微生物无菌操作技术共29页文档
微生物无菌操作技术
⑥接种
在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培 养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。有时也可用接种 针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同 菌种的生长特点。
⑦塞管塞 取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将试管塞旋上。 ⑧将接种环灼烧灭菌。
桶内消毒； ⑧操作时禁止再培养物上方移动手臂；
（2）接种 1、接种的一般流程 接种工具灭菌 防止污染标本
接种工具冷却
沾取标本
接种
接种工具灭菌 防止污染环境
2、到平板
3、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面 培养基上的接种方法。
用于好气性微生物的接种。
具体操作： ①贴标签：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓 名等，贴在距试管口约2到3厘米处，也可使用记号笔标记。 ②点燃酒精灯。 ③接种： 1）手持试管 将菌种管和待接斜面的两支试管用大姆指和其他四指握在左手中，使中 指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。
②旋松管塞 先用右手松动试管塞，以便接种时拔出 ③接种环灼烧灭菌 右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然 后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌， 重复此操作，再灼烧一次 ④拔管塞 用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种试管和待接试管的试管塞 ，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫) ⑤取菌 待接种环冷却后，轻沾取少量菌体或胞子，然 后将接种环移出菌种试管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。
微生物实验无菌操作
微生物接种：将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物 体内的过程。微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作 技能。
微生物实验室无菌操作技术要求
微生物实验室无菌操作技术要求无菌操作是在微生物实验室中进行微生物培养和实验时必须遵守的一项重要技术要求。
无菌操作的目的是在避免外源性污染的同时，确保培养物或实验结果的准确性和可靠性。
以下是微生物实验室无菌操作技术的要求：1. 实验器材和物品的处理- 所有实验器材和物品必须事先经过高温高压灭菌或其他有效的消毒措施，以确保其无菌状态。
- 实验器材和物品在使用前应进行有效的密封包装，以防止在运输和储存过程中的细菌污染。
- 使用过的实验器材和物品应进行正确的处理和消毒，以防止细菌或病原体的扩散和传播。
- 定期检查实验器材和物品的无菌状态，必要时进行再次消毒或更换。
2. 实验操作区域的准备与维护- 实验操作区域应定期清洁和消毒，以确保其无菌状态。
- 实验操作区域内应禁止非实验人员入内，并设置明显的警示标识。
- 确保实验操作区域的通风良好，并保持恒定的温度和湿度。
- 实验台面、操作仪器和座椅等表面应定期消毒，以杀灭潜在的细菌和病原体。
3. 实验人员的个人卫生要求- 实验人员应穿戴干净、无菌的实验服，并正确佩戴手套、口罩和防护眼镜等个人防护装备。
- 实验人员在进行无菌操作前应充分洗手，并使用有效的消毒剂进行手部消毒。
- 实验人员应定期接受相关培训，了解无菌操作的要求和注意事项，并时刻保持警惕。
4. 实验操作的注意事项- 在进行无菌操作时，应尽量减少空气中的颗粒物，避免引起微生物污染。
- 实验操作过程中应避免直接触碰培养物和实验器材，以防止细菌的传播和扩散。
- 所有操作均应在实验室的电子线束消毒器或火焰灭菌器下进行，以确保操作区域的无菌状态。
- 实验操作结束后，应及时清理实验操作区域，并进行必要的消毒措施，以预防下次操作时的污染。
以上是微生物实验室无菌操作技术要求的主要内容。
在实验室工作中，严格遵守无菌操作的要求，能够确保实验结果的可靠性和重复性，同时保护实验人员的健康和安全。
微生物检验的基本操作技术
微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。
（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
微生物的无菌操作及接种技术
实验用品
实验用品如培养基、试剂 、玻璃器皿等应经过严格 灭菌处理，确保无菌状态 。
无菌操作原则与规范
操作前准备
实验人员应穿戴整洁的工作服，戴好口罩和帽子，修剪指 甲并洗净双手。同时，检查实验用品是否齐全、无菌状态 是否良好。
操作后处理
实验结束后，及时清理实验台面，将废弃物放入指定容器 内。对实验用品进行清洗和灭菌处理，确保下次实验的无 菌环境。
生长曲线测定
通过测定微生物的生长曲线， 了解其生长速度、延滞期、对 数生长期、稳定期等生长特点 。
代谢产物检测
检测微生物代谢产生的特定物 质，如酶、酸、气体等，以判
断其生长情况和代谢活性。
05
无菌操作在科研实验 中应用举例
遗传学实验：基因转化和表达分析
基因转化
在遗传学研究中，无菌操作是基因转化的关键步骤之一。通过无菌操作，可以将 外源基因导入到受体细胞中，实现基因的转移和整合。
环境微生物学研究
无菌操作在环境微生物学研究中也非常重要。通过无菌操作，可以研究环境微生物的生长、代谢和相互作用等方 面，揭示微生物在环境中的生态功能和水平，确保实验准确性
严格遵守无菌操作规范
在进行微生物实验时，必须严格遵守无菌操作规范，包括 穿戴实验服、戴口罩和手套、使用无菌器材等，以避免实 验过程中的污染。
注意事项
接种针需灼烧灭菌，避免污染；划线时力度要均匀，避免划 破培养基。
液体培养基接种法
操作步骤
在无菌条件下，用接种环沾取少量菌 液，在液体培养基中轻轻搅动，使菌 液均匀分布在培养基中。
注意事项
接种环需灼烧灭菌，避免污染；搅动 时要轻柔，避免产生气泡。
其他特殊无菌操作方法
穿刺接种法
用接种针沾取少量菌液，穿刺到半固体培养基内部，适用于厌氧菌 等需要特殊环境的微生物培养。
微生物的无菌操作及接种技术
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
பைடு நூலகம்
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙
酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使 环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉 塞再轻轻摇匀。 • 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管 接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名 2) 点燃酒精灯。 3) 接种： （1）手持试管 将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握
在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。 （2）旋松管塞 （3）接种环灼烧灭菌
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
微生物无菌操作技术介绍课件
智能化技术的应用
01
自动化无菌操作：通过智
能设备实现无菌操作的自
动化，提高工作效率
02
智能监控系统：实时监控
无菌操作环境，确保操作
安全
03
优化操作提供依据
04
智能决策支持：根据数据
分析结果，为无菌操作提
供智能决策支持
04 保障产品质量：确保生产过 程中的微生物污染得到有效 控制，保障产品质量和安全
无菌操作的基本原则
防止微生物污染：确保操作环境、 01 设备和人员无菌
保持无菌状态：操作过程中避免污 02 染，保持无菌状态
避免交叉污染：防止不同微生物之 03 间的交叉污染
定期检测：定期对操作环境和设备 04 进行微生物检测，确保无菌状态
微生物检测：无菌操作技术在微生物检测中的应用， 包括样品的采集、处理、检测等步骤。
微生物分离：无菌操作技术在微生物分离中的应用， 包括分离、纯化、保存等步骤。
微生物基因操作：无菌操作技术在微生物基因操作 中的应用，包括基因的提取、扩增、转化等步骤。
生物制药生产
01
微生物发酵：利用微生
物生产药物，如抗生素、
操作注意事项
操作前，确保无 菌操作台和实验 器材已消毒
01
操作过程中，避 免交叉污染，如 使用不同的实验 器材进行不同实 验
03
02
操作过程中，避 免触碰无菌操作 台和实验器材的 表面
04
操作结束后，及 时清理无菌操作 台和实验器材， 并再次消毒
微生物实验室操作
微生物培养：无菌操作技术在微生物培养中的应用， 包括培养基的制备、接种、培养等步骤。
微生物无菌操作技术的应用领域
食品工业：食品生产过程中的微生物
微生物检验的基本操作技术
1）、在固体培养基上，观察： 菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶
性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特 征及迁移性等； 2）、在液体培养中： 表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等； 3）、半固体培养基穿刺接种：
观察运动、扩散情况。
1.点状 2.圆形 3.丝状 4. 不规则形 5.假根状 6.纺锤 状
d.表面：有无生长、性状（膜状、环状）、菌膜厚薄及 表面特征（光滑、颗粒、皱状）；
e.其他：有无特殊气味，色素。如果是糖发酵培养基则 主要观察是否产酸和有无气体。
5）、穿刺接种法（半固体接种）
多用于保存菌种、观察动力及厌氧培养等也可以 用于观察细菌的某些生化反应。 （1）如斜面接种法持好菌种管及培养基管； （2）以灭菌接种针从菌种管取菌，垂直刺入培养基的中 心（半固体或一般琼脂高层）直达近管底部（但不能 完全刺到管底），接种针应沿原路退出； （3）经培养后半固体培养基可观察到：沿穿刺线生长， 线外的培养基清亮表示细菌无动力；穿刺线模糊不清， 或沿穿刺线向外扩散生长，或整个培养基混浊表示细 菌有动力。
③ 处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随 意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。在无 菌室内如需要安装空调时，则应有过滤装置。
2、超净工作台
超净台的使用与保养: （1）风速保持在0.32-0.48米/秒; （2）使用前开启紫外灯照射30分钟以上; （3）让超净台预工作10－15分钟; （4）使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干
（1）取菌技巧 D
1. 调整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取 范围 200 ~ 1000μl)
2. 插上灭过菌之 Tip
(用力插紧)
微生物的无菌操作及接种技术
目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得 纯菌、活菌计数。 方法： ★ 分区划线法：适用于含菌量较多的标本
★ 连续划线法：适用于含菌量较少的标本
2、常用的接种方法
※划线接种
2、常用的接种方法
第一区划线
※划线接种
灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
分区划线法
请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物；
使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
射15min.
定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台等
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分， 现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行 消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
灭菌接种环
杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境
（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种
液体接种
穿刺接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种：
斜面接种示意图
2、常用的接种方法
微生物的无菌操作及接种技术
※ 斜面接种
（4）拔管塞： 用右手的无 名指、小指和手掌边先后 取下菌种管和待接试管的 管塞，让试管口缓缓过火 灭菌(切勿烧得过烫)
※ 斜面接种
（5）取菌: 接种环冷却，轻 沾取少量菌体或胞子， 然后将接种环移出菌种 管，注意不要使接种环 碰到管壁，取出后带菌 接种环不可通过火焰。
※ 斜面接种
开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧乙 酸喷洒擦拭消毒工作台面。
使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭积杂物；
使用完毕，关闭煤气开关或酒精灯； 使用完毕后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照
（3）检查无菌器材是否完备；
（4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒 精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、 鞋。
无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。
射15min.
定期做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
无菌环境的要求与保持 3、无菌器材准备
灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等. 消毒器材：接种试管、无菌室内的凳子、试管架、天平、 工作台等
进入无菌室前的准备
（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定； （2）用紫外线灭菌处理30~60min；
（6）不能用嘴直接吸吹吸管。
（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的 消毒桶内消毒。
无菌操作要求
无菌操作要求
（二）接种的操作方法
介绍微生物培养技术中的无菌操作方法
介绍微生物培养技术中的无菌操作方法微生物培养技术中的无菌操作方法无菌操作是微生物培养实验中非常重要的一项技术。
它的目的是在实验过程中避免微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
无菌操作方法包括无菌室的建立、无菌工具的选择和处理、培养物的制备和传递等。
一、无菌室的建立无菌室是进行无菌操作的核心场所。
它必须具备一定的条件和设备，以确保微生物不会受到外界污染。
首先，无菌室应处于相对孤立的环境中，远离噪音、尘埃和人员流动。
其次，无菌室要配备特殊的过滤系统，能够过滤空气中的微生物和灰尘。
此外，无菌室内的温度、湿度和光照等参数也需进行严格控制。
二、无菌工具的选择和处理在进行无菌操作时，需要选择适当的无菌工具。
常用的无菌工具有无菌培养皿、无菌移液器、无菌针筒等。
这些工具在使用前必须先进行清洗和消毒处理。
清洗时可以使用高温高压的蒸汽进行灭菌，也可以使用化学消毒剂对工具进行浸泡消毒。
在清洗完毕后，工具应放置在无菌环境中晾干，以防止二次污染。
三、培养物的制备和传递培养物的制备是无菌操作中的重要环节。
首先，选取合适的培养基，并计量出适当的量放入无菌培养皿中。
接下来，使用无菌移液器将待接种的微生物悬液均匀地滴入培养基上。
在滴入过程中，要注意避免接种枝杈，以免破坏培养基的无菌环境。
培养物的传递是指将培养好的微生物转移到其他培养基上进行进一步生长。
在传递过程中，必须特别注意无菌操作。
首先，要确保传递用的培养基也是无菌的，否则会导致微生物的污染。
其次，使用无菌工具将培养基上的微生物转移到新的培养基上，同时要避免接种枝杈和气泡的产生。
最后，立即将新的培养基密封好，以免被外界的微生物污染。
四、无菌操作中的常见问题和解决方法在无菌操作过程中，有时会出现一些常见问题，如污染、不良生长和无法获得纯种菌株等。
对于污染问题，可以通过增加无菌操作的谨慎程度和熟练度来解决。
而对于不良生长和无法获得纯种菌株的问题，则需要进行深入分析，可能需要调整培养基的成分、改变培养条件或尝试其他方法。
微生物无菌操作技术.共29页文档
66、节制使快乐增加并使享受加强。 ——德 谟克利 特 67、今天应做的事没有做，明天再早也 是耽误 了。——裴斯 泰洛齐 68、决定一个人的一生，以及整个命运 的，只 是一瞬 之间。 ——歌 德 69、懒人无法享受休息之乐。——拉布 克 70、浪费时间是一桩大罪过。——卢梭
微生物无菌操作技术.
56、极端的法规，就是极端的不公 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克