总膳食纤维国标测定方法 符合 AC等

总膳食纤维测定的介绍

1、在α-淀粉酶的作用下，PH为6的磷酸盐缓冲溶液，95—100度下加热15分

钟。

2、用蛋白酶在PH为7.5时60度培养30分钟。

3、用淀粉葡(萄)糖苷酶在PH为4.0---4.6下60度培养30分钟。

4、4体积的95%的乙醇沉淀。

5、过滤。

6、用78%和95%的乙醇和丙酮清洗沉淀物。

7、烘干称重。

8、干样可以拿去做凯氏定氮，也可以在525度的马弗炉里灰份5个小时，然后

去称重。

不溶的膳食纤维的定义为进行烘干前用乙醇进行清洗并用温水洗涤后残留物。总膳食纤维（TDF）—不溶膳食纤维= 可溶膳食纤维（SDF）

标准酶法测定食品和饲料中的总膳食纤维量

1、研磨分级样品

2、在105度的烘箱烘干并恒重，在干燥箱中冷却到室温。

3、如果样品脂肪含量高于10%，需要用石油醚进行脱脂，在最终结果中再进行

校正。

4、称出0.5—1克的样品，并转移到400毫升的烧杯中。

5、用α-淀粉酶在50毫升的PH为6的磷酸盐缓冲溶液中培养15分钟，培养温

度为95—100度，温度可以用温度计控制。

6、冷却到室温，并用0.275 N 浓度的氢氧化钠溶液调节PH到7.5。

7、将烧杯和样品一起转移到磁力搅拌培养器中（GDE）。

8、在搅拌的情况下，加入蛋白酶在60度的情况下培养30分钟。

9、冷却到室温，用0.325的盐酸调节PH值为4.0—4.6。

10、在搅拌的情况下，加淀粉葡(萄)糖苷酶，在60度时培养30分钟。

11、通过加4体积的95%的乙醇沉淀可溶性膳食纤维，并且在室温下沉淀大

约1个小时。

12、称量已经添加了0.5克的硅藻土(作为助滤剂)玻璃坩埚.

13、将坩埚放在CSF6 (或者FIWE6)上,倒入上述操作的沉淀物,并用

V ACUUM进行吸液排空,用78%的乙醇溶液进行洗涤转移沉淀物。

14、用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤玻璃坩埚中的沉淀物两次，再用10毫

升95%的乙醇溶液洗涤两次，10毫升的丙酮溶液洗涤两次并排除废液。

15、在105度的烘箱中烘一夜，在干燥器中冷却。

16、计算结果，要减去坩埚的重量Q和硅藻土的重量。

17、减去不消化的蛋白和灰份含量来矫正结果。

总膳食纤维的测定（TDF）

方法原理：

总膳食纤维的测定方法是结合酶法和重量差量法来测定的。相同的（四份重复的）脱脂的干燥食品样，用α-淀粉酶在稳定加热的情况下进行胶化，然后用淀粉葡(萄)糖苷酶（葡萄糖淀粉酶）消化，去掉淀粉，用蛋白酶去掉可消化的蛋白。可溶性的膳食纤维是在乙醇溶液中的沉淀物。残留物过滤，通过乙醇、丙酮溶液洗涤，再烘干称重。其中一个样品用来化验不能消化的蛋白，另外的一个进行灰份。总膳食纤维是消化后的残留物的重量减去不能消化的蛋白和灰份。

试剂

1、石油醚，试剂级的。

2、体积比为95%的乙醇，分析级的。

3、体积比为78%的乙醇。将207毫升的蒸馏水放入含有1升的95%的乙醇的量

筒中，摇匀混合。

4、丙酮，试剂级的。

5、磷酸盐缓冲液，0.08M,PH为6.0。

6、α-淀粉酶，热稳定，可溶解的。

7、蛋白酶溶液。溶解50毫克到1毫升的磷酸盐缓冲溶液，会加强活力。

8、淀粉葡(萄)糖苷酶（葡萄糖淀粉酶）溶液。

9、氢氧化钠溶液，1.0 N,试剂级的。

10、氢氧化钠溶液，0.275 N。

11、盐酸溶液, 1.0 N,试剂级的。

12、盐酸溶液,0.325N。

13、硅藻土，酸性洗涤的。

注：A、使用蒸馏水或者去离子水进行溶解。

B、此方法所需酶的量可以从不同的公司来获得。如NOVO INDUSTRI，SIGMA CHEMICAL CO,. MERCK，等。

C、酶的纯度应该由生产者来确定。如果不知道酶的活性，必要时可以参考现有的资料。酶的稳定性也要可以控制，所进行整个过程使用的物质可以列为下表（SIGMA CHEMICAL CO）：

原料实验活性样品重量克希望的重复性胶质果胶酶 0.1 95---100 半乳聚糖半纤维素酶 0.1 95---100 酪蛋白蛋白酶 0.3 0—2

β-葡聚糖葡聚糖酶 0.1 95—100 淀粉(普通的) 淀粉酶 1.0 0—2

淀粉(小麦的) 淀粉酶 1.0 0—1

样品处理

从大量的原料中提取典型的样品，在105度的烘箱（或者70度的真空烘箱中）中干燥一个晚上，在干燥箱中冷却。干燥状态下研磨到0.3—0.5毫米大小。如果样品不能够加热，冷冻干燥。如果样品脂肪含量超过10%，则需要在石油醚中降

脂3次，25毫克/升的样品。注意脂肪的含量要校正最后的结果。

膳食纤维的测定

空白实验应该在整个实验过程中进行，最后要从结果中扣除以去掉试剂等因素对结果的影响。将1克样品，称重精度到0.1毫克,在400毫升的烧杯中,混合到50毫升PH为6的磷酸缓冲溶液中,加磁力搅拌子,加100微生的热稳定的α-淀粉酶溶液,彻底混合,盖上铝箔。放到100度的水浴中，让样品温度保持在95—100度保持15分钟，控制好温度，然后从水浴中移出，冷却到室温。

用10毫升的0.275N 的氢氧化钠溶液调节PH到7.5,向GDE中添加冷水将温度降到60度,加100微升的蛋白酶溶液(50毫克放在1毫升磷酸盐缓冲液中).烧杯盖上滤箔连续搅拌的情况下在60度时培养30分钟。冷却到室温，用0.325N 的盐酸调节PH到4.0—4.6,用PH计控制PH值。

添加300毫升的淀粉葡(萄)糖苷酶（葡萄糖淀粉酶）溶液，盖上铝箔在连续搅拌的情况下60度水浴培养30分钟。拿掉搅拌子，280毫升的95%的乙醇预热60度，在室温下沉降60分钟。完全干净的玻璃坩埚，放在525度的马弗炉烘干1小时，冷却到室温，用水清洗，在空气中晾干。

添加0.5克的硅藻土,玻璃坩埚在130度的烘箱中恒重一个小时,精度0.1毫克。同硅藻土一起称重并放在CSF6 （FIWE6）的过滤器中，利用真空。用漏斗转移酶消解完的沉淀物，滤出液用导管进行收集。

用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤沉淀物3次，10毫升的95%的乙醇溶液洗涤2次，10毫升的丙酮溶液洗涤2次。如果胶状的滤膜使的过滤能力下降，保持液体状态，用细微的空气来吹表面（仪器上操作），整个清洗过程需要半个小时。在105度的烘箱中（70度的真空箱中）将玻璃坩埚连同沉淀物和硅藻土一起烘干一个晚上，冷却到室温，称重精度为0.1毫克。沉淀物的重量是最终的重量减掉坩埚的重量和硅藻土的重量（需要的重复样）。

其中一个沉淀物的样用凯氏方法分析不能消化的蛋白含量（N*6.25）,第二个沉淀物的样在525度的马弗炉中烘干5个小时,在干燥箱中冷却称重(精度0.1毫克),灰份的重量是前步的总重量减掉坩埚和硅藻土的重量后剩下的重量。

计算

%空白中的蛋白百分含量（SB）=空白中的蛋白含量/空白的残留量*100

%空白中灰分含量（CB）=空白中的灰分量/空白的残留量*100

空白量=空白中的残留物*[1-（PB+CB）/100]

%样品的蛋白含量（SP）=样品中的蛋白量/样品残留物量*100

%样品灰分含量（SA）=样品中灰分量/样品残留物量*100

%TDF={残留物量-[（PC+CC）*残留物量/100]-空白量}/样品重量*100

简化为：

%TDF=[残留量*（100-PC-CC）-空白量]/样品重量

注：这里的残留量是指重复空白或者样品的所获得的平均残留量这里的样品量是指两个样品的平均重量。