交叉配血
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交叉配血(凝聚胺法)
1、检验目的:
规范操作程序,保证受血者用血安全。
2、实验原理:
聚凝胺(ploybreene),一种高价阳离子季胺盐多聚物,溶解后能产生很多正电荷,使红细胞之间距离减少,能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集,则凝集不可逆。在检测抗体活性的聚凝胺试验中,红细胞与血清首先在低离子介质中孵育,来促进抗体与红细胞结合,然后加入聚凝胺来凝集细胞。离心后,凝集的细胞不再悬浮,加入重新悬浮液,聚凝胺的凝集作用可通过加入椽酸钠而中和,使正常红细胞的凝集解散,而抗体引起的凝集仍存在。
3、样本要求:
输血前3天内抽取的抗凝静脉血,禁止使用溶血或已污染的血样,标签不全者拒收。
4、材料:
试剂(聚凝胺测定配套试剂盒)
(1)低离子介质溶液
(2)聚凝胺试剂
(3)重新悬浮液
(4)阳性对照溶液
5、仪器:
5.1 白洋80C自动平衡离心机
5.2 电热恒温水箱
5.3 光学显微镜
6、操作步骤:
6.1. 取玻璃试管,标记主次侧及对照管,以生理盐水洗涤受者红细胞三次,配成3-5%红细胞悬液。主侧加受血者血清(浆)2滴,加献血者3-5%红细胞悬液1滴;次侧加献血者血清(浆)2滴,加受血者3-5%红细胞悬液1滴。对照管加入阳性对照血清2滴,再加入供
(献)者5%红细胞悬液1滴。
6.2.每管各加低离子介质溶液2滴,混合均匀,室温浮育一分钟。
6.3.每管各加2滴0.05%聚凝胺溶液,混合后静置15秒。
6.4.3000rpm离心30-60秒,检查上清有无溶血反应,若无,倾去上清液。轻轻摇动试管,观察有无凝集,如无凝集,必须重做。
6.5.加入2滴重新悬浮液,并轻轻混合,肉眼或显微镜观察结果。
6.6.结果判断:如凝集散开,则为聚凝胺引起的非特异性凝集,为配血相合;如凝集不散开,则为抗原抗体结合的特异性反应,为配血不相合,结果须在3分钟内判读。
7、影响因素和药物干扰:
7.1在室温较低时,某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性。遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。
7.2若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须多
加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
7.3 红细胞悬液以5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当,反应不明显易误判。
7.4 各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集,部分溶血时,可溶性血型物质中和了相应的抗体。
8、操作注意事项:
8.1 试管,滴管吸头和玻片必须清洁干燥,防止溶血。
8.2 操作方法应按规定,先加血清,然后再加红细胞悬液,以便容易核实是否漏加血清。
8.3 离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防假阳性或假阴性结果。
8.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集,继发性凝固及线状排列的区别。