实验一生长谱法优秀课件
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6. 培养及观察
– 将已放置糖浸片后的平皿置于37℃条件下 , 培养 18 ～ 24 h后 , 观察滤纸片周围有无菌落生长以及 指示剂变色程度。
五、实验报告
1. 结果 – 绘图，表示大肠杆菌等三种菌在平板上 的生长状况。
2. 分析 绘制表格，说明大肠杆菌等三种菌利用 六种糖的情况。 如何保证实验结果的准确性？
实验安排及分组情况
第一次课（第四周）：
– 讲述实验内容， – 完成实验步骤1：配培养基，灭菌
第二次课（第六周）：
– 完成实验步骤2、3、4、5、6等 – 撰写实验报告
分组
– 4个人一组，分成6组，每组作两种制平板方式。
3. 制备菌悬液
在已培养 24h的大肠杆菌 (E.coli) 等 3种斜面内分别倒入5ml无菌 水，用接种环轻轻刮下菌苔，振荡，制成菌悬液。
4. 制平板
混菌法——在无菌平板内加入上述菌悬液(1ml菌悬液/10ml培养 基），倒入溶化冷却至50OC左右的合成培养基，轻轻摇匀。
涂布法——将溶化冷却至50OC左右的合成培养基倒入无菌培养皿， 待其凝固后，加入0.5ml菌悬液，用玻棒涂布均匀。
Βιβλιοθήκη Baidu液和试剂
– A—葡萄糖、B—乳糖、C—麦芽糖、D—蔗糖、E—木 糖、F—半乳糖。
器具
– 无菌培养皿、吸管、镊子、牙签、酒精灯、接种环等 , 另备试管无菌水 6支。
四、操作步骤
1. 配制培养基 2. 制作糖浸片
将圆形打孔器 (d=0.8 cm) 打下的滤纸片 , 置入不同糖的饱和溶液 中浸泡 10 min后 , 取出置 28℃培养箱中烘干备用 (最好置紫外灯 下灭菌 20 ～ 30min)。
实验一生长谱法优秀课件
实验一 用生长谱法测定微生物的营养要求
一、目的要求
学习并掌握生长谱法测定微生物营养需 求的基本原理和方法。
二、基本原理
微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境； 在缺乏某种营养物质的、含有指示剂的培养基上接入
某种微生物，再在接菌平板上置入这种营养物质，经 一定条件培养后 , 即可通过指示剂变化情况来判断对 不同营养物质的利用情况。 该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的 要求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品 质量检测等诸多方面具有重要用途。
三、实验器材
菌种
– 大肠杆菌 (Escherichia coli) 、 – 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、 – 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 培养基（ 合成培养基）
– (NH4 )3 PO4 1 g, KCl 0.2 g, MgSO4 ·7H2O 0.2 g, 豆芽 汁 10 mL, 琼脂 20 g, 蒸馏水定容至 1L pH 7.05,加入 12mL 0.04%的溴甲酚紫作指示剂 (pH5.2～6.8) , 将颜色 由黄色调为紫色。1 ×105 Pa灭菌 25 min。
对照：培养基+菌0+糖0（1） 处理：
– 培养基+菌+糖（3混菌，3涂布） – 培养基+菌+糖0（3，混菌或涂布） – 培养基+菌0+糖（1）
四、操作步骤
5. 分小区植糖 图 1 平板分区示意图 – 在冷凝后的平皿背面 , 用记号笔画出 6个均匀的 植糖区域 (图1) , 用无菌镊子分别取代号为 A、B、 C、D、E、F的 6种糖浸片各 1张对号放入用两种 方法接菌的平板的对应区域中 , 并轻轻按压 , 以 免在进行倒置培养时糖片脱离培养基平板。
– 将已放置糖浸片后的平皿置于37℃条件下 , 培养 18 ～ 24 h后 , 观察滤纸片周围有无菌落生长以及 指示剂变色程度。
五、实验报告
1. 结果 – 绘图，表示大肠杆菌等三种菌在平板上 的生长状况。
2. 分析 绘制表格，说明大肠杆菌等三种菌利用 六种糖的情况。 如何保证实验结果的准确性？
实验安排及分组情况
第一次课（第四周）：
– 讲述实验内容， – 完成实验步骤1：配培养基，灭菌
第二次课（第六周）：
– 完成实验步骤2、3、4、5、6等 – 撰写实验报告
分组
– 4个人一组，分成6组，每组作两种制平板方式。
3. 制备菌悬液
在已培养 24h的大肠杆菌 (E.coli) 等 3种斜面内分别倒入5ml无菌 水，用接种环轻轻刮下菌苔，振荡，制成菌悬液。
4. 制平板
混菌法——在无菌平板内加入上述菌悬液(1ml菌悬液/10ml培养 基），倒入溶化冷却至50OC左右的合成培养基，轻轻摇匀。
涂布法——将溶化冷却至50OC左右的合成培养基倒入无菌培养皿， 待其凝固后，加入0.5ml菌悬液，用玻棒涂布均匀。
Βιβλιοθήκη Baidu液和试剂
– A—葡萄糖、B—乳糖、C—麦芽糖、D—蔗糖、E—木 糖、F—半乳糖。
器具
– 无菌培养皿、吸管、镊子、牙签、酒精灯、接种环等 , 另备试管无菌水 6支。
四、操作步骤
1. 配制培养基 2. 制作糖浸片
将圆形打孔器 (d=0.8 cm) 打下的滤纸片 , 置入不同糖的饱和溶液 中浸泡 10 min后 , 取出置 28℃培养箱中烘干备用 (最好置紫外灯 下灭菌 20 ～ 30min)。
实验一生长谱法优秀课件
实验一 用生长谱法测定微生物的营养要求
一、目的要求
学习并掌握生长谱法测定微生物营养需 求的基本原理和方法。
二、基本原理
微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境； 在缺乏某种营养物质的、含有指示剂的培养基上接入
某种微生物，再在接菌平板上置入这种营养物质，经 一定条件培养后 , 即可通过指示剂变化情况来判断对 不同营养物质的利用情况。 该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的 要求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品 质量检测等诸多方面具有重要用途。
三、实验器材
菌种
– 大肠杆菌 (Escherichia coli) 、 – 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、 – 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 培养基（ 合成培养基）
– (NH4 )3 PO4 1 g, KCl 0.2 g, MgSO4 ·7H2O 0.2 g, 豆芽 汁 10 mL, 琼脂 20 g, 蒸馏水定容至 1L pH 7.05,加入 12mL 0.04%的溴甲酚紫作指示剂 (pH5.2～6.8) , 将颜色 由黄色调为紫色。1 ×105 Pa灭菌 25 min。
对照：培养基+菌0+糖0（1） 处理：
– 培养基+菌+糖（3混菌，3涂布） – 培养基+菌+糖0（3，混菌或涂布） – 培养基+菌0+糖（1）
四、操作步骤
5. 分小区植糖 图 1 平板分区示意图 – 在冷凝后的平皿背面 , 用记号笔画出 6个均匀的 植糖区域 (图1) , 用无菌镊子分别取代号为 A、B、 C、D、E、F的 6种糖浸片各 1张对号放入用两种 方法接菌的平板的对应区域中 , 并轻轻按压 , 以 免在进行倒置培养时糖片脱离培养基平板。