生物制药工艺学实验

器，以免酶失活而影响产品的得率及质量。
（ 2）操作的全过程要在低温下进行（
10 °以下），防止原料
变质和酶失活。
（ 3）第三步中加入溶菌酶晶种的具体操作是将溶菌酶晶体均
匀地悬浮于少量的值为 10.8，浓度为 5%氯化钠溶液中，取几滴
加入到调好的值和氯化钠浓度的蛋清液内，再置低温处结晶。
实验三 纤维素酶活力的测定 一、实验目的 1. 了解纤维素酶的种类和测定原理，以及纤维素酶的作用特性； 2. 掌握 3,5-二硝基水杨酸（）法测定纤维素酶活力的原理和方法。
优良的天然防腐剂， 可用于食品的防腐保鲜。 尤其重要的是近年 来溶菌酶已成为基因工程及细胞工程必不可少的工具酶。 四、实验步骤
（1）收集鸡蛋清将新鲜鸡蛋两端各敲一个小洞， 使蛋清流出 （最好是新生的鸡蛋、值不得低于 8，否则不能使用），按其体 积的两倍量加入水，轻轻搅拌 5，使蛋清溶液的稠度均匀，注意 在搅拌过程中不能起泡，搅拌不宜过快、搅拌棒应光滑等，以防 蛋白质变性而影响溶菌酶产品的得率及质量， 最后用双层细纱布 滤除蛋清溶液中的脐带块及碎蛋壳等。
二、实验原理 纤维素酶是一种多组分酶， 包括 4 种组分： 内切 β-1,4-葡聚糖
酶、外切 β-1,4-葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和纤维二糖酶（又称 β-葡聚糖苷酶）。在各种酶组分的协同作用下，能降解纤维素， 使之变成纤维寡糖、 纤维二糖和葡萄糖等还原糖。 这些还原糖能 将碱性条件下的 3,5-二硝基水杨酸（）还原，生成红棕色的氨基 化合物，在 540 波长处有最大光吸收， 在一定范围内还原糖的量 与反应液的颜色强度呈比例关系。 利用比色法测定其还原糖的量 就可测定纤维素酶的活力。
溶菌酶晶种， 待结晶完全后再倾去上清液， 用布氏漏斗过滤可得
溶菌酶结晶，如纯度不够，可重复操作提纯，直至达到所需要的
纯度为止，结晶于 30~40 ° : 烘干后即得溶菌酶产品。
（5）包装存贮 产品应装于玻璃或陶瓷容器中， 置于阴冷处
保存，以免溶菌酶受热后失去活性。
注意事项
（1）整个过程只能在玻璃或陶瓷容器中进行， 不可用金属容
三、实验原理
健胃消食片为内科伤食类非处方药品，主治健胃消食，用于
脾胃虚弱，消化不来自百度文库，脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食，暖
腐酸臭，脘腹胀痛。健胃消食片的配方如下，太子参 228.6g，陈
皮 22.9g，山药 171.4g，麦芽（炒） 171.4g，山楂 114.3g，蔗糖糊
精适量，值得片剂为淡棕黄色的片或薄薄膜片， 气略香，味微甜，
两次，将上清液合并，减压浓缩至浸膏，将所得浸膏放入烘 箱中 80 度干燥。 4. 将蔗糖粉糊精和干燥后的粉末以 3：1：1 的比例混合制成颗粒 软材，将软材放入烘箱中逐渐升温干燥。 5. 干燥后的软材加入 1％硬脂酸镁放入压片机中压片。
实验二 溶菌酶结晶的制备 一、实验目的 1. 掌握盐析法提取蛋白质的原理和过程； 2. 学会溶菌酶的结晶和精制方法。 二、实验材料与仪器
新鲜鸡蛋，氯化钠， 1 氢氧化钠溶液，醋酸缓冲液，烧杯， 玻璃棒，布氏漏斗，干燥箱。 三、实验原理
溶菌酶又称细胞壁质酶或 N —乙酰胞壁质聚糖水解酶，是一 种国内外很紧销的生化物质， 广泛应用于医学临床。 具有多种药 理作用，能抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等，有抗菌 的作用，常用于五官科多种粘膜炎症，皮肤带状疮疹等疾病。是
干燥过快结成硬壳而影响内部水分的蒸发。颗粒整粒后加入
1％
硬脂酸镁混合后压片。
四、实验步骤
1. 称取太子参 22.8g，陈皮 2.3g，山药 17.1g，山药 17.1g，麦芽 17.1g，山楂 11.4g
2. 太子参山药用粉碎机粉成细粉。 3. 将上述药材放入烧杯中， 加入 3 倍量的水， 煎煮半小时， 重复
（4）精制溶菌酶 将制得的粗结晶用值 4.6 的醋酸溶解， 然后
让酶液静置 2h，接着过滤除去不溶物，收集滤液并量出体积，
按 100 滤液加 5g 氯化钠的比例加入（加入方法与第二步加入氯
化钠的方法相同） 。然后用 1 的氢氧化钠溶液缓慢地将其值调节
到 10.8 后，低温下静置结晶。为加速结晶过程可向酶液中加入
生物制药工艺学实验指导
（ 12 个实验， 36 学时）
焦飞 生物技术教研室
实验一 健胃消食片配方及片剂的制备
一、实验目的
1. 掌握压片机压片的方法及影响片剂成型的主要因素；
2. 学会片剂处方的调配。
二、实验材料和仪器
太子参，陈皮，山药，麦芽（炒），山楂，蔗糖粉，糊精，硬脂
酸镁，粉碎机，干燥箱，制片机
（2）加入氯化钠 按每 100 蛋清溶液加入 2g.氯化钠的比例， 白蛋清溶液中慢慢加入氯化钠细粉， 边加边搅拌， 促使氯化钠细 粉及时溶解， 以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部， 否则会引 起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀。
（3） 粗制溶菌酶 加完氯化钠细粉后， 再用 1 的氢氧化钠 溶液小心地将上述蛋清溶液的值调节到 10.8。在用氢氧化钠溶液 调节蛋清溶液值时， 用胶头滴管将其逐渐滴入并不断搅拌以免局 部过碱而导致蛋白质的变性， 从而影响溶菌酶的得率和质量。 为 加速溶菌酶的结晶过程， 可再加入适量的溶菌酶结晶体作为晶种。 低温下静置数天，溶菌酶结晶将慢慢析出，于 72~96h 达到最高 产率。待结晶完全后，倾去上清液并用布氏漏斗滤出结晶，即可 得到粗制的溶菌酶晶体。
由不同底物测得的酶活力分别称为（滤纸糖酶活力）和 （羧甲基纤维素酶活力）。为了统一标准，目前通常用滤纸作为 纤维素酶作用的底物。
纤维素酶在一定温度和条件下， 将纤维素底物 (滤纸 )水解，释 放出还原糖。在碱性、 煮沸条件下， 3,5-二硝基水杨酸 (试剂 )与还 原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖 (以葡萄糖计 )含量成 正比。通过在 540 测其吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出 纤维素酶的滤纸酶活力。 滤纸酶活力 ()指 固体酶 (或 1 液体酶 )， 在(50 士 0.1) ℃ , 指定条件下(酸性纤维素酶 4.8，中性纤维素酶 6.0), 水解滤纸底物， 产生出相当于 l 葡萄糖的还原糖量， 为 1 个酶活 力单位，以 (或)表示。 三、实验器材和试剂
酸。制作方法：太子参半量与山药粉碎成细粉，其余陈皮三味药
及剩余的太子参置于烧杯，加 3 倍量水，煎煮 1 小时，滤过，合
并两次煎液，减压浓缩至浸膏，干燥。将蔗糖粉糊精和生药粉以
3： 1： 1 的混合粉与浸膏混合制成软材，软材的软硬应适当，以
“手握成团，轻压则散”为宜。采用挤出制粒的方法制成颗粒，
颗粒在 60-80 摄氏度干燥，干燥时应逐渐升温，以免因颗粒表面