质量追求”？
15
设置“质量目标”的意义？
目标: 是个人、部门或整个组织所期望的成果
（标本、数据）差错率<?（1.0）% 仪器故障频率<?（2次）/年 报告及时率>?（95）％？ 室内质控真失控率<?（0.5）% 有效投诉率<?（1.0）/每百个报告 ……
临床基因扩增检验的质量保证培训课件
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定义
正态分布(Gaussian distribution) 当 一质控物用同一方法在不同的时间重 复多次测定，当测定数据足够多时， 如以横轴表示测定值，纵轴表示在大 量测定中相应测定值的个数，则可得 到一个两头低，中间高，中为所有测 定值的均值，左右对称的“钟形”曲 线，亦即正态分布，又称高斯分布。
定
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义
室 间 质 量 评 价 （ External Quality Assessment, EQA） 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，
由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价 实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之 间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法 的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的
均值（Mean） 标准差（Standard deviation, SD或s ) 变异系数（Coefficient of variation, CV）
定
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义
准确度 (Accuracy) 待测物的测定值与其 真值的一致性程度。准确度不能直接以数值表 示，通常以不准确度来间接衡量。对一分析物 重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值 之间的差异亦即偏差即为测定的不准确度。
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标本的类型和采集量
标本的类型: 血清(浆)、分泌物、痰、粪便、尿和 脑脊液等。
标本的采集量:应根据所测病原体而定。一 般来说，如果标本的量对病原体培养够用 的话，则其量亦足以用于核酸提取及其后 的扩增检测。
临床基因扩增检验质量保证2015新版讲课
CS 1.0S 2.7S
举例说明。
根据在不同时间10次（批）测定HBV DNA （含量为 3.0×104IU/ml）质控血清所得的均值及标准差为： X =2.5×104 ku =3.0×104 kl =2.0×104 S =0.5 × 104 （ ku=x + 1.0s ） （ Kl=x - 1.0s ） ）
三个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。
四个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。 七个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。 八个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 九个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 十个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。
5
61.Leabharlann ×1042.6×1044.23
4.41
19
20
1.5×104
3.6×104
4.18
4.56
7
8 9 10 11 12 13
3.2×104
1.9×104 2.6×104 1.6×104 2.9×104 2.2×104 1.9×104
4.51
4.28 4.41 4.20 4.46 4.34 4.28
（三）统计质控方法 1、基线测定： 最佳条件下的变异（OCV）：均值（x）、s和变异系 数（OCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。 常规条件下的变异（RCV）：均值（x）、s和变异系 数（RCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。
当OCV＜ RCV＜ 2OCV时，RCV可接受，否则，就需要 对常规条件下的操作水平采取措施予以改进。 在进行基线测定时，既可使用质控样本扩增后的IU/ml 来进行统计计算，也可用其对数值进行。
举例说明。
根据在不同时间10次（批）测定HBV DNA （含量为 3.0×104IU/ml）质控血清所得的均值及标准差为： X =2.5×104 ku =3.0×104 kl =2.0×104 S =0.5 × 104 （ ku=x + 1.0s ） （ Kl=x - 1.0s ） ）
三个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。
四个连续的质控测定值同时超出 x+1s或 x-1s控制限。 七个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。 八个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 九个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。 十个连续的质控测定值同时处于均值（ x ）的同一侧。
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61.Leabharlann ×1042.6×1044.23
4.41
19
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1.5×104
3.6×104
4.18
4.56
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8 9 10 11 12 13
3.2×104
1.9×104 2.6×104 1.6×104 2.9×104 2.2×104 1.9×104
4.51
4.28 4.41 4.20 4.46 4.34 4.28
（三）统计质控方法 1、基线测定： 最佳条件下的变异（OCV）：均值（x）、s和变异系 数（OCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。 常规条件下的变异（RCV）：均值（x）、s和变异系 数（RCV）。所有测定数据不管其是否超出3s，均应用于 上述统计计算。
当OCV＜ RCV＜ 2OCV时，RCV可接受，否则，就需要 对常规条件下的操作水平采取措施予以改进。 在进行基线测定时，既可使用质控样本扩增后的IU/ml 来进行统计计算，也可用其对数值进行。
临床基因扩增检验的质量保证
核酸提取及扩增有效性的质控
已知弱阳性质控样本（基质与待测标本相 同）：至少带1份，其最后的检测结果，应 是核酸提取和扩增检测的有效性的综合反 映。
已知阴性质控样本（基质与待测标本相 同）：至少带1份，扩增测定的结果可以判 断核酸提取过程中是否发生污染。
统计学质量控制
理想的室内质控样本的条件 测定中质控样本的设置、数量
一般均使用去垢剂(如Triton-100)裂解细 胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消 化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核酸 从细胞内释放出来。
核酸的分离纯化
核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂 类等干扰核酸扩增的物质去除。
经典方法 硅吸附法 对于商品核酸提取试剂盒，临床实
验室在使用前，必须对其核酸提取 纯度和效率进行评价。
标本的采集量:应根据所测病原体而定。一 般来说，如果标本的量对病原体培养够用 的话，则其量亦足以用于核酸提取及其后 的扩增检测。
对于定量测定来说，对标本的收集要求更 为精确。
采样质量的评价
血清(浆)标本:溶血、脂血等；
分泌物、痰：评价内容包括细胞组成， 所需类型细胞的数量和核酸总量。 评价方法：包括肉眼观察,显微镜下观 察和化学分析等。
实验室应根据待测靶核酸的特性，对 各种临床样本的运送条件作出相应的 规定。
临床基因扩增检验的室内质量控制
测定前的质量控制 核酸样本的制备及其质量控制 统计学质量控制 质量控制的评价
测定前质量控制
实验室设施、仪器设备及管理 理想的试剂和操作方法 人员培训
实验室设施、仪器设备及管理
定义
批 (Run) 在相同条件下所获得的一 组测定。
均值（Mean） 标准差（Standard deviation, SD或s） 变异系数（Coefficient of variation,
临床基因扩增检验试验室的设置质量管理71页PPT
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
临床基因扩增检验试验室的设置质量管 理
61、辍学如磨刀之石，不见其损，日 有所亏 。 62、奇文共欣赞，疑义相与析。
63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠 深巷中 ，鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几，倏如流电惊。 65、少无适俗韵，性本爱丘山。
谢谢
临床基因扩增检验试验室的设置质量管 理
61、辍学如磨刀之石，不见其损，日 有所亏 。 62、奇文共欣赞，疑义相与析。
63、暧暧远人村，依依墟里烟，狗吠 深巷中 ，鸡鸣 桑树颠 。 64、一生复能几，倏如流电惊。 65、少无适俗韵，性本爱丘山。
谢谢
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临床基因扩增检验质量保证
正态分布 的基本统 计学含义 可用均数 （X）、标 准差（s） 和概率来 说明。
临床基因扩增检验质量保证
临床基因扩增检验实验室 常规测定步骤
• 标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。 • 实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸
扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。 • 报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。
临床基因扩增检验质量保证
临床基因扩增检验的室内质量控制
•测定前的质量控制 •核酸样本的制备及其质量控制 •统计学质量控制 •质量控制的评价
临床基因扩增检验质量保证
测定前质量控制
•实验室设施、仪器设备及管理 •理想的试剂和操作方法 •人员培训
临床基因扩增检验质量保证
实验室设施、仪器设备及管理
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的空间、良好的照明和空调设备 ； • 实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。加样器的校准？带 滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循 环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪 和洗板机？
决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许 可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实 验室能力验证（Proficiency testing, PT）。在以前的文献中， EQA常描述室间质量控制。
临床基因扩增检验质量保证
批 (Run)
• 在相同条件下所获得的一组测定。
临床基因扩增检验质量保证
采样质量的评价
• 血清(浆)标本:溶血、脂血等；
• 分泌物、痰：评价内容包括细胞组成，所需类型细胞 的数量和核酸总量。 评价方法：包括肉眼观察,显微镜下观察和化学分析 等。
临床基因扩增检验质量保证
采样及运输容器
• 标本的采集材料如棉签应为一次性使 用； • 采样及运输容器应为密闭的一次性无 菌装置； • 采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试 剂材料不应对核酸扩增及检测过程造 成干扰。
临床基因扩增检验质量保证
室间质量评价（External Quality Assessment, EQA）
• 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位 机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果， 发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。 这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来
临床基因扩增检验质量保证
质量保证、室内质控和室间质评之间的关系
临床基因扩增检验质量保证
临床标本收集、运送、保存 及其质量控制
• 标本收集 • 标本保存 • 标本运送
临床基因扩增ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验质量保证
标本收集
• 标本采集时间对扩增检测结果的影响 • 标本采集部位的准备 • 标本的类型和采集量 • 采样质量的评价 • 采样及运输容器 • 标本采集中的防污染
• 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连 续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和 控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作 中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结 果是否可靠、可否发出报告的一项工作。
• 可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的： 监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批 测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定 的即时性评价。
临床基因扩增检验质量保证
标本保存
• 临床体液标本长期保存应在-70℃下。 • 如为提取核酸后用于DNA扩增分析的样
本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.5～8.0)缓冲液中4 ℃下保存。 • 用于RNA扩增分析的样本，则应于上述 缓冲液中-80℃或液氮下保存。 • 核酸的乙醇沉淀物则可于-20℃下保存。
临床基因扩增检验质量保证
标本运送
• 样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。 • 样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入
GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定的EDTA抗凝血 等,则可在室温下运送或邮寄。 • 实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的 运送条件作出相应的规定。
临床基因扩增检验的 质量保证
卫生部临床检验中心 李金明
临床基因扩增检验质量保证
质量保证 (Quality Assurance,QA)
•为一产品或服务满足特定质量
要求提供充分可信性所必要的 有计划的和系统的措施。
临床基因扩增检验质量保证
室内质量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念
临床基因扩增检验质量保证
标本采集时间对扩增检测结果 的影响
• 在疾病发展过程中，标本采集过早或过晚 都可能会给出假阴性结果。
临床基因扩增检验质量保证
标本采集部位的准备
• 血液标本采集 • 分泌物标本:采集部位的清洁消毒 可去掉污染的微生物或其它杂物, 但应适度,过度清洁消毒有可能会 去掉或破坏靶微生物,故标本采集 部位的准备应由训练有素的人员进 行。
临床基因扩增检验质量保证
标本采集中的防污染
• 采集中要特别注意污染，防止混入 操作者的头发、表皮细胞、痰液等； • 如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌， 以使可能存在的RNase失活。
临床基因扩增检验质量保证
标本保存
•靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而 迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增 测定的有效性极为重要。 •使用GITC作为稳定剂保存标本，标本可 在室温下稳定约7天。
临床基因扩增检验质量保证
理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区
定义
• 正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一 方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多 时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相 应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中 为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦 即正态分布，又称高斯分布。
临床基因扩增检验质量保证
标本的类型和采集量
• 标本的类型: 血清(浆)、分泌物、痰、粪便、尿和 脑脊液等。 • 标本的采集量:应根据所测病原体而定。一般来说， 如果标本的量对病原体培养够用的话，则其量亦足 以用于核酸提取及其后的扩增检测。 • 对于定量测定来说，对标本的收集要求更为精确。
临床基因扩增检验质量保证
正态分布 的基本统 计学含义 可用均数 （X）、标 准差（s） 和概率来 说明。
临床基因扩增检验质量保证
临床基因扩增检验实验室 常规测定步骤
• 标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。 • 实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、核酸
扩增、产物检测、测定的有效性和临床诊疗价值。 • 报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。
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临床基因扩增检验的室内质量控制
•测定前的质量控制 •核酸样本的制备及其质量控制 •统计学质量控制 •质量控制的评价
临床基因扩增检验质量保证
测定前质量控制
•实验室设施、仪器设备及管理 •理想的试剂和操作方法 •人员培训
临床基因扩增检验质量保证
实验室设施、仪器设备及管理
• 临床基因扩增检验实验室应有充分合理 的空间、良好的照明和空调设备 ； • 实验室仪器设备应保养良好，实验用品 要达到相应的要求。加样器的校准？带 滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循 环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪 和洗板机？
决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA用来为执业许 可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实 验室能力验证（Proficiency testing, PT）。在以前的文献中， EQA常描述室间质量控制。
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批 (Run)
• 在相同条件下所获得的一组测定。
临床基因扩增检验质量保证
采样质量的评价
• 血清(浆)标本:溶血、脂血等；
• 分泌物、痰：评价内容包括细胞组成，所需类型细胞 的数量和核酸总量。 评价方法：包括肉眼观察,显微镜下观察和化学分析 等。
临床基因扩增检验质量保证
采样及运输容器
• 标本的采集材料如棉签应为一次性使 用； • 采样及运输容器应为密闭的一次性无 菌装置； • 采样所用的防腐剂、抗凝剂及相关试 剂材料不应对核酸扩增及检测过程造 成干扰。
临床基因扩增检验质量保证
室间质量评价（External Quality Assessment, EQA）
• 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位 机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果， 发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。 这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来
临床基因扩增检验质量保证
质量保证、室内质控和室间质评之间的关系
临床基因扩增检验质量保证
临床标本收集、运送、保存 及其质量控制
• 标本收集 • 标本保存 • 标本运送
临床基因扩增ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验质量保证
标本收集
• 标本采集时间对扩增检测结果的影响 • 标本采集部位的准备 • 标本的类型和采集量 • 采样质量的评价 • 采样及运输容器 • 标本采集中的防污染
• 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连 续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和 控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作 中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结 果是否可靠、可否发出报告的一项工作。
• 可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的： 监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批 测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定 的即时性评价。
临床基因扩增检验质量保证
标本保存
• 临床体液标本长期保存应在-70℃下。 • 如为提取核酸后用于DNA扩增分析的样
本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.5～8.0)缓冲液中4 ℃下保存。 • 用于RNA扩增分析的样本，则应于上述 缓冲液中-80℃或液氮下保存。 • 核酸的乙醇沉淀物则可于-20℃下保存。
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标本运送
• 样本一经采集，则应尽可能快的送至检测实验室。 • 样本中如加入了适当的稳定剂,如用于RNA测定加入
GITC的血清(浆)样本和用于DNA测定的EDTA抗凝血 等,则可在室温下运送或邮寄。 • 实验室应根据待测靶核酸的特性，对各种临床样本的 运送条件作出相应的规定。
临床基因扩增检验的 质量保证
卫生部临床检验中心 李金明
临床基因扩增检验质量保证
质量保证 (Quality Assurance,QA)
•为一产品或服务满足特定质量
要求提供充分可信性所必要的 有计划的和系统的措施。
临床基因扩增检验质量保证
室内质量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念
临床基因扩增检验质量保证
标本采集时间对扩增检测结果 的影响
• 在疾病发展过程中，标本采集过早或过晚 都可能会给出假阴性结果。
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标本采集部位的准备
• 血液标本采集 • 分泌物标本:采集部位的清洁消毒 可去掉污染的微生物或其它杂物, 但应适度,过度清洁消毒有可能会 去掉或破坏靶微生物,故标本采集 部位的准备应由训练有素的人员进 行。
临床基因扩增检验质量保证
标本采集中的防污染
• 采集中要特别注意污染，防止混入 操作者的头发、表皮细胞、痰液等； • 如使用玻璃器皿，必须经高压灭菌， 以使可能存在的RNase失活。
临床基因扩增检验质量保证
标本保存
•靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而 迅速降解，因此标本的保存对于核酸扩增 测定的有效性极为重要。 •使用GITC作为稳定剂保存标本，标本可 在室温下稳定约7天。
临床基因扩增检验质量保证
理想的核酸扩增实验室设计A
产物分析区
定义
• 正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一 方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多 时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相 应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中 为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦 即正态分布，又称高斯分布。
临床基因扩增检验质量保证
标本的类型和采集量
• 标本的类型: 血清(浆)、分泌物、痰、粪便、尿和 脑脊液等。 • 标本的采集量:应根据所测病原体而定。一般来说， 如果标本的量对病原体培养够用的话，则其量亦足 以用于核酸提取及其后的扩增检测。 • 对于定量测定来说，对标本的收集要求更为精确。
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