植物可溶性糖测定教案资料
植物组织中可溶性糖含量的测定
九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。
了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。
按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法
实验七植物体内可溶性糖含量的测定蒽酮法一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质;不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量;因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低;蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸还原性和非还原性作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比;蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同;当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色;上述特定的糖类物质,反应较稳定;该法特点：灵敏度高,测定量少,快速方便;三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管3支漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂1200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml;2蒽酮试剂：1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏；3浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液;在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值OD,以标准葡萄2.样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中;置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用;3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂;再缓慢加入5ml浓H2SO4注意：浓硫酸遇水会产生大量的热,盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟;冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值;查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量μg;五、结果计算样品含糖量g/100g鲜重=查表所得糖含量μg×稀释倍数×100/样品重g×106六、注意事项1加浓H2SO4时应缓慢加入,以免产生大量热量而爆沸,灼伤皮肤,如出现上述情况,应迅速用自来水冲洗;2水浴加热时应打开试管塞;七、思考题本法多用于测定什么样品。
植物组织中可溶性糖含量测定
实验报告课程：植物生理学实验题目：植物组织中可溶性糖含量的测定一.【实验原理】植物的代谢活动随着植物的发育过程而不断发生着变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，在种子萌发过程中，在光合作用受到影响时和受到外界环境的胁迫等情况下植物可溶性糖含量都会发生变化。
了解植物可溶性糖含量的变化，在生理上与实践上都有重要意义。
蒽酮比色法是常用的测定可溶性五碳糖和六碳糖的方法，糖在硫酸的作用下脱水生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物，在一定的浓度范围内颜色的深浅与糖含量成正比，可以用比色法测定。
该法简便，但没有专一性，绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应产生颜色。
二.【实验步骤】1、标准曲线的绘制2、可溶性糖的提取3、提取液的显色及比色三.【实验结果】实验中测得的数据如下所示：若以1号管调零，处理后数据如下：作出标准曲线如下：将y=0.261，0.269，0.247分别代入上述函数公式，得到：x=45.000，46.379，42.586；即三样品溶液中糖浓度分别为：45.000μg／mL，46.379μg／mL，42.586μg／mL。
样品中可溶性糖含量（m g·g-1）= A × c／(W × 103)式中，A——植物样品稀释后的体积（mL）；C——提取液的含糖量（μg／mL）；W——植物组织鲜重（g）。
四.【讨论】1、误差分析实验中的误差来源主要有：(1)植物材料称取的误差；(2)植物样品在转移过程中的损失；(3)最后过滤得到的提取液中尚有未除尽的醋酸铅；(4)移液管未润洗等等。
2、注意事项(1)样品提取液的显色应与标准曲线的绘制同步；(2)比色时以蒸馏水调零；(3)醋酸铅一定要除尽；(4)在样品转移过程中，尽量减少材料的损失；(5)进行第二次过滤时要更换滤纸，并将漏斗洗净。
3、植物组织中糖的测定方法还有很多种，举例说明它们的原理和优缺点。
(1)苯酚-硫酸法原理：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
植物生理学实验：实验四 植物可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)
作业
得出实验结果后，根据标准曲线算出的含糖量 ，写于实验报告上。（之前问题）
管号
0
1
2
345
Hale Waihona Puke 100mg/L葡萄糖标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
水（mL）
2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
蔗糖含量（μg）
0 20 40 60 80 100
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5mL和
5mL浓硫酸，用玻棒混匀，沸水浴中准确保温1min取
实验结果计算与分析
从标准曲线查得的糖含量（μg）
植物样品含糖量（％）＝
(C× VT× N) × 100
(Vs× W× 106)
C-从标准曲线查得的糖含量（μg）
VT-提取液体积（ml） VS-吸取样品液体积（ml） N-稀释倍数（根据实际情况）
W-样品重（g）
注意事项
加浓硫酸时应缓慢，以免产生大量 热量而爆沸，灼伤皮肤，如出现上 述情况，应擦干后迅速用自来水冲 洗。
出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。以标准蔗
糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。
实验步骤
2. 植物样品中可溶性糖的提取（其他组做，数据共享） 将植物叶片剪碎混匀，准确称取0.3g3份，加入研钵中，
再加入2-3mL水和少量石英砂，研磨后转入试管中，用 水再洗涤2次，均转入试管中。将试管置于沸水浴中提取 30min，提取液过滤至25mL容量瓶，反复冲洗试管及 残渣，定容至刻度。 3. 显色测定（同上）： 吸取0.5mL提取液于试管中，加水1.5mL，蒽酮乙酸乙酯 试剂0.5mL和5mL浓硫酸，混匀，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。
植物可溶性糖含量的测定
植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量讨论对果树的品质育种具有重要意义。
一、试材及用具1．试材新奇或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理本试验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定肯定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖马上使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过试验，学习并把握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO45H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。
2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H44H2O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。
3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。
测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。
5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)22H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL稀释至100mL。
实验8 植物可溶性糖的测定
测定蔗糖
不预处理
间苯二酚比色法
测定果糖
葡萄糖氧化酶法
测定葡萄糖
利用实验间隙，观看视频材料：
《用一种生物材料设计一组生物实验的方法》
1、应用此法测得的糖具体包括哪几种糖类？
2、用此法测定时，什么样的材料需要用活性碳脱色？
3、请设计一实验，用本实验获得的同一份提取液在测 定可溶性糖含量的同时，一并测定蔗糖、葡萄糖和果 糖？这种测定方法比分别测定有什么优点？
蒽酮比色法
测定可溶性总糖
同 一 份 乙 醇 抽 提 液
预处理
间苯二酚比色法
3 绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其 稀释0、20、40、60、80μg/mL系列浓度， 按上述方法分别测其OD值，绘制标准曲线。
计算：
V 为植物样品提取液的体积 C 为提取液糖的浓度 W 为植物样重或为颗粒数 可溶性糖 % = CV/W 同一种子类型之间按每粒种子 计算
实验结果：
实验八
植物可溶性糖的测定
实验原理
糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再 与蒽酮作用生成绿色络合物，颜色 的深浅与糖含量有关，在625 nm波 长下OD值与糖含量成正比，由于蒽 酮试剂与糖反应的呈色强度随时间 变化，故必须在反应后立即在同一 时间内比色。
实验材料
小麦干种子 小麦萌发种子 萝卜干种子 萝卜萌发种子 均为市售，萌发条件为25℃ 下黑暗萌发3天。
实验步骤
1 可溶性糖的提取：
分别取2粒干种子和萌发种子于研 钵中，加80%乙醇少许，磨成匀浆，倒 入大试管中， 再用80%乙醇洗涤，水浴 80℃半小时，冷却后转移至10ml量筒， 并用80%乙醇定容至10ml。过滤，所得 的透明液体即为可溶性糖提取液。
植物可溶性糖的测定
植物组织可溶性总糖的测定2015-8-16一、目的：测定植物组织中总糖（可溶性碳水化合物），用以研究体内能量储藏和渗透物质积累情况，检测范围为10-100ug/ml。
因淀粉在超过45度可能糊化水解，如果已知样品含淀粉较多，应考虑70%乙醇提取或冷水提取（不包括淀粉）或1:4盐酸水解（包括淀粉）。
二、样品前处理：鲜样要称重后105度烘干，称干重，计算含水量，粉碎。
三、可溶性总糖的提取：干样测定完含水量后，称取样品0.25g，或鲜样2.50g，放入250ml 消煮管中，加水100ml，调整消煮炉温度约150-160度，煮沸30分钟，冷却，加水定容，取上清液过滤，滤液或离心上清液以水稀释适当倍数（5-10倍左右）待测。
注：西红柿总糖：取1ml匀浆，用水稀释1000倍，取2ml测定。
四、测定4.5.1试剂配制：4.5.1.1 80%硫酸：200ml水加入到1000ml烧杯中，在搅拌和水冷条件下，缓慢加入800ml浓硫酸，冷却备用。
4.5.1.2 蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到1000ml 80%（V/V）硫酸中，搅拌均匀，冷却后备用。
蒽酮试剂当日配制使用。
4.5.1.3 100μg/ml 葡萄糖标准液制作：称取0.0100g无水葡萄糖（分子量180.16）或者1水葡萄糖（分子量198.18）0.0110g溶于水中，加0.5ml浓硫酸，定容100ml。
4.5.2标准曲线浓度μg/ml(ppm) 0 20 40 60 80 100 样品ml葡萄糖标准液（ml） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 22 水 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0蒽酮试剂ml 84.5.3 总糖测定：取2ml提取液于试管中，在冷水浴中加8ml蒽酮试剂，沸水浴5分钟，取出迅速冷却，于625nm测定含糖量。
同时取上表标准液2ml加8ml蒽酮同样测定。
如果含糖量太低，可适当减低稀释倍数，如果糖含量太，可适当增加稀释倍数。
此方法适于含糖量1-10%样品的测定，如果超过此含量，需稀释后测定，低于此含量，需增加称量样品。
植物体内可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内，与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料：苹果2.仪器：分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂：蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中）葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL）。
样品溶液（可自选待测物制成样品溶液。
eg：称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
）四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作：取七支干燥洁净的试管编号后，按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀，迅速置于冰浴中，传各管都加人蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置冰浴中迅速冷却。
植物组织中可溶性糖含量的测定
实验15 植物组织中可溶性糖含量的测定一、目的学会植物组织中可溶性糖含量的测定方法，了解不同的植物组织可溶性糖含量的高低。
二、材料用具及仪器药品1.材料：水果或蔬菜2.仪器用具：分光光度计、天平、恒温水浴锅、研钵、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、试管、移液管、漏斗3.药品：乙醚、草酸钠、饱和醋酸铅标准葡萄糖母液：在电子天平上称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容至500ml，则得每ml 含糖量为200ug的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g蒽酮结晶粉末，溶解于1000ml稀硫酸溶液中即得。
[稀硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84）稀释成1000ml而成]三、原理植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。
H2SO4糖糠醛脱水糠醛+蒽酮蓝绿色的缩合物四、方法步骤1.标准曲线的制作。
取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液各10毫升，浓度分别为每毫升含糖0、25、50、75、100、120、150、200微克。
将试管编号，依次将每管中加入1毫升上述葡萄糖标准溶液及5毫升的蒽酮试剂，震荡使之完全混合，在沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后在分光光度计波长620纳米下比色，测定各溶液的光密度，以光密度为纵坐标，糖溶液浓度为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
2.测定样品的可溶性糖含量称取重量5g的新鲜植物叶子，于研钵中仔细研磨，研磨时加乙醚少许，直至为止，倒入烧杯中，用热水（70o C）洗涤研钵，洗涤液并入烧杯中，再加入蒸馏水约30～40ml。
将烧杯放在水浴锅上加热，保持温度70～80o C半小时，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止，然后将此混合物连同残渣一并洗水100ml容量瓶中，加水至刻度，充分摇荡，用漏斗过滤到三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2——0.4g）的草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、目的掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。
二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。
其反应式如下：显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。
本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。
蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。
2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。
3.试剂及配制：蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。
该试剂不能久贮，宜用前配制。
100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。
四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。
2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。
3.糖含量测定吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。
随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。
植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法)
植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法) 实验15 植物组织中可溶性糖含量测定(苯酚法)植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以糖含量作为重要指标;植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。
一、原理苯酚法测定可溶性糖原理:植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛(分子式见蒽酮法)能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10,100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min以上。
二、材料、仪器设备及试剂(一)材料:新鲜的植物叶片。
(二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 水浴锅;3. 刻度试管;4. 刻度吸管。
(三)试剂:1. 90,苯酚溶液称取90克苯酚(AR)，加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月;2. 9,苯酚溶液取3ml90,苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用;3. 浓硫酸(比重1.84);4. 1,蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80?下烘至恒重，精确称取1.000克。
加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度;5. 100μg/L 蔗糖标准液精确吸取1,蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。
三、实验步骤1. 标准曲线的制:向试管内加入1ml9,苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5,20S加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。
然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2. 可溶性糖的提取取:取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10,0.30g，共3份(或干材料)，分别放入3支刻度试管中，加入5,10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。
实验8 植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)
实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。
3.糖含量测定用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml 蒽酮试剂。
实验8植物组织中可溶性糖含量测定(蒽酮比色法)
实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
上述特定的糖类物质，反应较稳定。
该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。
（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。
实验四可溶性糖含量测定(精)
四、实验方法
1．葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同 浓度的标准葡萄糖溶液。 在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓 H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟， 取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的 光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度 值为纵坐标，作出标准曲线。
三、实验材料、仪器及试剂
1．材料：白菜叶、柑桔 2．仪器：分光光度计 恒温水箱 20ml具塞刻度试管（3支） 漏斗 100ml容量瓶 刻度试管 试管架 剪刀 研钵 3．试剂： （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏 水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至 50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸
2．样品中可溶性糖的提取 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸 馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中， 用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度 试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过 滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容 至刻度，摇匀备用。
3．糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml 水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意： 浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇 匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与 0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷 却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查 标准曲线上得现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
实验四 可溶性糖含量测定
指导老师：王小燕
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定
为农业生产提供理论依据和实 践指导
Part Four
实验操作技巧和注 意事项
实验操作技巧
准确称取样品， 保证测量精度
严格控制实验条 件，如温度、pH 值等
使用合适的提取 剂，充分提取可 溶性糖和可溶性 蛋白
测定过程中要避 免污染，确保实 验结果的准确性
实验安全注意事项
实验操作前必须穿 戴好防护服和护目 镜
实验前准备：确保实验器具干净、无 菌，准备好所需的试剂和材料。
样品处理：将植物样品进行研磨、离 心，取上清液进行测定。
测定方法：采用分光光度法进行测定， 记录吸光度值。
结果计算：根据标准曲线和吸光度值 计算可溶性蛋白的含量。
注意事项：实验过程中要避免交叉污 染，确保试剂的准确性和有效性。
Part Three
实验结果分析和应 用
数据处理和结果分析
数据处理方法：采用Excel或类似软件进行数据整理、计算和绘图 结果分析：比较不同处理或不同组织之间的可溶性糖和可溶性蛋白含量 差异，分析其可能的原因和生物学意义 可靠性检验：进行统计学分析，如t检验或方差分析，以确定数据可靠性
结果呈现：以表格、图表等形式展示实验结果，便于观察和分析
避免使用过期的试 剂和仪器
实验结束后及时清 理现场，确保安全
实验室内禁止吸烟 和饮食
实验误差控制和数据处理方法
实验误差来源： 取样、试剂加 入、读数等环
节
误差控制措施： 准确称量、规 范操作、多次 测量求平均值
等
数据处理方法： 统计、图表绘 制、计算变异
系数等
数据可靠性分 析：置信区间、
误差范围等
实验材料和试剂
实验材料：植 物组织样品
试剂：乙醇、 酚酞、氢氧化 钠、硫酸铜、 双氧水、亚甲
植物组织中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定XXX,YYY,ZZZ(版权所有，仅限个人)一.实验目的1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。
2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
二、实验原理：（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。
（二）测定：蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。
该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。
三、实验材料：大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤：1．标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。
显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。
比色：测定A600nm的吸光度值。
浓度：ug/mL050100150200吸光度：a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线：．可溶性糖的提取：称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~ 40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
植物可溶性糖含量的测定
实验8 植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。
因此，可溶性糖的定量研究对果树的品质育种具有重要意义。
一、试材及用具1．试材新鲜或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL 容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理本实验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4•5H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。
2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H4•4H2O，分析纯）138g 溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。
3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。
在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。
测定时，取1%转化糖液25.00mL 放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。
5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2•2H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL 稀释至100mL。
实验四___植物组织中可溶性糖含量的测定
按“SET”进行设置，按“↓翻页”可在标样间切换，设置完毕后。 按“100T％”调零，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
参比测量后按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
输入标号后，出现：
请将样品拉入光路！ ENT确认
按“ENT”确认，拉动拉杆，进入下一比色皿的测量。测量结 束后，得到标准曲线，按“ESC”退回上一层界面。
723G型分光光度计“标准曲线”建立方法
浓度测量 1 测量 2 AC建 曲线 3 置入 曲线 1-4选择 4 参数 PRN打印 设置 进行此功能操作流程如下：
在主界面下，按“2”进入“浓度测量”功能，出现如下界面：
按“2”进入“AC建曲线”功能，出现如下界 面： 比色皿： 测建曲线 波长： 标样个数： 标样A1此功能是对样品的测量，需 要有参比杯做对照。）按“ENT”，出现：
请将参比杯拉入光路！ ENT确认
测量后，按“ENT”，出现：
请置入样品比色皿标号：
依次测量。 按“3”进入“置入曲线”，（此功能主要用于标准曲线做 完后无法及时做样品测量，故记下曲线公式，在进行测量 前直接输入曲线）页面如下： 置入曲线 当前曲线：C= A+ SET修改↓翻页
实验四植物组织中可溶性糖含量的测定可溶性固形物含量测定可溶性糖含量的测定可溶性蛋白含量测定可溶性糖含量测定植物叶绿素含量的测定植物叶绿素含量测定可溶性糖的测定方法可溶性固形物的测定蒽酮法测定可溶性糖
实验四 植物组织中可溶性糖含量 的测定
一、实验目的：掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的 提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的 使用程序。 二、实验原理：（P48） 三、实验材料：绿豆黄化苗四、实验步骤： 1.可溶性糖的提取：材料不需烘干（1 g鲜重）加入10 mL
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植物可溶性糖测定
植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。
在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。
实验用品
721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸
试剂：活性炭，酒精（80%）
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。
实验步骤
1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精
4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色
30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。
按上述方法分别测
得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。
试剂（ml) 管号
1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.9
80%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1
蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5
葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180
样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)
可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%
可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。
准确称取一定量新鲜叶片置于预冷的研钵内,加入5 mL 10 %三氯乙酸(TCA) ,于冰浴中研磨匀浆以4000 r/ min 离心10 min。
吸取上清液2 mL(对照加2 mL 蒸馏水) ,加入2 mL 0.6 % TBA (用10 % TCA 配置) ,混匀物于沸水浴上反应15 min ,迅速冷却后再离心。
取上清液于450 nm 波长处测定光密度。
可溶性糖的浓度(mmol/ L) = 11.7
,然后进一步换算成叶片可溶性糖含量,单位为μmol/ g ,FW。
D450。