实验四_血凝和血凝抑制试验

号 孔
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11（ ） 12（ ） C） （ C） （ 50
弃50µl
盐 （ 生理 水（ ） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 水 µl） 病毒 液（ ） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 悬液 µl） （ 1% 细 （ ） 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 红 胞 µl）
1
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12
判定结果： 判定结果：能将病毒凝集红细胞的作用完全抑制的血清 的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价， 的最高稀释倍数为该血清的红细胞凝集抑制效价，以2 的指数表示。（上图抗体结果从上至下依次为： 的指数表示。（上图抗体结果从上至下依次为： 。（上图抗体结果从上至下依次为 8/7/8/9/8/7/7/6 ）
操作步骤
1. 在血凝板第一排的1-12孔加入50μl生理盐水。 2. 在第1孔中加入50μl病毒，混匀后吸50μl到第2 孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50μl； 最后两孔（11、12）为红细胞对照。 3. 将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加 入50μl。 4. 手工震荡，37℃静置30min (室温40分钟 )后观 察结果
HA试验 试验
HI试验 试验
50 / 50
/
50
结果判定
A B C D
血凝价
A:26
B:25
C:22
D:27
血凝价: 血凝价: 1:256
50% 以 50% 的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作 为该病毒液的红细胞凝聚效价， 一个血凝单位。 为该病毒液Hale Waihona Puke Baidu红细胞凝聚效价，即一个血凝单位。
三、血凝抑制试验 （HemagglutinationInhibition, HI）
HA试验的原理示意图 HA试验的原理示意图
用途：①确定病毒的含量； ②计算病毒的血凝价，为血凝抑制 试验做准备 血凝价：能使血球产生50%凝集的病毒最 高稀释度 血凝单位
试验材料
• 鸡新城疫病毒 • 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗 凝，用生理盐水洗涤3-5次，将血浆、白 细胞等充分洗去，用生理盐水配成1%红细 胞悬液备用 • 灭菌0.85%生理盐水 • 96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌 塑料吸头
实验四
血凝和血凝抑制试验
一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原 理和操作方法，能够正确判定试验 结果并对结果进行分析。
二、血凝试验
（ Hemagglutination, HA）
血凝现象：有些病毒可凝集某些动物（如 鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞(RBC) 原理：血凝素与RBC表面相应受体结合， 引起RBC凝集，用以测定病毒的含量 用以测定病毒的含量
原理：抗体与血凝素结合，封闭血凝素， 使之不能与红细胞结合
HI试验的原理图 HI试验的原理图
用途: ①用于检测血清中抗体含量 用于检测血清中抗体含量； 用于检测血清中抗体含量 ②鉴定病毒的型、亚型； 血凝抑制价：能完全抑制血球凝集的最高血 清稀释度即为该血清的血凝抑制价
试验材料
• 4个血凝单位鸡新城疫病毒 • 鸡红细胞：同上 • 被检血清(采自被检鸡的血清) • 灭菌0.85%生理盐水 • 96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌 塑料吸头
操作步骤
1. 在血凝板的1-12孔加入25μl生理盐水，最后2孔加 50μl。 2. 第1孔加入待检血清25μl，混匀后吸25μl至第2孔，倍 比稀释直至第10孔，混匀后弃25μl。 3. 在1-10孔，每孔加稀释好的25μl 4个血凝单位的病毒 悬液，室温静置30分钟 4. 将红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入50μl 5. 手工震荡1min，在37℃静置30min(室温40分钟)后观察 结果