几种常见的鱼类致病菌及其培养鉴定方法
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爱德华氏菌属1. 迟缓爱德华氏菌
特征:迟缓爱德华氏菌为革兰氏阴性病原菌,短杆菌,大小多在(0.5 ~1)μm×(1-3)μm,无荚膜,亦不形成芽孢,为周毛菌,能运动。生长温度范围为15-42℃,最适为37℃,适宜pH值范围为5.5-9.0。但以pH 7.2较好,耐食盐浓度为0-4%,
培养:该菌在普通营养琼脂培养基上25℃培养24,能形成圆形隆起灰白色湿润并带有光泽呈半透明状的菌落直径约为0.5-1mm,在含5%-10%血液的普通营养琼脂培养基平板
。
2.鲇鱼爱德华氏菌
特征:鲇鱼爱德华氏菌属于爱德华氏菌属,在该属细菌中最难培养。菌体大小约1um×(2-3)um,为小直杆菌,革兰氏染色阴性,无荚膜,不形成芽孢,兼性厌氧,25℃时有动力,在37℃时无动力。菌落大小为0.5mm 左右,圆形光滑、边缘整齐、稍隆起。由鲇鱼爱德华氏菌所引起的鱼类爱德华氏菌病主要是鲇鱼肠道败血症。该病有季节性,常发生于春季和秋季,鳙等可被感染发病,病鱼在咽部及口腔附近出现皮肤出血或淤血、鳃色变淡、突眼症状,解剖可见肾脏和脾脏肿胀,肝脏出血且有坏死灶,腹膜内有血性腹水。
培养:鲇鱼爱德华氏菌除为该属细菌中难养的。在培养基平板上生长较缓慢常需培养约48h才能形成直径1-2mm圆形光滑边缘整齐稍隆起的无色小菌落;二是尽管爱德华氏菌的生化特性都是以37℃培养为明显,但鲇鱼爱德华氏菌则更喜欢较低的温度其最适一般为25-30℃,在37℃时生长缓慢或完全不能生长,尤其是运动力只有在约28℃时才能表现出来且是微弱的。
弧菌属
特征:河流弧菌属于弧菌属,菌体大小为(0.5-0.8)μm×(1.8-2.5 )μm,为革
。
24h)
1. 嗜水气单胞菌
嗜水气单胞菌属于气单胞菌属,革兰氏染色阴性;兼性厌氧,具有呼吸和发酵代谢类型;能利用葡萄糖和其它糖类产酸,常产气无芽孢,不产生荚膜,散在或成双排列,端生单鞭毛(有运动性)的短杆菌,两端钝圆,大小多在(0.6-0.7)μm×1.4μm。菌落特征为圆形光滑、边缘整齐、较隆起、不透明的浅灰黄白色。
嗜水气单胞菌寄主广泛,可引起大宗淡水鱼等发生相应的细菌性败血症,危害鱼的种类最多、地区最广、损失最大。
2.温和气单胞菌
温和气单胞菌属气单胞菌科、气单胞菌属,革兰氏阴性,杆菌(个别菌体稍弯曲),散在或成双排列、两端钝圆、无芽孢,大小多在(0.5-1.0)μm×(1.0-2.0)μm
危害的对象主要是鲫、鲢、鳙、鲤、草鱼、青鱼等。从夏花鱼种到成鱼均可感染,以2龄成鱼为主,引起细菌性败血症。流行时间为3~11月份,高峰期常为5~9月,10月份后病情有所缓和。该病是淡水养殖中危害最大,流行范围最大的一种急性传染病,我国20多个省、市、自治区均有发生。发病严重的养鱼场发病率高达100%,重病鱼池死亡率高达95%以上。
大
分离培养:病原菌分离无菌采取发病细鳞鱼体表溃烂处、背鳍基部、肝脏、脾脏、肾脏等组织分别接种于普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂和TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)平板上,28℃培养24h,挑取单个优势菌落再次划线,将获得的纯培养菌株4℃保存备用。
鉴定方法:气单胞菌的鉴定方法有免疫学鉴定法、生化鉴定法和分子鉴定法。细菌的分离培养28℃培养24h后,在普通营养琼脂上长出圆形光滑、边缘整齐、隆起、不透明、灰白色中等大小的菌落。在麦康凯琼脂上仅划线起始部见微弱生长、薄层的菌苔及无色小菌落。在TSA上菌落圆形光滑、边缘整齐、浅灰白色,未见水溶性褐色色素产生。革兰氏染色可
见大量的革兰氏阴性菌,细菌形态呈球杆菌,成双、短链或成丛排列,无鞭毛,无荚膜。柱状噬纤维细菌
特征:柱状噬纤维菌为噬纤维菌属细菌中常见的致病种,为中等大小但偏长的杆菌,菌体长为2-12um ,宽为0.4um左右,两端不尖,无荚膜及芽孢,适宜生存温度为25-30℃。在噬纤维菌培养基中能良好生长可形成黄色菌落,在液体培养基中静止培养时可形成黄色菌膜、若震荡培养则呈均匀混浊生长,菌体一般培养到第4天后开始老化,最高耐NaCl浓度为5g/L,在海水培养基中不能生长。在pH6.5-7.5生长良好,
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生化检验:
免疫学检测:血清学检验,涂片上有棕色细长颗粒,颗粒大小与杆菌一致