沉淀蛋白质的常用方法
蛋白沉淀方法
蛋白沉淀方法蛋白沉淀是蛋白质分离与纯化的一种常用方法，通过加入化学物质使目标蛋白质与其它蛋白质或者杂质分离，并沉淀于溶液底部或者浮于溶液表面。
本文将从蛋白沉淀的原理、化学物质的选择、实验操作、蛋白沉淀后处理等方面进行介绍。
一、蛋白沉淀的原理蛋白质的沉淀是基于化学物质与蛋白质之间的物理或者化学相互作用，包括：1. 盐析沉淀在高浓度盐溶液中，蛋白质远离其同样带电的水分子，而形成大分子团聚，从而沉淀。
在酸性环境下，大多数蛋白质通过质子化而失去电荷，降低了疏水性，从而沉淀。
在碱性环境下，蛋白质通常解离出一个氨基酸残基的羧基，从而带有负电荷，易于被阳离子与之形成沉淀。
4. 有机溶剂沉淀如乙醇、丙酮、甲醇等，可与蛋白质形成复合物，使其聚合而沉淀。
以上几种原理可单独或结合使用，根据情况进行选择。
二、化学物质的选择常用的盐类有氯化铵、硫酸铵、硫酸钠等。
浓度通常在10-60%之间，具体浓度根据具体实验条件进行选择。
2. 酸类常用的酸包括二元酸、有机酸等。
浓度为0.1-1M之间，酸性度通常为pH 4-6。
3. 碱类常用的有机溶剂包括乙醇、丙酮、甲醇等。
浓度通常为50-90%之间，根据实验要求进行选择。
三、实验操作1. 样品制备待分离的蛋白质必须经过预处理，通常包括离心、裂解、过滤等步骤。
裂解方式可以使用生理盐水、水、甲醇等，使蛋白质从细胞中释放出来。
过滤可以使用滤纸、滤膜、分子筛等方式，去除杂质。
2. 化学物质的加入将选择好的化学物质加入样品中，此时需注意化学物质前后也要进行科学操作，如一些电解质类物质可能带有杂质，需要先进行过滤；有机溶剂可能会引起蛋白质的变性，需加入适量的缓冲液进行保护。
将混合物小心地混合均匀后，离心使混合物分层，此时目标蛋白沉在沉淀层，上清液中还有一些蛋白，需要将其过滤或沉淀以去除杂质。
4. 纯化将沉淀分解，得到的产物通过离心、层析等步骤进行纯化，最终得到目标蛋白。
沉淀后需要进行洗涤，以去除杂质，保证目标蛋白的纯度和酶效。
蛋白沉淀法
蛋白沉淀法蛋白沉淀法是一种常用的分离蛋白质的方法，其原理是利用化学反应使蛋白质沉淀至底部，从而分离出目标蛋白质。
本文将详细介绍蛋白沉淀法的原理、步骤、优缺点以及应用领域。
一、原理蛋白沉淀法的原理基于化学反应，常用的反应剂包括三氯醋酸（TCA）、硫酸铵（AS）、三硝基苯磺酸（TNBS）等。
其中，TCA法是最常用的方法之一。
TCA与蛋白质反应后，会形成一种不溶于水的复合物，从而使蛋白质沉淀至底部。
TCA法的反应方程式如下：TCA + 蛋白质→ TCA-蛋白复合物二、步骤蛋白沉淀法的步骤通常包括以下几个步骤：1. 样品制备：将待分离的样品加入适量的缓冲液中，使其pH值在7左右。
2. 加入反应剂：将反应剂加入样品中，通常加入的量为样品体积的1/10至1/5。
3. 沉淀：将反应液在4℃下静置30分钟至1小时，使蛋白质充分沉淀至底部。
4. 洗涤：用冷乙醇或冷醚洗涤沉淀，去除残余的反应剂和其他杂质。
5. 脱水：将沉淀放入干燥器中，用低温低压的方式将水分脱除。
6. 重溶：用适量的缓冲液将沉淀重溶，得到目标蛋白质。
三、优缺点1. 优点：蛋白沉淀法操作简单，成本低廉，适用于大规模分离蛋白质。
此外，该方法还可以去除大量的杂质和非蛋白质物质。
2. 缺点：蛋白沉淀法的选择性不够高，可能会将多种蛋白质沉淀至底部。
此外，该方法会对蛋白质的结构和功能产生一定的影响，使得蛋白质的活性降低。
四、应用领域蛋白沉淀法广泛应用于生物学、生化学、医学等领域。
其中，最常见的应用包括：1. 分离纯化蛋白质：蛋白沉淀法可以将目标蛋白质从复杂的混合物中分离出来，得到较为纯净的蛋白质样品。
2. 检测蛋白质含量：蛋白沉淀法可以用于检测样品中蛋白质的含量，并进行定量分析。
3. 蛋白质结构研究：蛋白沉淀法可以用于分离蛋白质的亚单位，从而研究蛋白质的结构和功能。
总之，蛋白沉淀法是一种常用的分离蛋白质的方法，其原理简单，操作方便，适用于大规模分离蛋白质。
但是，由于其选择性不够高，会对蛋白质的结构和功能产生一定的影响，因此在具体应用时需谨慎选择。
蛋白质沉淀方法及特点。
蛋白质沉淀方法及特点。
盐析沉淀蛋白质的原理是：降低了蛋白质的溶解度，从而会使得蛋白质凝聚，最终从
溶液中析出。
蛋白沉淀法其实就是实验室进行一种毒物分析的过程中而对生物的样品进行
预前处理的一种比较常见而且常用的方式。
盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。
中性盐是强电解质，溶解度又大，在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋
白质胶体颗粒表面的水膜；
另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而并使水中蛋白质颗粒蓄积而结晶划出。
常用的中性盐存有硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，但以硫酸铵为最少。
获得的蛋白质通常更
添活，一定条件下又可以再次熔化，故这种结晶蛋白质的方法在拆分、铀，储藏、提纯蛋
白质的工作中应用领域甚广。
蛋白质沉淀
蛋白质沉淀(Protein Precipitation)浓缩方法原理及详细解析在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。
在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂：1．盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。
2．有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
3．等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。
但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
4．非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子。
5．生成盐复合物沉淀用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。
6．热变性及酸碱变性沉淀法用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。
第一节盐析法一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。
在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。
盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫Kb分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。
一．影响盐析的若干因素1．蛋白质浓度高浓度蛋白溶液可以节约盐的用量，但许多蛋白质的b 和Ks常数十分接近，若蛋白浓度过高，会发生严重的共沉淀作用；在低浓度蛋白质溶液中盐析，所用的盐量较多，而共沉淀作用比较少，因此需要在两者之间进行适当选择。
用于分步分离提纯时，宁可选择稀一些的蛋白质溶液，多加一点中性盐，使共沉淀作用减至最低限度。
一般认为2.5%-3.0%的蛋白质浓度比较适中。
2．离子强度和类型一般说来，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低。
在进行分离的时候，一般从低离子强度到高离子强度顺次进行。
每一组分被盐析出来后，经过过滤或冷冻离心收集，再在溶液中逐渐提高中性盐的饱和度，使另一种蛋白质组分盐析出来。
蛋白质的沉淀的方法
蛋白质的沉淀的方法
1. 酸性沉淀法：在酸性条件下，将蛋白质和特定的金属离子（如铜离子）配合形成不溶性的复合物沉淀。
2. 盐析法：利用不同浓度的盐解离水合壳，使蛋白质沉淀。
3. 醇沉淀法：在高浓度的乙醇或异丙醇中加入蛋白质，使其沉淀。
4. 离子交换层析法：利用离子交换树脂对蛋白质进行分离纯化，蛋白质在不同离子浓度下与树脂发生离子交换，使蛋白质从树脂上洗脱。
5. 大小分离法：根据蛋白质分子的大小、形态、电荷等特性，利用凝胶过滤、离心等方法进行分离。
6. 两亲性层析法：利用特殊的分子筛材料（如聚合物、聚丙烯酰胺凝胶）对蛋白质进行分离，以蛋白质分子的亲水性和疏水性的不同性质进行分离。
沉淀蛋白质的常用方法
沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）2010-08-18 15:19TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxy cholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration1) Add 1 volume of protein solution to 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate anyacetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl H Cl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichloroacetic acid (TCA) and mix (prepa ration of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4oC.Be careful, use gloves!!!).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prepTM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGE prep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prepTM Protein Clean-up and Enrichment Kit (pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143哈哈,我做过这个论文哈!1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。
沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）
沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).2) V ortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: W ash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PA GE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PA GE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration1) Add to 1 volume of protein solution 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PA GE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before P AGE-SDS 1)Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). V ortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PA GE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate any acetone residue (s mell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidif ied acetone: 120ml acetone + 10μl HCl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mi x and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before P AGE-SDS 1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichlo roacetic acid (TCA) and mix (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe P AGEprep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-P AGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PA GE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit(pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents2)1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) V ortex well4) Add 100 ul chloroform5) V ortex6) Add 300 ul H2O7) V ortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) V ortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-V ac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PA GEReference: W essel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143三氯乙酸（TCA）沉淀蛋白的原理12TCA与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用：①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐；②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变，暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀；③随着蛋白质分子量的增大，其结构复杂性与致密性越大，TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去，在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片，而且随时间的延长这一作用愈加明显；④电泳图谱显示，BSA、HSA单体谱带有较明显的展宽现象，这可能是由于TCA的结合，使SDS 与蛋白质的结合量产生偏差，从而造成蛋白质所带电荷的不均一性，造成迁移率的不一致。
蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀的方法蛋白质沉淀是生物化学实验中常见的步骤，它可以帮助我们从混合物中分离出目标蛋白质。
在实验室中，有多种方法可以用来沉淀蛋白质，下面将介绍几种常见的方法及其操作步骤。
一、盐析法。
盐析法是一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用蛋白质在高盐浓度下沉淀的特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的盐溶液中，使盐浓度达到蛋白质的盐饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高盐浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
二、醋酸铵沉淀法。
醋酸铵沉淀法是另一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用蛋白质在醋酸铵高浓度下沉淀的特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的醋酸铵溶液中，使醋酸铵浓度达到蛋白质的饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高醋酸铵浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
三、甲醇沉淀法。
甲醇沉淀法是一种常用的有机溶剂沉淀蛋白质的方法，它利用蛋白质在甲醇中的沉淀特性来实现分离。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的甲醇中，使蛋白质在甲醇中沉淀。
2. 静置一段时间，让蛋白质充分沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
四、硫酸铵沉淀法。
硫酸铵沉淀法是一种利用硫酸铵对蛋白质的沉淀作用来实现分离的方法。
具体操作步骤如下：1. 将待沉淀的蛋白质溶液加入适量的硫酸铵溶液中，使硫酸铵浓度达到蛋白质的饱和度。
2. 静置一段时间，让蛋白质在高硫酸铵浓度下沉淀。
3. 用离心机将混合物进行离心，将沉淀的蛋白质分离出来。
以上就是几种常见的蛋白质沉淀方法及其操作步骤，希望对您有所帮助。
在进行实验操作时，要根据具体情况选择合适的方法，并严格按照操作步骤进行操作，以确保实验的准确性和可靠性。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是一种大分子化合物，在溶液中以胶体状态存在。
当溶液条件发生改变时，蛋白质的胶体稳定性被破坏，从而发生沉淀。
常见的使蛋白质沉淀的方法有以下几种：1、盐析法：在蛋白质溶液中加入大量中性盐（如硫酸铵、氯化钠等），破坏蛋白质的水化膜和电荷，使其溶解度降低而沉淀。
2、有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂（如乙醇、丙酮等），降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子间的静电引力，导致蛋白质沉淀。
3、重金属盐沉淀法：重金属离子（如汞离子、铅离子等）与蛋白质分子中的巯基等基团结合，使蛋白质变性沉淀。
4、生物碱试剂沉淀法：生物碱试剂（如苦味酸、鞣酸等）能与蛋白质分子中的碱性基团结合，生成不溶性盐而沉淀。
三、实验材料和仪器1、材料鸡蛋白溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清用蒸馏水稀释 10 倍。
10%硫酸铵溶液、饱和硫酸铵溶液、3%硝酸银溶液、01mol/L 硫酸铜溶液、5%三氯乙酸溶液、95%乙醇、1%醋酸铅溶液、10%氢氧化钠溶液、1%醋酸溶液、苦味酸饱和溶液、鞣酸饱和溶液。
2、仪器试管、试管架、滴管、玻璃棒、离心机。
四、实验步骤1、盐析法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 10%硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 饱和硫酸铵溶液，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
2、有机溶剂沉淀法取两支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向其中一支试管中逐滴加入 95%乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀。
观察沉淀的生成情况。
向另一支试管中加入 2mL 丙酮，振荡均匀。
静置一段时间后，观察沉淀现象。
3、重金属盐沉淀法取三支试管，分别加入 2mL 鸡蛋白溶液。
向第一支试管中滴加 3%硝酸银溶液 2~3 滴，振荡均匀，观察沉淀的生成情况。
蛋白质沉淀法详解
蛋白质沉淀法详解蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出。
蛋白质的沉淀（protein precipitation），沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。
蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。
在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。
在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂：1．盐析法多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。
2．有机溶剂沉淀法多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。
3．等电点沉淀法用于氨基酸、蛋白质及其它两性物质的沉淀。
但此法单独应用较少，多与其它方法结合使用。
4．非离子多聚体沉淀法用于分离生物大分子。
5．生成盐复合物沉淀用于多种化合物，特别是小分子物质的沉淀。
6．热变性及酸碱变性沉淀法用于选择性的除去某些不耐热及在一定PH值下易变性的杂蛋白。
第一节盐析法一般来说，所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出，这一过程叫盐析。
在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离，如蛋白质、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白质沉淀最为常见，特别是在粗提阶段。
盐析法分为两类，第一类叫Ks分段盐析法，在一定PH和温度下通过改变离子强度实现，用于早期的粗提液；第二种叫b分段盐析法，在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现，用于后期进一步分离纯化和结晶。
一．影响盐析的若干因素1．蛋白质浓度高浓度蛋白溶液可以节约盐的用量，但许多蛋白质的b 和Ks常数十分接近，若蛋白浓度过高，会发生严重的共沉淀作用；在低浓度蛋白质溶液中盐析，所用的盐量较多，而共沉淀作用比较少，因此需要在两者之间进行适当选择。
用于分步分离提纯时，宁可选择稀一些的蛋白质溶液，多加一点中性盐，使共沉淀作用减至最低限度。
一般认为2.5%-3.0%的蛋白质浓度比较适中。
蛋白质沉淀的技术
蛋白质沉淀的五种方法
蛋白质沉淀的五种方法
蛋白质沉淀是从混合物中分离出纯的蛋白质的重要方法之一。
它们通常是从细胞或组
织样品中提取并纯化蛋白质，可以用于许多生物学和医学研究。
在本文中，我们将介绍五
种不同的蛋白质沉淀方法，包括酒精沉淀法、氯化铵沉淀法、三氯醋酸沉淀法、钙离子助
沉淀法和靛酚绿沉淀法。
1. 酒精沉淀法
酒精沉淀法是一种简单、快速的蛋白质沉淀方法。
将蛋白质混合物加入70%的乙醇中，使蛋白质与乙醇沉淀。
可以用离心将沉淀分离出来，然后用退火干燥。
这种方法适用于少
量的样品，但是乙醇浓度要掌握好，过少不利于沉淀效果，过多可能导致蛋白质变性。
2. 氯化铵沉淀法
氯化铵沉淀法是一种比较常用的蛋白质沉淀方法，选择它的优点是速度快、操作简单
且收率高。
混合物加入预先饱和的氯化铵溶液中，产生蛋白质和氯化铵沉淀。
它们可以
通过离心分离和洗涤以去除其余的盐和杂质，再将沉淀蛋白质用洗涤液中再溶解出来。
4. 钙离子助沉淀法
5. 靛酚绿沉淀法
靛酚绿沉淀法适用于一种特殊的蛋白质，它使用靛酚绿染料结合，将其沉淀下来。
混合物加入靛酚绿中，沉淀蛋白质，离心分离和洗涤来去除多余杂质，最后用甲醇洗涤液
中清洗。
具体步骤和其它沉淀法类似。
总之，蛋白质沉淀是从混合物中分离出高纯度蛋白质的重要方法之一。
在选择适当的
方法时，需要考虑样品的性质、沉淀效果、效率和操作难度等因素。
这里的几个方法都比
较常见，选择时需要结合自己的实验条件进行考虑。
五种去除蛋白质的方法
五种去除蛋白质的方法蛋白质是细胞组成成分之一，但有些时候需要将蛋白质去除，以便在实验室中进行进一步的操作，比如纯化其他物质或者分析DNA、RNA等。
以下将介绍五种常见的去除蛋白质的方法。
1.氯仿/醇沉淀法这种方法是用氯仿和醇来沉淀蛋白质，从而去除它们。
首先，将细胞或组织样本经过震荡或超声处理，并加入含有碱性成分的缓冲液。
接下来，加入等体积的氯仿，然后混合均匀并离心，以使蛋白质沉淀到下层，上层是DNA和RNA等其他物质。
把上层移液棒取出，加入体积相等的醇，再次混合并离心。
此时，醇水相中含有其他物质，而蛋白质被沉淀到沉淀相中。
2.离心超滤法这种方法是利用超滤离心进行蛋白质的分离。
将含蛋白质的样本在低温下旋转超滤离心，离心过程中，由于离心力的作用，大分子蛋白质将被推到一侧，小分子物质则被推到另一侧。
这种方法适用于从高浓度的样品（如血清）中去除蛋白质。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳法这种方法适用于分离已知的特定蛋白质，例如亚单位。
将样本制备成含有聚丙烯酰胺凝胶的试样，然后进行电泳操作。
电泳进行的时间长短依赖于所用的凝胶厚度和电场强度，不同的蛋白质将移动到凝胶不同的位置。
在染色或印迹检测后，蛋白质可以被找到并开展后续操作，如质谱分析。
4.氯化胍法这种方法是一种去除蛋白质的临床方法。
样本在存在氯化胍的条件下，多余水份于低温下处理，然后用离心将剩余物离心去。
接着用氯化钠洗涤以去除氯化胍，以获得纯净的细胞残留物。
这种方法是一种快速高效的方法，适用于分析细胞残留物。
5.细胞膜破碎法细胞膜破碎法是在加入氧气后以高压处理细胞，这样可以产生高压和剪切力，从而使细胞破裂并释放蛋白质质量。
然后，将样品离心以分离可溶性和不可溶性部分，进一步去除蛋白质。
该方法适用于初步提取蛋白质样品，可以用于分子生物学的初级操作。
tca沉淀蛋白的步骤
tca沉淀蛋白的步骤TCA沉淀蛋白的步骤引言：TCA（三氯乙酸）沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法，通过沉淀蛋白质可以达到分离、富集和纯化蛋白质的目的。
本文将介绍TCA 沉淀蛋白的步骤及相关注意事项。
一、样品制备1.1 选择合适的样品：样品可以是细胞提取物、组织提取物或其他含有蛋白质的溶液。
1.2 样品浓度调整：为了获得较好的沉淀效果，样品的浓度应适中，通常在0.5-5 mg/mL之间。
1.3 样品处理：如果样品中含有酶活性，可以在样品制备过程中加入抑制剂（如PMSF）来保护蛋白质的完整性。
二、TCA沉淀2.1 加入TCA：将1 mL的样品加入10% TCA溶液中，比例通常是1:4（样品：TCA溶液）。
2.2 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使样品和TCA溶液充分混合。
2.3 孵育：将混合液在4℃下孵育30分钟，促使蛋白质与TCA结合形成沉淀。
2.4 离心：使用高速离心机将样品离心10分钟，以沉淀蛋白质。
三、洗涤沉淀3.1 去除上清液：将上清液完全倒掉，避免上清液中的杂质污染沉淀。
3.2 加入冷醋酸酐溶液：向沉淀中加入5%冷醋酸酐溶液，使蛋白质沉淀更加纯净。
3.3 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使沉淀和冷醋酸酐溶液充分混合。
3.4 离心：使用高速离心机将样品离心10分钟，以去除醋酸酐和杂质。
四、蛋白质溶解4.1 加入蛋白质溶解液：向蛋白质沉淀中加入适量的蛋白质溶解液，如SDS-PAGE样品缓冲液。
4.2 混匀：轻轻地旋转样品管或反复倒置，使蛋白质沉淀溶解。
4.3 离心：使用高速离心机将样品离心5分钟，以去除残留的杂质。
4.4 收集上清液：将上清液转移到新的离心管中，以便后续的实验使用。
五、存储和分析5.1 存储：将蛋白质溶液存储在-20℃的冷冻离心管中，避免蛋白质的降解和失活。
5.2 浓度测定：使用合适的蛋白质浓度测定方法（如Bradford法），确定蛋白质的浓度。
5.3 SDS-PAGE分析：将蛋白质溶液进行SDS-PAGE电泳，以确定蛋白质的分子量和纯度。
蛋白质的沉淀方法
蛋白质的沉淀方法嘿，你问蛋白质的沉淀方法啊？那咱就来聊聊。
蛋白质的沉淀方法有好几种呢。
一种是盐析法，这就像给蛋白质加点“调料”让它沉淀下来。
你往蛋白质溶液里加点盐，比如氯化钠啥的，蛋白质就可能会因为盐的作用，溶解度降低，然后就从溶液里跑出来沉淀啦。
就好像你在水里放了太多糖，糖就会析出来一样。
不过盐的浓度要控制好哦，太浓或太淡可能效果都不好。
还有一种是有机溶剂沉淀法。
像乙醇、丙酮这些有机溶剂，它们能让蛋白质失去水膜，变得不稳定，从而沉淀下来。
这就好比蛋白质本来在一个舒适的“小水床”上，有机溶剂一来，就把“水床”抽走了，蛋白质就待不住啦。
但是用这种方法的时候要注意有机溶剂的量和温度，不然可能会影响蛋白质的活性哦。
另外，还有重金属盐沉淀法。
一些重金属离子，比如铅离子、汞离子等，能和蛋白质结合形成不溶性的复合物沉淀下来。
不过这种方法可不能随便用在食品或者生物制品里哦，因为重金属有毒嘛。
就像你不能给小朋友吃有毒的糖果一样。
酸碱沉淀法也可以。
调节溶液的酸碱度，让蛋白质在酸性或碱性条件下沉淀。
当溶液的pH值不合适的时候，蛋白质就会“闹脾气”，不愿意待在溶液里了，就会沉淀出来。
但也要注意别把pH值调得太过分，不然会把蛋白质“伤”得太厉害。
我给你讲个事儿吧。
我有个朋友在实验室做蛋白质提取的实验，他一开始想用盐析法沉淀蛋白质，但是盐加得太多了，结果蛋白质虽然沉淀了，但是活性也受到了很大影响。
后来他重新调整了盐的浓度，就顺利地得到了想要的蛋白质沉淀。
所以啊，用这些方法沉淀蛋白质的时候，要注意各种条件，小心操作，才能得到好的结果哦。
盐析法沉淀蛋白质的原理是
盐析法沉淀蛋白质的原理是
盐析法（Salting out）是一种常用的蛋白质沉淀方法，它利用
高浓度的盐溶液聚集蛋白质分子，使其从溶液中沉淀出来。
其原理是由于盐的存在，溶液中的盐离子与蛋白质分子发生离子相互作用，改变了溶液中蛋白质的溶解度。
具体来说，高浓度的盐溶液中所含盐离子与蛋白质分子形成离子云，这种排斥作用导致亲水性蛋白质的水合层损失，从而使蛋白质变得不溶于水，从溶液中析出。
通常盐析法使用氯化铵或硫酸铵这样的盐类，因为它们能在水溶液中离解出氯离子或硫酸根离子。
在进行盐析法实验时，一般会将含有蛋白质的溶液与适量的高浓度盐溶液混合，随后通过离心将蛋白质沉淀收集下来。
此时，蛋白质在盐浓度高的条件下沉淀，而杂质物质则可能保持在上清液中。
蛋白质的沉淀形态和沉淀程度可能受多种因素影响，如盐浓度、温度和pH值等。
盐析法是一种常用的分离和富集蛋白质的方法，尤其适用于大分子量、亲水性较低的蛋白质。
通过改变盐的浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现对蛋白质的分离、纯化和富集。
常用蛋白质沉淀的方法
常用蛋白质沉淀的方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊常用蛋白质沉淀的那些事儿。
你说蛋白质沉淀，这就好比是一场奇妙的“捕捉”游戏。
咱得想办法把那些调皮的蛋白质给抓住不是？先说盐析法吧，就好像是给蛋白质们撒下一把“魔法盐”。
增加盐的浓度，那些蛋白质就乖乖地现身啦！就像是在一群调皮孩子中，突然来了个厉害的老师，他们就不敢乱跑了。
这办法简单又好用，能让我们把想要的蛋白质分离出来。
还有有机溶剂沉淀法呢，这就好像是给蛋白质们制造了一个“温柔陷阱”。
有机溶剂一出现，蛋白质就不知不觉地掉进去啦！但可得小心哦，用不好可就麻烦啦。
就像你去抓蝴蝶，太用力可能就把蝴蝶弄伤了。
然后是等电点沉淀法，这个可有意思啦！蛋白质在它特定的等电点时，就像个犹豫不决的小孩子，不知道该往哪儿走，然后就沉淀下来啦！这不就是找到它们的弱点然后一举拿下嘛。
再说说重金属盐沉淀法，这就有点像给蛋白质吃下了“毒药”。
重金属盐一碰上蛋白质，它们就没法跑啦！不过可别乱用哦，不然把好的蛋白质也给误伤了可不行。
还有生物碱试剂和某些酸类沉淀法呢，这就像是给蛋白质设下的特别“圈套”。
它们一旦进去，就出不来咯！咱在做这些的时候，可得像个细心的猎人，小心翼翼地操作。
不然一不小心，可能就把目标弄丢啦，或者把不该弄的也给弄了。
你想想看，要是咱不注意这些方法的细节，那不就像闭着眼睛抓东西，能抓到啥呀？所以啊，每一步都得认真对待。
总之呢，常用蛋白质沉淀的方法各有各的妙处，各有各的要注意的地方。
咱得熟悉它们，就像熟悉自己的朋友一样，这样才能在需要的时候，准确地把蛋白质沉淀出来呀！这可不是一件随随便便就能做好的事情，得用心，得有耐心！咱可不能小瞧了这些方法，它们可是咱在生物领域探索的重要工具呢！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
沉淀蛋白质的常用方法(TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤)
沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration1) Add to 1 volume of protein solution 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least 10min.at –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to 0.02% final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. 10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl HCl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with H2OAdd 100μl of 20% trichloroacetic acid (TCA) and mix (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat 4oC.Be careful, use gloves).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGEprep? Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit (pdf) Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143蛋白质浓缩——方法很全1130徐炉李2011-05-28 14:35楼主蛋白质浓缩——方法很全- 丁香园论坛-医学/药学/生命科学论坛蛋白质浓缩方法总结一个简便的方法你可以试试：找一透析袋，底部扎紧，袋口扎一去底的塑料或玻璃试管，将待浓缩的液体从管口灌入透析袋中，将整个装置挂在冰箱中，或者用电风扇吹，液体干后可再继续加入，直至样品浓缩至所需体积。
三氯乙酸沉淀蛋白原理
三氯乙酸沉淀蛋白原理三氯乙酸（TCA）沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法，常用于分离和富集蛋白质。
其原理主要是通过使用三氯乙酸将蛋白质转化为不溶性，从而使其沉淀下来。
下面将详细介绍该方法的原理及其在蛋白质研究中的应用。
首先，三氯乙酸是一种强酸，可以将蛋白质的氨基酸上的羧基质子化，使其带正电荷。
这些带正电荷的氨基酸会相互吸引，从而形成蛋白质聚集体。
同时，三氯乙酸还会降低水的溶解能力，使蛋白质在溶液中变得不稳定。
这样一来，蛋白质会发生凝固并沉淀出来。
其次，蛋白质的溶解度可以受到多种因素的影响，包括溶液的pH值、离子浓度、蛋白质浓度以及人工添加的盐类等。
在TCA沉淀法中，正是通过调节上述因素来促进蛋白质的沉淀。
一般来说，当pH值降低到低于蛋白质的等电点时，蛋白质会开始凝固。
由于三氯乙酸可使溶液的pH值降低，因此这一方法通常在较低的pH条件下进行。
在实际应用中，TCA沉淀法可以用于分离和富集目标蛋白质，去除杂质和其他干扰物。
一般而言，TCA沉淀法比较适用于富含碱性氨基酸的蛋白质，因为这些蛋白质具有较低的等电点，易于在低pH条件下沉淀。
此外，TCA沉淀法还可以去除一些亲水性物质，例如核酸、多肽等，因为这些物质在低pH条件下往往不能与蛋白质结合，从而被沉淀掉。
在某些情况下，TCA沉淀法还可以用于蛋白质的定量。
由于沉淀的蛋白质可以被溶解，并通过一定的测试方法来定量，因此可以根据溶解后的蛋白质浓度推测沉淀前的蛋白质浓度。
不过，需要注意的是，TCA沉淀法的定量结果可能受到一些因素的影响，例如沉淀后的蛋白质可能受到一定程度的降解。
总结起来，TCA沉淀法是一种常用的蛋白质沉淀方法。
其原理主要是通过使用三氯乙酸将蛋白质转化为不溶性的形式，从而使其沉淀下来。
在实际应用中，TCA 沉淀法可以用于分离和富集目标蛋白质，并去除杂质和其他干扰物。
此外，TCA 沉淀法还可以用于蛋白质的定量。
然而，需要注意的是，在使用TCA沉淀法时需要根据样品特性和实验目的进行条件优化，以获得最佳的沉淀效果。
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沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤）TCA-DOCFor precipitation of very low protein concentration1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).2) Vortex and let sit for 30min at 4oC.3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4oC (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use gloves!!!).4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed between washes].5) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.)Normal TCATo eliminate TCA soluble interferences and protein concentration1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20oC and then 15min 4oC; or longer time at 4oC without the –20oC step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.(preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use gloves!!!).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence ofthe acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acetone PrecipitationTo eliminate acetone soluble interferences and protein concentration1) Add to 1 volume of protein solution 4 volumes of cold acetone. Mix and keep at least 20min –20oC. (Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low).2) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Add to 1 volume of protein solution 9 volumes of cold Ethanol 100%. Mix and keep at least –20oC. (Suggestion: leave ON).2) Spin 15min 4oC in microcentrifuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).3) Wash pellet with 90% cold ethanol (keep at –20oC). Vortex and repellet samples 5min at full speed.4) Dry samples under vaccum (speed vac) or dry air to eliminate any ethanol residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.TCA-DOC/AcetoneUseful method to concentrate proteins and remove acetone and TCA soluble interferences1. To one volume of protein solution add 2% Na deoxycholate (DOC) to % final (for 100 μl sample, add 1 μl 2% DOC).2. Mix and keep at room temperature for at least 15 min.3. 100% trichloroacetic acid (TCA) to get 10% final concentration (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use gloves!!!).4. Mix and keep at room temperature for at least 1 hour.5. Spin at 4oC for 10 min, remove supernatant and retain the pellet. Dry tube by inversion on tissue paper.6. Add 200 μl of ice cold acetone to TCA pellet.7. Mix and keep on ice for at least 15 min.8. Spin at 4oC for 10 min in microcentrifuge at maximum speed.9. Remove supernatant as before (5), dry air pellet to eliminate any acetone residue (smell tubes). For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer.10. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.)Acidified Acetone/MethanolUseful method to remove acetone and methanol soluble interferences like SDS before IEF1) Prepare acidified acetone: 120ml acetone + 10μl HCl (1mM final concentration).2) Prepare precipitation reagent: Mix equal volumes of acidified acetone and methanol and keep at -20oC.3) To one volume of protein solution add 4 volumes of cold precipitation reagent. Mix and keep ON at -20oC.4) Spin 15min 4oC in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).5) Dry samples under vaccum (speed-vac) or dry air to eliminate any acetone or methanol residue (smell tubes).TCA-Ethanol PrecipitationUseful method to concentrate proteins and removal of Guanidine Hydrochloride before PAGE-SDS1) Dilute 10-25μl samples to 100μl with HO2Add 100μl of 20% trichloroacetic ac id (TCA) and mix (preparation of 100% TCA: 454ml HO/kg TCA. Maintain in dark bottleat careful, use2gloves!!!).2) Leave in ice for 20min. Spin at 4oC for 15 min in microcentrifuge at maximum speed.3) Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue (pellet may be difficult to see).4) Wash pellet with 100μl ice-cold ethanol, dry and resuspend in sample buffer.5) In case there are traces of GuHCl present, samples should be loaded immediately after boiling for 7 min at 95°C6) (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl to obtain the normal blue sample buffer colour.)PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit - PIERCEThe PAGEprep Kit enables removal of many chemicals that interfere with SDS-PAGE analysis: guanidine, ammonium sulfate, other common salts, acids and bases, detergents, dyes, DNA, RNA, and lipids.PIERCE: #26800 - PAGE prep TM Protein Clean-up and Enrichment Kit (pdf)Chloroform Methanol PrecipitationUseful method for Removal of salt and detergents1) To sample of starting volume 100 ul2) Add 400 ul methanol3) Vortex well4) Add 100 ul chloroform5) Vortex6) Add 300 ul H2O7) Vortex8) Spin 1 minute @ 14,0000 g9) Remove top aqueous layer (protein is between layers)10) Add 400 ul methanol11) Vortex12) Spin 2 minutes @ 14,000 g13) Remove as much MeOH as possible without disturbing pellet14) Speed-Vac to dryness15) Bring up in 2X sample buffer for PAGEReference: Wessel, D. and Flugge, U. I. Anal. Biochem. (1984) 138, 141-143蛋白质浓缩——方法很全1130徐炉李2011-05-28 14:35楼主蛋白质浓缩——方法很全 - 丁香园论坛-医学/药学/生命科学论坛蛋白质浓缩方法总结一个简便的方法你可以试试：找一透析袋，底部扎紧，袋口扎一去底的塑料或玻璃试管，将待浓缩的液体从管口灌入透析袋中，将整个装置挂在冰箱中，或者用电风扇吹，液体干后可再继续加入，直至样品浓缩至所需体积。