课题3_血红蛋白的提取和分离导学案及答案
(完整word版)2017人教版高中生物选修1专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》word导学案
专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。
2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。
（三）电泳1、电泳是指。
2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。
二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
（一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入（质量分数为），缓慢搅拌 min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。
2018_2019学年高中生物专题5课题3血红蛋白的提取和分离教学案含解析选修16
血红蛋白的提取和分离一、蛋白质分离的原理和方法1．分离原理 依据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。
2．凝胶色谱法(1)概念：也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
(2)凝胶：微小的多孔球体，大多数由多糖类化合物构成，内部有许多贯穿的通道。
(3)原理：[填表]3．缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，抑制外界的酸和碱对溶液pH 的影响，维持pH 基本不变。
(2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH 范围内使用的缓冲液。
4．电泳(1)概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
(2)原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH 下，这些1.凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法，相对分子质量大的先洗脱出来，相对分子质量小的后洗脱出来。
2．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。
3．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于分子的大小。
4．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理及粗分离、纯化和纯度鉴定。
5．透析法可除去相对分子质量较小的杂质。
6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
二、血红蛋白提取和分离的实验操作[填图]1．凝胶色谱法中移动速度快的是( )A．相对分子质量大的B．相对分子质量小的C．溶解度高的 D．溶解度低的解析：选A 凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。
人教版选修1《血红蛋白的提取和分离》学案有答案
《血红蛋白的提取和分离》学案【学习目标】1.尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。
2.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
【重点和难点】重点: 凝胶色谱法的原理和方法。
难点: 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
【课前预习】1.不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 ① 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ② ，移动速度 ③ ，而相对分子质量 ④ 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 ⑤ 移动，路程 ⑥ ，移动速度 ⑦ ，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
1.①较小②较长③较慢④较大⑤凝胶外部⑥较短⑦较快2.在一定范围内，缓冲溶液抵制外界的 ① 对溶液pH 的影响，维持pH ② 。
电泳是利用了待分离样品中各种分子 ③ 以及分子本身的④ 、 ⑤ 的不同，使带电分子产生不同的 ⑥ ，从而实现样品中各种分子的分离。
【课堂探究】一、基础知识1.下图是凝胶色谱法分离蛋白质的原理，据图分析：颗粒 AB（1）图A 中蛋白质a 能进入凝胶颗粒内部而蛋白质b 被排阻在凝胶颗粒外面的原因是 ① 。
所以蛋白质 ② 在图B 中的路程就短，移动速度 ③ ，当它从凝胶柱中洗脱出来时，蛋白质 ④ 还在行进中。
（2）除了上述原理外，还可以利用哪些原理分离蛋白质？ ① 。
一、1.（1）①蛋白质a 的相对分子质量较小，蛋白质b 的相对分子质量较大②b ③较快④a（2）①蛋白质的形状、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力2.人体血浆中的H 2CO 3/NaHCO 3、NaH 2PO 4/Na 2HPO 4等的作用是① ，体内细胞或物质在体外是否需要与体内一样的环境条件才能保持原有的生物活性？ ② 。
怎样使其保持与体内一样的酸碱度呢？③ 。
2.①缓冲酸和碱对血浆pH 的影响，维持血浆pH 基本不变②是③利用配制的缓冲溶液模拟体内的pH 环境3.电泳时，带正电和负电的蛋白质在电场中的迁移方向是 ① ；若蛋白质的带电性质和数量相同，但蛋白质的分子大小不同，则蛋白质在电场中的迁移情况是 ② 。
人教版高中生物选修一专题5课题3血红蛋白的提取和分离教学案含解析
血红蛋白的提取和分离.一、蛋白质分离的原理和方法1．分离原理依据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等。
2．凝胶色谱法(1)概念：也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
(2)凝胶：微小的多孔球体，大多数由多糖类化合物构成，内部有许多贯穿的通道。
(3)原理：[填表]1.凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法，相对分子质量大的先洗脱出来，相对分子质量小的后洗脱出来。
2．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状都会影响分子的迁移速度。
3．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于分子的大小。
4．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理及粗分离、纯化和纯度鉴定。
5．透析法可除去相对分子质量较小的杂质。
6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3．缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，抑制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。
(2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
4．电泳(1)概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
(2)原理：①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。
②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
二、血红蛋白提取和分离的实验操作[填图]1．凝胶色谱法中移动速度快的是(..)A．相对分子质量大的....B．相对分子质量小的C．溶解度高的..............D．溶解度低的解析：选 A.凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。
高中生物血红蛋白的提取和分离导学案新人教版选修1
答案：1. D 2.A 3.A 4.D 5.D 6.D 7.C 8.B 9.A 10.D 课后习题 基础达标1．下列关于凝胶色谱法的原理及操作不．正确的是( ) A ．是利用凝胶把分子大小不同的物质分离开的一种方法B ．在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而最先流出，而小分子可以进入凝胶内部而流速缓慢，以致最后流出[来源:]C．凝胶内部有很微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的物质分子的大小无相应关系D．一般情况下，凝胶对要分离的物质没有吸附作用，因此所有要分离的物质都应该被洗脱出来解析：选C。
凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法，凝胶是由多糖类化合物构成的，其内部有很微细的多孔网状结构，小分子蛋白质可以进入凝胶内部，路程较长，移动速度慢，而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部，路程较短，移动速度快，因此在洗脱过程中分离。
选用不同种凝胶，其网状结构不同，孔隙大小不同，可分离的分子大小不同，二者是相关的，故C项不正确。
2．关于电泳的说法不．正确的是( )A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小解析：选C。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
3．下列操作正确的是( )A．分离红细胞时采用低速长时间离心B．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可C．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心D．透析时要用20 m mol/L的磷酸缓冲液，透析12 h解析：选D。
分离红细胞时，采用低速短时间离心，如500 r/min离心2 min；分离血红蛋白溶液时，离心时间较长，如2000 r/min离心10 min。
人教版生物高二选修一53血红蛋白的提取和分离学案有答案 副本
课题3 血红蛋白的提取和分离蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。
2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。
4．具体过程：______的蛋白质进入凝胶颗粒内；相对分子质量）洗脱开始，____________（1）________混合物上柱。
（2的蛋白质向下移动。
的蛋白质被滞留；_____________3）___________的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。
（中洗脱出来，________的蛋白质行程较短，）___________已从（4）相对分子质量不同的分子完全分开。
（5 的蛋白质还在行进中。
________________ 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
提示：二、缓冲溶液基本不变。
____的影响，维持____1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液使用________溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的______就可以制得在不同2．配制：通常由________ 的缓冲液。
三、电泳的过程。
的作用下发生______1．概念：带电粒子在______下，这些pH________的基团，在一定．原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有2移动。
课题3 血红蛋白的提取和分离(第1课时)
联系： 绿叶中色素的分离——纸层析法
绿叶中的色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸 上扩散得快;反之则慢。这样，几分钟后，绿叶中的色素就会随着层 析液在滤纸上的扩散而分离开。
凝胶色谱法、电泳法和纸层析法的相同点是什么？
凝胶色谱法、电泳法和纸层析法的在分离原理上的不同点是什么？
3. 如何使S。
阅读找出下列问题的答案：
1.常用的两种电泳方法是什么？ 琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.蛋白质在聚丙烯酰胺中的迁移速率取决于什么？
蛋白质分子所带净电荷的多少、性质以及分子的大小、形状。 3.为什么在凝胶中加入SDS后可以使电泳迁移率完全取决于分子的大小？
填一填：
性质
相关 内容
决定 运动方向
电荷的性质 √
电荷的多少
分子的形状
分子的大小
形成 库仑力
√
形成
决定
阻力 运动速度
√ √ √√
√
√
1.结合表中信息分析,电泳时,影响蛋白质分子运动速度的因素有哪些？ 分子所带电荷的性质和多少、分子的形状和大小
2. 根据上述信息解释为什么分子大小不同的蛋白质在电泳时也可能具有相同的运动 速度？ 因为分子的形状和电荷的多少也会影响蛋白质在电泳时的速度
（三）电泳
1.什么是电泳？
带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
2.电泳时，在电场的作用下带电分子会向什么方向移动？为什么？ 向着与其所带电荷相反的电极移动。 多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基 团会带上正电或负电。
3.电泳是依据什么原理实现对样品中各种分子的分离？
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从 而实现样品中各种分子的分离。
(人教版)生物高二选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》学案(有答案)
课题3 血红蛋白的提取和分离蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。
一、凝胶色谱法1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。
2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。
4．具体过程：（1）________混合物上柱。
（2）洗脱开始，____________的蛋白质进入凝胶颗粒内；相对分子质量______的蛋白质则被排阻于凝胶颗粒之外。
（3）___________的蛋白质被滞留；_____________的蛋白质向下移动。
（4）相对分子质量不同的分子完全分开。
（5）___________的蛋白质行程较短，已从________中洗脱出来，________________的蛋白质还在行进中。
提示：洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
二、缓冲溶液1．作用：在________内，能够抵制外界的________对溶液____的影响，维持____基本不变。
2．配制：通常由________溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的______就可以制得在不同________使用的缓冲液。
三、电泳1．概念：带电粒子在______的作用下发生______的过程。
2．原理：许多重要的生物大分子，如______、______等都具有________的基团，在一定pH下，这些基团会带上______或______。
专题5_课题3__血红蛋白的提取和分离 导学案2
课题3 血红蛋白的提取和分离导学案[导学诱思]1．凝胶色谱法凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
2．缓冲溶液缓冲溶液的作用是。
缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。
3．电泳电泳是指。
许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是和，在测定蛋白质分子量时通常使用。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于以及等因素。
4．蛋白质的提取和分离蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
5．样品处理血液由和组成，其中红细胞最多。
红细胞具有的特点。
红细胞中有一种非常重要的蛋白质，其作用是，血红蛋白有个肽链组成，包括，其中每条肽链环绕一个，磁基团可携带。
血红蛋白因含有呈现红色。
红细胞的洗涤洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时采用分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。
血红蛋白的释放在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
分离血红蛋白溶液将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。
人教版生物选修一课下提能：专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 含解析
专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离课下提能一、选择题1．(2019·平遥期中)下列关于电泳技术分离蛋白质原理的叙述，正确的是()A．蛋白质中含有游离的氨基，是碱性电解质B．蛋白质中含有游离的羧基，是酸性电解质C．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动[解析]选D氨基酸既有氨基也有羧基，是中性电解质，A、B错误；蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动，C错误、D正确。
2．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程可表示为()[解析]选B用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量较大的蛋白质容易通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部，后被洗脱出来。
3．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是() A．防止血红蛋白被氧气氧化B．血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能不变[解析]选D磷酸缓冲液的作用是稳定pH，从而维持血红蛋白的结构和功能不变。
4．蛋白质的各种特性的差异，可以作为分离不同种类的蛋白质的依据。
下列可作为分离依据的是()A．分子的形状、大小和溶解度B．所带电荷的性质和多少、吸附性质C．对其他分子的亲和力D．以上三项都是[解析]选D利用蛋白质的各种特性，可以采用不同的方法对蛋白质进行分离和提取。
如蛋白质分子的形状和大小、在不同溶剂中的溶解度、所带电荷的性质和多少、吸附性质以及对其他分子的亲和力等，都可作为分离依据。
5．下面是血红蛋白提取和分离实验中对样品的处理措施，不正确的是() A．采集血样后要高速短时间离心获得血细胞B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净C．在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来[解析]选A采集血样后要低速短时间离心获得血细胞，否则会使淋巴细胞、血小板等混杂在红细胞中。
【人教版】选修一生物：5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案
专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。
2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。
（三）电泳1、电泳是指。
2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。
二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
（一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入（质量分数为），缓慢搅拌 min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。
血红蛋白的提取和分离学案
①目的:去除_______。
②方法:_______________。
③标准:直至上清液不再呈现_____。
(2)血红蛋白的释放。
(3)分离血红蛋白溶液。
①方法:混合液分层。
②分层结果(自上而下):第1层:无色透明的_______。
第2层:脂溶性物质的_______——白色薄层固体。
第3层:_________的水溶液——_____透明液体。
第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。
③结果处理:将试管中的液体用_____过滤,除去_______沉淀层,于分液漏斗中静置片刻后,分出下层的_________液体。
2.透析——粗分离:(1)过程:取1 mL 的_________溶液装入_______中,将其放入盛有300 mL 的物质的量浓度为20 mmol/L 的____________中(pH 为7.0),透析_____ h 。
(2)原理:透析袋能使_______自由进出,而将_______保留在袋内。
(3)目的:去除样品中_________________的杂质。
3.凝胶色谱操作——纯化:(1)凝胶色谱柱的制作↓(2)凝胶色谱柱的装填:凝胶用_______充分溶胀后,配成凝胶悬浮液,_______缓慢倒入凝胶色谱柱内↓①加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面_____，关闭出口 ②加样：用吸管小心地将1 mL 透析后的样品加到色谱柱的_____，注意不要破坏凝胶面③加样后：打开下端出口，使样品渗入_______内↓(4)洗脱:_____下端出口,加入磷酸缓冲液,连接______________,_____下端出口,进行洗脱4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳——纯度鉴定:判断纯化的蛋白质是否达到要求,需要进行___________的鉴定。
鉴定方法中,使用最多的是________________________。
三、操作提示1.红细胞的洗涤:_________、离心速度与_________十分重要。
高中生物选修1学案3：5.3 血红蛋白的提取和分离
课题3 血红蛋白的提取和分离[学习目标]a.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。
b.说明凝胶色谱法的原理和方法。
c.说出电泳的基本原理和方法。
[知识点梳理]一、基础知识（一）血红蛋白提取与分离的依据1. 2. 3. 4. 5.（二）方法及原理凝胶色谱法：根据的大小分离蛋白质电泳法：根据的差异以及分子的不同分离蛋白质1.凝胶色谱法（1）材料：（2）原理：步骤：混合物上柱→洗脱→ 流动快、流动慢→收集大分子→收集小分子原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3.电泳法（1）概念：指带电粒子在作用下发生迁移的过程。
（2）原理：分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
琼脂糖凝胶电泳法：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子在电场中迁移速度决定于所带电荷性质的的不同。
聚丙烯酰胺凝胶电泳法：在凝胶中加入SDS，使蛋白质解聚成单链，与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，使其迁移速度完全取决于。
二、实验操作（一）样品处理（1）红细胞的洗涤：①目的：。
②为防止血液凝固，应先加入柠檬酸钠。
③所用洗涤液：是五倍体积的（质量分数为0.9%的NaCl溶液）。
④缓慢搅拌，采用低速短时间离心。
⑤洗涤干净的标准是。
（2）血红蛋白的释放：在的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
（3）分离血红蛋白溶液：（方法）离心。
试管中的溶液分为4层，从上往下依次是：①无色透明的。
②白色薄层固体：沉淀层。
③红色透明液体：溶液层。
④暗红色沉淀层：沉淀。
（4）透析：①方法：取1mL血红蛋白溶液装入透析袋，将透析袋放入盛有300mL物质的量浓度为20 mmol/L（pH为7）中，透析12h。
高中生物《血红蛋白的提取和分离》导学案+课后练习题
课题3血红蛋白的提取和分离[学习目标] 1.了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。
2.体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程与方法。
知识点一蛋白质分离的原理和方法知识梳理1.原理蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和□01大小、所带电荷的□02性质和□03多少，□04溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等方面的差异均可用来分离不同种类的蛋白质。
2．凝胶色谱法(1)概念：凝胶色谱法也称做□01分配色谱法，是根据□02相对分子质量的大小分离□03蛋白质的有效方法。
(3)常用凝胶：□07葡聚糖和琼脂糖。
(4)分离过程①分离过程示意图②分离原理相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程□08较长，移动速度□09较慢，通过凝胶的时间□10较长；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶□11外部移动，路程□12较短，移动速度□13较快，通过凝胶的时间□14较短，因此可将各种相对分子质量不同的蛋白质分离。
3．电泳(1)概念：是指□01带电粒子在□02电场的作用下发生□03迁移的过程。
(2)原理(3)常用的电泳方法：□04琼脂糖凝胶电泳和□05聚丙烯酰胺凝胶电泳。
①琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，各种分子在电场中迁移速率决定于□06所带电荷性质的差异及分子的□07大小、形状的不同。
②聚丙烯酰胺凝胶电泳：在凝胶中加入□08SDS，使蛋白质解聚成单链，SDS 与各种蛋白质形成□09蛋白质—SDS复合物，SDS所带电荷较多能掩盖不同蛋白质间□10电荷差别，使其迁移速率完全取决于□11分子的大小。
4．缓冲溶液(1)作用在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界□01酸和□02碱对溶液□03pH的影响，维持pH基本不变。
(2)配制缓冲溶液通常由□041～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。
1.什么是洗脱？提示：洗脱是指从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
人教版高二生物选修一：5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案.doc
专题5课题3 血红蛋白的提取和分离一、基础知识（一）凝胶色谱法1、凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。
2、凝胶实际上是一些微小的球体，这些小球体大多数是由构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度；而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
（二）缓冲溶液1、缓冲溶液的作用是。
2、缓冲溶液通常由溶解于水中配制而成的。
3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了，必须保持体外的pH与体内的。
（三）电泳1、电泳是指。
2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各分子的差异以及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。
3、两种常用的电泳方法是和，在凝胶中加入SDS，电泳速率完全取决于，因此，在测定蛋白质分子量时通常使用。
二、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：、、和。
（一）样品处理1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是，采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用离心（500r/min），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层暗红色的倒入烧杯，再加入（质量分数为），缓慢搅拌 min，离心，如此重复洗涤三次，直至，表明红细胞已洗涤干净。
2、血红蛋白的释放：在和作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。
3、分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心（2000r/min）后，试管中的溶液分为4层。
第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明液体，这是，第4层是的暗红色沉淀物。
将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的。
高中生物配套学案：专题五课题血红蛋白的提取与分离含解析
课题3血红蛋白的提取与分离学习目标课程标准1．掌握提取生物大分子的基本过程和方法.(重点)2．理解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理.(重、难点）3．尝试对血液中的血红蛋白进行提取和分离。
尝试蛋白质的提取与分离自主学习·预习热身一、凝胶色谱法1．概念：也称做__分配色谱法__，是根据__相对分子质量大小__分离蛋白质的有效方法.2．原理当__相对分子质量__不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量__较小__的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程__较大__，移动速度__较慢__，而相对分子质量__较大__的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在__凝胶外部__移动，路程__短__,移动速度__快__,从而使__相对分子质量__不同的蛋白质分子得以分离。
二、缓冲溶液1．作用：在一定范围内,抵制__外界__的__酸和碱__对溶液pH 的影响,维持pH__相对稳定__。
2．配制:由__1～2__种缓冲剂溶解于__水__中配制而成，通过调节缓冲剂的__使用比例__就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
三、电泳1．概念：指__带电粒子__在电场的作用下发生的__迁移__的过程.2．原理:在一定的__pH__下,__多肽__、__核酸__等生物大分子的可解离基团会带上__正电__或__负电__，在__电场__的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷__相反__的电极移动。
3．作用：电泳利用了待分离样品中各种分子__带电性质__的差异及分子本身的__大小__、__形状__的不同,使带电分子产生不同的__迁移速度__，从而实现样品中__各种分子__的分离。
4．方法：常用的电泳方法有__琼脂糖凝胶电泳__和__聚丙烯酰胺凝胶电泳__.测定蛋白质分子量时通常使用__SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳__。
四、实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：__样品处理__、__粗分离__、__纯化__和__纯度鉴定__。
导学案课题3血红蛋白的提取和分离
课题3 血红蛋白的提取和分离一、学习目标：尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，了解色谱法，电泳法等分离生物大分子的基本原理二、重点：凝胶色谱法的原理和方法一、凝胶色谱法1、概念：也称做 ;是根据分离蛋白质的有效方法。
2、原理（1)由构成的凝胶,内部有许多贯穿的的。
（2）当不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ,移动速度，而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动,路程 ,移动速度，从而使不同的蛋白质分子得以分离。
二、缓冲溶液1、作用：在一定范围内,抵制的对溶液pH的影响，维持pH .2、配制：由种缓冲剂溶解于中配制而成，通过调节缓冲剂的就可以得到不同pH 范围内使用的缓冲液。
三、电泳1、概念:指在电厂的作用下发生的过程。
2、原理:在一定的下，、等生物大分子的可解离基团会带上或 ,在的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。
3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同，使带电分子产生不同的，从而实现样品中的分离。
4、方法：常用的电泳方法有和。
测定蛋白质分子量时通常使用。
四、实验操作1、样品处理:通过、、等操作收集血红蛋白溶液。
（1）红细胞的洗涤：目的是。
分离时采取，直至上清液中没有 ,表明红细胞已洗涤干净。
(2）血红蛋白的释放:在和的作用下,红细胞破裂,释放出血红蛋白。
（3）分离血红蛋白溶液:把离心后，将试管中的液体用过滤、除去,于中静置片刻后，分离出下层的 .2、粗分离：即透析(1)方法：将血红蛋白溶液装入，将放入一定量适宜浓度的中，透析 .（2)目的：将的杂质除去。
(3）原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。
3、纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。
操作如下：(1)凝胶色谱柱的制作。
（2）凝胶色谱柱的装填①材料:本实验使用的是 .②方法：凝胶用充分溶胀后。
配成 ,一次性倒人色谱柱内。
《血红蛋白的提取和分离》导学案
课题3 血红蛋白的提取和分离【课题目标】1.通过进行探究实验，结合观看实验视频，能够尝试从血液中提取和分离血红蛋白2.通过阅读资料，结合教师讲解，能够了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理【课题重点与难点】课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
【导学诱思】思考1：分离生物大分子的基本思路是什么？思考2：蛋白质的分离和提取的原理是什么？思考3：高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？思考4：人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？一、基础知识：（一）凝胶色谱法（分配色谱法）：1、概念：根据被分离蛋白质的，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来分离蛋白质的有效方法。
2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程，移动速度，而的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在移动，路程，移动速度，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。
3、具体过程：A. 的蛋白质由于 作用进入凝胶颗粒内部而被滞留； 的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在了里之间迅速通过。
B.（1） 混合物上柱；（2）洗脱开始， 的蛋白质扩散进入凝胶颗粒内； 的蛋白质被排阻于凝胶颗粒之外；（3） 的蛋白质被滞留； 的蛋白质被向下移动。
（4） 不同的蛋白质分子完全分开；（5） 的蛋白质行程较短，已从 中洗脱出来， 的蛋白质还在行进中。
（二）缓冲溶液：1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH 发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。
2、作用：能够抵制 的对溶液的的影响，维持PH 基本不变。
3、缓冲溶液的配制 通常由 种缓冲剂溶解于水中配制而成。
调节缓冲剂的 就可以制得 使用的缓冲液。
思考：说出人体血液中缓冲对？思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？颗相对量较相对量较（1）（2） （3） （4） （5）B A（三）电泳：带电性质、分子大小和形凝胶电泳原理示意图1、概念：指发生迁移的过程。
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课题3 血红蛋白的提取和分离
【学习目标】1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白
2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理
【学习重点】凝胶色谱法的原理和方法
【学习难点】样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填
1．基础知识
蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：
（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。
（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
（3）分离过程：（图5－13b）
混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子
【补充】洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。
1．2缓冲溶液
（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，
NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。
1．3凝胶电泳法：
（1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
［思考］阅读教材后，填写下表：
（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。
（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。
2．实验设计
2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？
样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。
【思考】：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？
不是。
因为蛋白质的来源和性质不同，分离方法差别很大。
2.2选择实验材料
（1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？
哺乳动物血液。
因为该细胞中没有细胞核，血红蛋白含量高。
（2）请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。
并思考回答下列问题：
血液由血浆和各种血细胞两部分组成。
血细胞中红细胞细胞数量最多，细胞的含量中，除水以外，最高的化合物是血红蛋白。
该化合物是由两条α-肽链和两条β-肽链构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的亚铁血红素基团。
2.3从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。
洗涤红细胞的目的是什么？
除去血浆蛋白的杂蛋白，有利于后续步骤的分离纯化。
红细胞的洗涤过程为
血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水→缓慢搅拌
10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色
【思考】：加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？
防止血液凝固；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。
【思考】：你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来？
加入蒸馏水，用玻璃棒快速搅拌一段时间。
【补充】：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。
加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。
2.4如何除无机盐离子和小分子有机物质呢？
透析。
半透膜的选择透过性，大分子物质不能通过半透膜，离子和小分子能够通过半透膜。
思考：为何使用pH＝7的磷酸缓冲液？为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量？
维持血红蛋白的正常特性。
有利于杂质分子充分地向外扩散。
2.5凝胶色谱分离蛋白质包括：制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和洗脱。
（1）根据教材图5－19，说出制作色谱柱需要的材料。
（2）色谱柱的制作过程：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱
（3）凝胶色谱柱的装填。
请阅读教材：
色谱柱的装填过程。
（4
调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质3.操作提示
（1）红细胞的洗涤：
洗涤次数不能过少；低速、短时离心。
（2）凝胶的预处理：
沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡
（3）色谱柱的装填：
装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。
（4）色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。
【实例探究】
例1 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来（）
A. 相对分子质量大的
B. 溶解度高的
C. 相对分子量小的
D. 所代电荷多的
例2 蛋白质提取和分离分为哪几步（）
A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化
C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定
D. 样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定
例3用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（）
A路程较长，移动速度较慢B路程较长，移动速度较快
C路程较短，移动速度较慢D路程较短，移动速度较快
【巩固练习】
1. 凝胶色谱法分离蛋白质的依据是（）
A. 对其他分子的亲和力
B. 溶解度
C. 所带电荷多少
D. 相对分子质量的大小
2. 选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料，有何好处（）
A. 血红蛋白是有色蛋白
B. 红细胞无细胞核
C. 红细胞蛋白质含量高
D. 红细胞DNA含量高
3. 将搅拌好的混合液离心来分离血红蛋白溶液时，第二层是（）
A. 甲苯
B. 血红蛋白水溶液
C. 脂溶性物质的沉淀层
D. 其他杂质的沉淀
4. 下列操作正确的是（）
A. 分离红细胞时采用低速长时间离心
B. 红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可
C. 分离血红蛋白溶液是低速短时间离心
D. 透析时要用20mmol/l的磷酸缓冲液，透析12h
5. 下列有关提取和分离血红蛋白的程度叙述错误的是（）
A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液
B. 通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取
C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化
D. 可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度
6. 凝胶色谱法操作正确的是（）
A. 将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴
B. 将橡皮塞下部切出凹穴
C. 插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面
D. 将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片
7.早在上世纪六十年代，在美国的黄石国家森林公园发现了一种嗜热细菌，从这种细菌中分离提取了一种酶，称为TaqDNA聚合酶。
实验得知PCR反应变性时温度为950C，经50个循环后TaqDNA聚合酶仍有65%的活性。
（1）若要培养嗜热细菌，培养基中应有水、碳源、、等营养物质。
在此基础上，培养该菌时需先将培养基____ 。
（2）若将培养细菌的培养基用于植物组织培养，还应加入________ 。
（3）TaqDNA聚合酶可用于PCR，原因是该酶有，因此在PCR扩增时可以加入。
（4）请将下列实验流程图补充完整：
（5）凝胶色谱法和凝胶电泳法是分离蛋白质的两种常用方法，据此回答问题。
①凝胶色谱法分离蛋白质的原理是根据不同大小的蛋白质分子在凝胶柱中的不同而实现分离的：
②使用电泳法分离蛋白质．是利用了待分离样品中各种分子的差异，以及分子本身的、形状的不同。
答案（1）氮源无机盐 pH调至中性或微碱性
（2）植物激素
（3）热稳定性一次性
（4）血红蛋白的释放凝胶色谱柱的填充
（5）①移动速率②带电性质大小。