维生素C的定量测定

实验八维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
一目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。

了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。

二．实验原理
维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。

它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。

维生素C具有很强的还原性。

还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。

在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。

因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时，维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。

一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。

所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。

如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。

三．实验材料及设备
1．材料
新鲜青菜或者是水果
2．仪器
电子天平
3．器材
微量滴定管：5ml*2 移液管：10 ml*2 容量瓶：50 ml*2 量筒：50 ml 锥形瓶：50 ml*4 研钵、漏斗：各1
四．试剂的配制
2%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中。

1%草酸溶液：草酸1g溶于100ml蒸馏水中。

2，6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO
3的热水中，冷却后加水稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（4℃）约可保存一
周。

每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。

标准抗坏血酸溶液（1mg/ml ）: 准确称取100mg 纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml ，贮于棕色瓶中，冷藏。

最好临用前配制
五．操作步骤
1．样品液的制备
（1）取材：称取4.0g 洗净、切碎并混匀的新鲜青菜。

（2）研磨：样品置研钵中，加5ml 2%草酸溶液通过漏斗将样品提取液转移到50ml 容量瓶中。

残渣再用2%草酸溶液提取2-3次，提取液及残渣一并转入容量瓶，2%草酸溶液约为35ml 。

（3）定容：最后用1%草酸溶液定容至50ml
（4）过滤：提取液摇匀，过滤，滤液备用。

2．样品的测定
吸取滤液20ml ，放入50ml 的锥形瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至出现粉红色在15秒内不消失为止。

记录所用滴定液体积。

3．空白测定
在另一50ml 的容量瓶内，放入35ml 的2%草酸溶液，并用1%草酸溶液定容，摇匀。

取此液20ml ，放入另一50ml ，锥形瓶内，用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，记录滴定液用量。

样品提取液和空白实验各做2份，滴定结果取平均值进行计算。

六．结果处理
(-)100
C mg/100g A B V V C T
D W ⨯⨯⨯⨯维生素含量（样品）＝
式中：VA 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；
VB 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；
C 为样品提取液的总毫升数；
D 为滴定时所取的样品提取液毫升数；
T 为1ml 染料能氧化抗坏血酸毫克数
W 为待测样品的重量（g ）。

注：标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。

由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸（取10ml 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。

思考题：
1．为了测得准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？
2．试简述维生素C的生理意义。